楊建林，金西成，黃潔，單敏

（1.寧夏回族自治區(qū)西吉縣人民醫(yī)院，寧夏固原756299；2.陜西省西安市食品藥品檢驗所，陜西西安710054）

氣相色譜法測定苦參素提取過程中有機溶劑殘留量

楊建林1，金西成1，黃潔2，單敏2

（1.寧夏回族自治區(qū)西吉縣人民醫(yī)院，寧夏固原756299；2.陜西省西安市食品藥品檢驗所，陜西西安710054）

目的建立測定苦參素提取過程中有機溶劑殘留量的氣相色譜（GC）法。方法色譜柱為0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球（401有機擔(dān)體），2m×3.2mm玻璃柱，進樣口及檢測器溫度為220℃，柱溫為130℃，N230mL/min，H230mL/min，Air300mL/min，S 101×23，進樣量為100μL。結(jié)果二氯甲烷及氯仿線性范圍均為2～10μg/mL；二氯甲烷RSD為0.1%，最低檢出限為0.201 9 ng，定量限為0.605 7 ng；氯仿RSD為0.3%，最低檢出限為0.218 6 ng，定量限為0.655 8 ng。二氯甲烷的平均加樣回收率為99.73%（n=9），氯仿的平均加樣回收率為100.21%（n=9）。結(jié)論該法線性關(guān)系、精密度及回收率均較良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于苦參素提取過程中殘留二氯甲烷及氯仿的測定。

氣相色譜法；苦參素；二氯甲烷；氯仿

苦參素是苦參堿的N-氧化物，是從豆科植物苦豆子中提取分離得到的生物堿，主要成分為氧化苦參堿［1］，在一定條件下可轉(zhuǎn)化為苦參堿［2］，具有多方面的藥理作用和功效，如抗炎、抗病毒、抗肝纖維化、保肝降酶、抗腫瘤、升高白細胞、抗心律失常等作用［3-4］。因其不良反應(yīng)較少［5］，故被廣泛應(yīng)用于臨床。本試驗中建立了檢測苦參素提取過程中有機溶劑二氯甲烷及氯仿殘留量的氣相色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

GC-14C型氣相色譜儀（日本島津公司），包括FID檢測器，N2010色譜工作站?？鄥⑺兀ㄎ靼哺唤萆锛夹g(shù)有限公司試制，批號為20011123，20011127，20011202）；二氯甲烷、氯仿（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，含量不小于99.5%）；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球（401有機擔(dān)體），2m×3.2mm玻璃柱，進樣口及檢測器溫度：220℃；柱溫：130℃；N2：30 mL/min，H2：30 mL/min，Air：300mL/min，S：101×23；進樣量：100μL。理論板數(shù)按二氯甲烷峰及氯仿峰計算。

2.2 溶液制備

分別精密稱取二氯甲烷及氯仿適量，加無有機物的水配制成4μg/mL的溶液作為對照品溶液。取本品0.3 g，精密稱定，置10mL容量瓶中，加無有機物的水適量，溶解，并稀釋至刻度，靜置，取上清液，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別取二氯甲烷及氯仿適量，精密稱定，分別加水配制成10，8，6，4，2μg/mL的溶液，進樣100μL，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、進樣質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得二氯甲烷回歸方程Y=3 019.4X+663.3，r=0.997 9（n=5）；氯仿回歸方程Y=35 253X+5 509.3，r=0.996 6（n=5）。結(jié)果表明，二氯甲烷及氯仿質(zhì)量濃度均在2～10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取二氯甲烷對照品溶液（6μg/mL）及氯仿對照品溶液（6μg/mL）各100μL，連續(xù)進樣5次，測定，計算峰面積。結(jié)果的RSD分別為0.1%，0.3%（n=5），表明儀器精密度良好。

檢出限與定量限確定：取二氯甲烷及氯仿適量，分別加水配制成10，8，6，4，2μg/mL的溶液，進樣100μL。結(jié)果于2μg/mL質(zhì)量濃度檢出二氯甲烷峰及氯仿峰，二氯甲烷和氯仿的檢出限分別為0.201 9 ng和0.218 6 ng；定量限分別為0.605 7 ng和0.6558 ng。

