張亮等

【摘要】目的：探討P27和P53蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)水平和臨床意義。方法：選取在我院手術(shù)治療的浸潤性導(dǎo)管癌患者，術(shù)中留取癌組織和癌旁組織標(biāo)本，采用免疫組化實驗檢測其中P27和P53的表達(dá)水平。結(jié)果：在50例患者的標(biāo)本中，癌旁正常乳腺組織中P27的陽性率為78.0%，而P53的陽性率為4.0%；而在癌旁組織中，P27的陽性率明顯下降，僅為36.0%，而P53的陽性率顯著升高，為52.0%；P27和P53與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有相關(guān)性，其中P27在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中呈低表達(dá)，而P53在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中呈高表達(dá)；且P27和ER有一定的相關(guān)性，ER陽性患者的P27呈高表達(dá)，差異均由統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：P27、p53蛋白對乳腺癌發(fā)生和發(fā)展起重要作用，具有較高的臨床參考價值。

【關(guān)鍵詞】P27；P53；乳腺癌；免疫組化

【中圖分類號】R737.9 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0171-01

乳腺癌是全球女性高發(fā)的惡性腫瘤之一，據(jù)調(diào)查，2013年美國女性患乳腺癌者新增人數(shù)占美國女性患癌癥人數(shù)的30%[1]。乳腺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，收到基因水平和蛋白水平上多種信號的共同調(diào)控。P27和P53分別是起著抑癌和促癌作用的蛋白，參與到包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中。本研究采用免疫組合實驗來分析P27和P53蛋白在乳腺癌中的表達(dá)量，并探討其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月～2015年1月來我院接受手術(shù)治療的乳腺癌患者50例為研究對象，患者年齡26～60歲，平均年齡40.5±3.5歲。所有患者均行乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)，行術(shù)中快速冰凍病理檢查及其他常規(guī)病理檢查確診。本研究所選用的50例患者均為確診的浸潤性導(dǎo)管癌患者，且手術(shù)治療前未接受放化療治療。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者23例，未轉(zhuǎn)移患者27例；有雌激素受體（ER）陽性患者30例，陰性20例；有孕激素受體（PR）陽性28例，陰性22例。在術(shù)中留取乳腺癌病灶組織及遠(yuǎn)離癌灶邊緣>2cm的癌旁正常乳腺組織。

1.2 研究方法

本研究采用免疫組化（SP法）判斷癌組織及癌旁正常乳腺組織中P27和P53的表達(dá)量。其中P27和P53抗體均購買自Proteintech中國分公司 ，二抗S-P試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自碧云天生物技術(shù)研究所，其他試劑及耗材有本院病理科技術(shù)室提供。本研究所有標(biāo)本均使用4%單聚甲醛固定，并包埋與石蠟中，切片厚度為4μm，抗原采用高溫高壓法修復(fù)。本研究中陽性對照采用確診的陽性乳腺癌切片，陰性對照用磷酸鹽緩沖液代替一抗進(jìn)行操作。

免疫組化（SP法）具體操作如下：一 免疫組化（ LP 法）操作步驟：1、切片后脫蠟至水，并高壓高溫高壓修復(fù)抗原；2、緩沖液洗3次，每次5min；3、切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15min，以降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色；4、緩沖液洗3次，每次5min；5、滴加 Ultra V Block ，在室溫下孵育5-10分鐘封閉；但不要超過10min，以免導(dǎo)致特異性染色效果降低；6. 緩沖液洗2次，每次5min；7、滴加一抗工作液37 ℃孵育2小時；8、緩沖液洗3次，每次5min；9、滴加 Primary Antibody Enhancer（增強(qiáng)子） ，在室溫下孵育20min；10、緩沖液洗3次，每次5min； 11、滴加 HRP Polymer（ 酶標(biāo)二抗 ） ，在室溫下孵育30min；此步驟需要避光； 12、緩沖液洗3次，每次5min；13、1ml DAB Plus Substrate中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen ），混勻后滴加到切片上，孵育10min；14、自來水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.3 P27和P53的陽性判斷

p27蛋白陽性染色呈黃色、棕黃色顆粒，出現(xiàn)與細(xì)胞核中，陽性細(xì)胞超過10%則認(rèn)為陽性，為超過10%則為陰性結(jié)果。P53蛋白陽性著色主要定位于細(xì)胞核，呈黃色-棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞超過10%則認(rèn)為陽性，為超過10%則為陰性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理，計量資料均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（ ），計數(shù)資料采用χ2檢驗，如有理論T值<5則使用校正χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，以P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 正常乳腺組織和乳腺癌組織中P27及P53表達(dá)量

在50例患者的標(biāo)本中，癌旁正常乳腺組織中P27的陽性率為78.0%，而P53的陽性率為4.0%；而在癌旁組織中，P27的陽性率明顯下降，僅為36.0%，而P53的陽性率顯著升高，為52.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1和圖1。

3 討論

P27基因定位于染色體12p13.1-13.2上，是一種細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶抑制物，可通過與細(xì)胞周期蛋白依賴激酶活化激酶（CDK）及cyclin-CDK復(fù)合物結(jié)合而抑制CDK的活性，阻止細(xì)胞周期中Gl/S期轉(zhuǎn)換，進(jìn)而抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展，減緩腫瘤細(xì)胞的分裂、增殖，起到抑癌作用[2]。同時，P27還可以通過影響Rb蛋白的磷酸化，是乳腺癌細(xì)胞周期阻滯與G1期。在苑光輝[3]的研究中，P27蛋白在癌組織中的表達(dá)率明顯低于正常乳腺組織，且不受到病理分型的影響。

P53基因定位于染色體17p13，有11個外顯子和10個內(nèi)含子構(gòu)成，可參與細(xì)胞周期的調(diào)控，對于腫瘤細(xì)胞的分裂、增殖過程中起到重要作用。P53是已知的有兩種類型，即野生型和突變型[4]。在正常細(xì)胞中野生型P53含量較低，但當(dāng)其收到一定刺激后可轉(zhuǎn)化為突變型，突變后的P53可作為轉(zhuǎn)錄子對下游大量靶基因進(jìn)行調(diào)控，影響細(xì)胞周期、凋亡、分化，喪失對損傷DNA的修復(fù)，起到癌基因的作用。有研究顯示[5]，P53表達(dá)水平的上調(diào)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)，其機(jī)制可能與野生型P53基因的突變有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，P27在乳腺癌組織中表達(dá)量明顯下調(diào)，且和乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)，和ER陽性正相關(guān)，而P53蛋白在乳腺癌組織中顯著上調(diào)，且和淋巴結(jié)專業(yè)呈正相關(guān)。綜上所述，P27、p53蛋白對乳腺癌發(fā)生和發(fā)展起重要作用，具有較高的臨床參考價值。

參考文獻(xiàn)

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[3] 苑光輝. 乳腺癌組織中P27蛋白和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及意義[J]. 中國腫瘤臨床與康復(fù)， 2014， 21（8）： 931-933.

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