劉慶

[摘要] 通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察二乙烯亞胺（Binary ethylenimine，BEI）和甲醛對(duì)豬圓環(huán)病毒2型（WH株）的滅活效果，進(jìn)行對(duì)比，選擇一種適用于豬圓環(huán)病毒二型（WH株）的滅活劑。在不同溫度（37℃、32℃、27℃）下采用4種濃度 （0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L）的BEI和濃度含量為2‰的甲醛對(duì)豬圓環(huán)病毒2型（WH株）進(jìn)行滅活，采用間接免疫熒光法測(cè)定病毒感染性滴度。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明：在37℃條件下，0.002mol/L的BEI能在48h內(nèi)完全滅活病毒。

[關(guān)鍵詞] 豬圓環(huán)病毒2型（WH株）；二乙烯亞胺；甲醛；滅活；比較

二乙烯亞胺（Binary ethylenimine，BEI）類滅活劑的滅活原理是：通過(guò)干擾核酸代謝和破壞病毒核酸達(dá)到滅活病毒。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)BEI與甲醛在滅活效果方面進(jìn)行對(duì)比，對(duì)不同濃度的BEI和2‰的甲醛在不同溫度下滅活豬圓環(huán)病毒2型（WH株）的效果進(jìn)行觀察，以比較BEI和甲醛對(duì)豬圓環(huán)病毒2型的滅活效果。

1.材料與方法，

1.1 細(xì)胞和病毒

PK-15細(xì)胞來(lái)自華中農(nóng)大；豬圓環(huán)病毒2型（WH株）來(lái)自華中農(nóng)大。

1.2 主要試劑

2-溴乙胺氫溴酸鹽（2-Aminoethyl bromide hydrobromide，BEA）、甲醛、細(xì)胞及病毒培養(yǎng)基均購(gòu)自Sigma公司。

1.3 病毒液的制備

將豬圓環(huán)病毒2型病毒按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程同步接種PK-15細(xì)胞，37℃培養(yǎng)，收獲病毒液抽樣檢驗(yàn)，樣品于-20℃條件保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 BEI滅活劑的配制

將BEA與0.2mol/L的NaOH溶液在37℃條件下水浴1h，配制成BEI滅活劑，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 BEI和2‰的甲醛對(duì)病毒液的滅活

在病毒液中分別加入終濃度為0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005 mol/Ll和0.00025 mol/L的BEI以及濃度含量為2‰的甲醛，分別于37℃、32℃、27℃放置12d，加入阻斷劑終止滅活。每天取樣，采用間接免疫熒光法測(cè)定病毒含量。

2. 結(jié)果

表1～3為不同溫度條件下濃度為0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L及濃度為2‰的甲醛對(duì)豬圓環(huán)病毒2型（WH株）的滅活效果。

2.1 滅活檢測(cè)：取滅活后的病毒液100μl與PK-15細(xì)胞同步接種于96孔微量板中，置37℃下培養(yǎng)并觀察5日，用間接熒光試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)無(wú)陽(yáng)性信號(hào)。

2.2 數(shù)據(jù)顯示，37℃時(shí)，0.002mol/L的BEI能在48h內(nèi)完全滅活病毒，甲醛需要72h以上可完全滅活病毒。

3. 討論

甲醛作為一種普遍使用的滅活劑，在滅活疫苗的的生產(chǎn)中尤為常用。甲醛主要作用于病毒衣殼蛋白而不作用于核酸，使病原體逃逸滅活而產(chǎn)生疫苗致病風(fēng)險(xiǎn)；甲會(huì)產(chǎn)生一系列的不良反應(yīng)；甲醛具有強(qiáng)刺激性，如果疫苗中的甲醛在商品動(dòng)物體內(nèi)有殘留的風(fēng)險(xiǎn)。

BEI是一種毒性較弱的烷化劑，滅活原理是：通過(guò)烷化核酸分子中的鳥(niǎo)嘌呤或腺嘌呤，干擾病毒的核酸代謝，破壞病毒核酸，從而滅活病毒。本實(shí)驗(yàn)比較了BEI和甲醛滅活豬圓環(huán)病毒2型（WH株）的滅活效果，結(jié)果顯示，BEI比甲醛對(duì)豬圓環(huán)病毒2型的滅活效果好。

[參考文獻(xiàn)]

[1]魏曉露，劉靖，高箐霞，等，二乙烯亞胺滅活流感病毒的效果觀察[J]中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2008，2（5）.395-397.

[2]曹廣芝.豬圓環(huán)病毒2型感染的危害及防控對(duì)策[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2009，4：56-57.

[3]彭伍平，王延輝，習(xí)向鋒，等.首屆中國(guó)獸藥大會(huì)-獸醫(yī)生物制品學(xué)學(xué)術(shù)論文集[C].天津.2008.