重復(fù)性試驗：依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣5次測定。結(jié)果，二氯甲烷、氯仿含量的RSD分別為0.1%和0.2%（n=5），表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，2，4，8，12，24 h時進樣測定。結(jié)果二氯甲烷、氯仿峰面積的RSD分別為0.5%和1.0%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取本品0.15 g，精密稱定9份，分別置10 mL容量瓶中，分別精密加入二氯甲烷、氯仿對照品溶液（10μg/mL）0.8，1.0，1.2mL，加無有機物的水稀釋至刻度，依法制備供試品溶液，分別測定結(jié)果，見表1。

2.4 樣品含量測定

按擬訂方法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下，進樣測定3批樣品中二氯甲烷、氯仿的含量，用外標(biāo)法計算均符合規(guī)定。結(jié)果見表2。

表1 二氯甲烷和氯仿加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

表2 樣品中二氯甲烷及氯仿含量測定結(jié)果

3 討論

苦參素的提取是利用苦參生物堿與酸結(jié)合成鹽溶于水，與其他酸水不溶性雜質(zhì)分離，再用氫氧化鈉堿化，堿液用有機溶劑萃取，回收有機溶劑，得總生物堿，將總生物堿溶于乙醚。因苦參堿在乙醚中溶解而氧化苦參堿不溶，而將其二者分離，該方法操作簡單，提取率高，無需特殊生產(chǎn)設(shè)備，通過重結(jié)晶后樣品純度可達98.0%以上。有機溶劑可回收。

苦參素具有喹諾里西啶類生物堿結(jié)構(gòu)，溶于水、氯仿、乙醇，難溶于乙醚、石油醚［6］。苦參素在提取過程中，使用了氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙醇等溶劑，而氯仿、二氯甲烷屬二類殘留溶劑［7］，而其余則屬毒性尚不足的4類溶劑，故根據(jù)藥典要求對其氯仿、二氯甲烷殘留量進行了測定。

［1］常萍，袁永榮，王本杰.苦參素片人體生物等效性研究［J］.山東大學(xué)學(xué)報，2004，42（4）：484-486.

［2］史麗娟，石磊，宋光耀.氧化苦參堿肝臟藥理作用的研究進展［J］.世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16（2）：448-450.

［3］吳曉麗，王柏.苦參素微孔滲透泵片的研制［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2010，41（1）：45-49.

［4］劉月.苦參素注射劑系列品種及苦參藥材質(zhì)量控制研究［D］.福州：福建中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

［5］李正蓉.苦參素的藥理與臨床研究進展［J］.華西藥學(xué)雜志，2003，18（6）：435.

［6］張冬青，程怡，鐘翠麗.苦參素脂質(zhì)體的體外釋放度研究［J］.廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報，2011，10（3）：25-27.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅧP.

Determination of Residual Organic Solvents during Oxymatrin Extraction Process by Gas Chromatography

Yang Jianlin1，Jin Xicheng1，Huang Jie2，Shan Min2
（1.Xiji County People′s Hospital，Guyuan，Ningxia，China 756299；2.Xi′an Municipal Institute for Food and Drug Control，Xi′an，Shaanxi，China 710054）

Objective To establish a method for determination of residual organic solvents during the extraction process.Methods The chromagraphy column was 0.25-0.18 mm divinylbenzene-ethyl vinyl benzene type porous polymer beads（401 organic carrier body），2 m×3.2 mm glass column，inlet and detector temperature was 220℃，the column temperature was 130℃，N230 mL/min，H230 mL/min，Air 300 mL/min，S 101×23，and the injection volume was 100μL.Results Dichloromethane and chloroform linear was about in the range of 2-10μg/mL；dichloromethane RSD was 0.1%，the lowest detection limit was 0.201 9 ng，the limit of quantitation was 0.605 7 ng；chloroform RSD was 0.3%，the lowest detection limit was 0.218 6 ng，and the limit of quantitation was 0.655 8 ng.The average recovery of dichloromethane was 99.73%（n=9），and average of chloroform was 100.21%（n=9）.Conclusion The method has good linearity，precision and recovery.The result is accurate and reliable for the determination of residual dichloromethane and chloroform.

gas chromatography；oxymatrin；dichloromethane；chloroform

R284.1；R282.71

A

1006-4931（2015）22-0128-02

2015-05-07；

2015-07-25）