蔣玲玲

【摘要】目的：對新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌細胞轉(zhuǎn)移、侵襲中的影響情況進行調(diào)查。方法：選取我院2012年9月-2014年9月間31例肝癌患者，同時選擇同期來院體檢的35例健康人員，采用實時熒光定量發(fā)對兩組人員外周血細胞中TIPE2表達情況進行檢測，并將結(jié)果進行比較。結(jié)果：正常人群的外周單核細胞水平明顯高于肝癌患者，兩組比較有明顯差異，P<0.05。肝癌患者平均細胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。肝癌患者的細胞遷移數(shù)目平均為（493±11.2）個；健康人群的細胞遷移數(shù)目平均為（1492±46.3）個，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。結(jié)論：TIPE2可能參與到肝癌疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，對肝癌細胞轉(zhuǎn)移和侵襲造成影響。

【關鍵詞】新型免疫分子TIPE2；肝癌；細胞轉(zhuǎn)移

【中圖分類號】R735.7 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0626-01

近年來，我國肝癌的發(fā)病率越來越高，嚴重影響著人們的生活和健康。有研究表示TIPE2是一種新型免疫分子，其在肝癌標本中的表達水平非常低，進而認為其有可能參與了肝癌的發(fā)病過程。為進一步了解TIPE2與肝癌細胞的關系，我院在2012年9月-2014年9月間對新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌細胞轉(zhuǎn)移、侵襲中的影響情況進行調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2012年9月-2014年9月間31例肝癌患者，患者平均年齡為（52.1±5.6）歲，男性14例，女性17例；同時選擇同期來院體檢的35例健康人員，所有人員平均年齡為（50.6±6.2）歲，男性15例，女性16例。

1.2一般方法

1.2.1標本采集：出去患者靜脈血，所有血液均進行抗凝處理。將血液加入生理鹽水中稀釋，而后緩緩滴入淋巴細胞分離液上層，在3000r/min條件下離心振蕩，時間為15min，提取白膜層，收集標本中的外周單核細胞。

1.2.2實時熒光定量實驗：提取外周單核細胞后采用TRIzol 法提取標本總RNA，根據(jù)試劑盒說明將其轉(zhuǎn)錄成CDNA待用。

1.2.3基因轉(zhuǎn)染、陽性細胞克隆篩選：采用Lipo2000脂質(zhì)體對pcDNA3.1-TIPE2表達載體和空白載體細胞進行瞬時轉(zhuǎn)染，所有操作流程均按照試劑盒說明進行。轉(zhuǎn)染后的細胞放置48h，而后進行培養(yǎng)基抗性篩選實驗。

1.2.4劃痕試驗：BEL7402-TIPE2 細胞和BEL7402-pcDNA3.1 對照組細胞培養(yǎng)過夜，每組3復孔，待所有細胞貼壁后將口徑為10μl的槍頭放置在孔板中間，至上而下做劃痕，劃痕寬度為10μl，而后采用PBS清洗漂浮細胞，共清洗三次。清洗后更換無血清的培養(yǎng)基，而后進行觀察。測量劃痕前后距離并分析細胞遷移距離。

1.2.5 Tran swell實驗：將BEL7402-TIPE2和對照組細胞分別接種于24孔板上，孔板的孔徑為8μm，每組3復孔，孔板下層放置含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)時間為24h。培養(yǎng)后用棉簽擦除未遷移細胞，采用甲醇固定10min后清洗，而后采用1%結(jié)晶紫染色，時間為20min，干燥后放置顯微鏡下觀察。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計

文中數(shù)據(jù)采用spss18.0軟件進行處理，計數(shù)資料采用%表示，資料采用卡方檢驗；計量資料采用 X±s表示，資料采用t值檢驗，P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1兩組人員外周血單核細胞水平：圖a為正常人群外周單核細胞水平，圖b為肝癌患者外周單核細胞水平，正常人群的外周單核細胞水平明顯高于肝癌患者，兩組比較有明顯差異，P<0.05（詳見下圖）。

2.2劃痕試驗：肝癌患者平均細胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05（詳見下表1）。

3.討論

TIPE2 與 TNFAIP8L （TIPE）、TNFAIP8L1（TIPE1）和 TNFAIP8L3（TIPE3）均是TNFAIP8家族成員。現(xiàn)階段TIPE2蛋白的研究主要在小鼠中，很少在人體標本中進行研究。TIPE2蛋白主要在免疫器官和免疫細胞中表達，研究表示，TIPE2在Toll樣受體和T細胞受體信號活化中呈高反應性表達。在脂多糖異常導致的膿毒血癥小鼠中，TIPE2 敲基因小鼠組存在明顯的休克反應，在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2 敲基因水平降低會導致淋巴細胞活化，進而導致TNF-α、IL-6、IL-12 和 IFN-γ分泌水平提升。在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2 敲基因能夠?qū)逃忻庖呒毎鸬截撓蛘{(diào)控的作用，其不僅能夠激活cacpase-8細胞，同時能夠?qū)罨鞍?AP-1、核因子 NF-κB進行抑制，加速細胞凋亡。在小鼠實驗中，TIPE2 敲基因能夠使小鼠的梗塞面積增加。上述種種結(jié)果均表明TIPE2 敲基因能夠?qū)Φ鞍灼鸬截撜{(diào)控的作用。而人體的TIPE2 基因主要位于染色體中，其是一種由氨基酸構(gòu)成的物質(zhì)，結(jié)構(gòu)與死亡受體非常相似。有研究表示TIPE2 在很多慢性炎癥中發(fā)揮著非常重要的作用，且在一定程度上推進了疾病的發(fā)展進程。

近年來，人們在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE1在腫瘤患者中的表達率存在異常，進而認為其可能參與了腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展。TIPE已被證實為一種新的癌基因，在乳腺癌和肺癌疾病的發(fā)展中有著非常重要的作用。雖然TIPE1與TIPE2在結(jié)構(gòu)上非常相似，但作用卻存在不盡相同，TIPE2有可能具有抑制腫瘤發(fā)展的作用，在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2的水平明顯異常，因此考慮其可能參與了肝癌的疾病進程。TIPE2能夠與Ras進行結(jié)合，進而對癌細胞進行抑制。在我院的調(diào)查結(jié)果中顯示：肝癌患者平均細胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。肝癌患者的細胞遷移數(shù)目平均為（493±11.2）個；健康人群的細胞遷移數(shù)目平均為（1492±46.3）個，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。對結(jié)果進行總結(jié)后可以認為，肝癌患者細胞遷移能力明顯下降，侵襲能力明顯下降，因此可以認為TIPE2參與了肝癌細胞轉(zhuǎn)移和侵襲過程。

總的來說，TIPE2可能參與了肝癌疾病的發(fā)生和發(fā)展，因此還需要進行更為深入的研究，了解 TIPE2 與肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展的具體機制。

參考文獻

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