王丹陽 殷雪婧

摘要：目的： 構(gòu)建RP-HPLC法同時對血清鎮(zhèn)靜藥物阿普唑侖和艾司唑侖含量進行快速檢測。方法： 采用Techsphere-ODS色譜柱作為分析柱，甲醇：水（65：35）作為流動相，流速1.0mL/min，內(nèi)標為硝西泮，檢測波長為254nm，柱溫室溫。結(jié)果：艾司唑侖和阿普唑侖血濃線性范圍0.25-3.0μg/mL，其中，最小檢測濃度分別為12.5μg/L、12.5μg/L。日內(nèi)、日間精密度良好，回收率較高，分別為100.49%、95.08%。結(jié)論： 該方法操作簡便、結(jié)果可靠，可用于臨床血清鎮(zhèn)靜藥物阿普唑侖、艾司唑侖濃度測定。

關(guān)鍵詞：血清；鎮(zhèn)靜藥物；阿普唑侖；艾司唑侖；RP-HPLC；快速檢驗

Abstract： Objective To construct simultaneous rapid detection of serum sedative drugs Alprazolam and Estazolam in RP-HPLC method. Methods the Techsphere-ODS chromatographic column as the analytical column， methanol： water （65：35） as mobile phase， flow rate of 1.0ml/min， internal standard for nitrazepam， the detection wavelength was 254nm column greenhouse temperature. Results AI division of Estazolam and alprazolam blood concentration was linear in the range of 0.25-3.0 u g / ml. Among them， the minimum detectable concentration respectively was 12.5 g / L and 12.5 g / L respectively. Day and day precision， recovery rate is higher， respectively， 100.49%， 95.08%. Conclusion This method is simple， the result is reliable and can be used in clinical serum sedative drugs alprazolam， Estazolam concentration determination.

Keywords： Serum； sedative drugs； alprazolam； Estazolam； RP-HPLC； rapid detection

作為臨床上常見的鎮(zhèn)靜類藥物，阿普唑侖和艾司唑侖均屬于BAD類藥物，具有抗焦慮、鎮(zhèn)靜、催眠、松弛骨骼肌等作用。有關(guān)這兩種藥物血清濃度檢測，多數(shù)報道均采用的是外標峰面積進行定量，因而對于實驗條件具有較高的要求，且難以進行有效控制。再加上這兩種藥物容易引發(fā)依賴性、成癮性等不良反應(yīng)，因而，加強血清中此類藥物含量的快速檢測具有十分重要的意義。本文采用RP-HPLC法對人體血清中阿普唑侖、艾司唑侖藥物濃度進行快速檢測，旨在為臨床血藥檢測提供快速、可靠的定性定量方法。

1資料與方法

1.1儀器

LC-1500型號高效液相色譜儀，CHROM TECH色譜工作站，TGL-16B離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），XW-80A漩渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），BS210S電子天平（Sartorius）。

1.2試藥

阿普唑侖、艾司唑侖、硝西泮（中國生物藥品技術(shù)檢定所），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，乙醚、乙醇為分析純（長沙試劑廠）。

1.3方法

標準溶液、內(nèi)標的配置。準確稱取對照品硝西泮適量，采用無水乙醇進行配制，配制為0.1mg/mL的標準混合液與內(nèi)標液。置于冰箱中保存，使用前進行相應(yīng)的稀釋。

色譜條件。分析柱采用的是Techsphere-ODS（250mm×4.6mmID，5μm），保護柱ODS（10mm×4.6mmID，5μm），流動相為甲醇：水（65：35），流速為1.0mL/min，檢測波長為254nm，柱溫室溫，AUFS為0.08。

血清樣品的處理。取0.25mL的人體血清樣品置于10μg/mL的內(nèi)標液50μL內(nèi)混勻，采用50μL的NaOH（0.1mol/L）進行堿化，加入2mL的乙醚，采用漩渦混合器提取2min后，采用3000rpm的轉(zhuǎn)速進行離心，離心10min，將所得上清液吸入另一無菌試管中，于60℃水浴下蒸干，殘留物采用100μL流動相進行振蕩溶解，進樣20μL。

2結(jié)果

2.1色譜圖

取空白血清與含藥血清，提取后采用色譜柱進行分離，結(jié)果如圖1所示：

2.2標準曲線制備

采取0.25mL血清加入標準液中，使血清中藥物濃度分別為0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、3.00μg/mL，依據(jù)上文方法操作，制備標準曲線，其中，濃度C為橫坐標，藥物峰高值與內(nèi)標峰高值之比Y為縱坐標。

阿普唑侖標準曲線：Y=0.1266C-0.00415，（R=0.9989，n=5）

艾司唑侖標準曲線：Y=0.2199C-0.00825，（R=0.9979，n=5）

結(jié)果顯示：艾司唑侖、阿普唑侖血清藥物濃度在0.25-3.0μg/mL之間，同峰高比具有較好的線性關(guān)系。

2.3回收率實驗

結(jié)合方法操作分別配制0.25、1.0、3.0μg/mL的樣品各5份進行測定，將峰高比代入方程中，對兩種藥物回收率進行計算，所得結(jié)果：艾司唑侖、阿普唑侖回收率分別為100.49%、95.08%。

2.4精密度實驗

分別取高、中、低濃度質(zhì)控樣品，結(jié)合樣本方法進行3次平行操作，所獲得日內(nèi)、日間精密度結(jié)果如下：艾司唑侖高、中、低日內(nèi)精密度為4.48、2.90、5.31，日間精密度分別為6.87、2.35、6.64；阿普唑侖高、中、低日內(nèi)精密度為4.76、4.75、4.94，日間精密度分別為6.52、4.75、4.42，均不超過7%。

2.5最小檢測濃度

最低檢測限為待測物峰高為3倍基線噪音時的濃度，本法最小檢測濃度艾司唑侖、阿普唑侖均為12.5ng/mL。

2.6穩(wěn)定性實驗

取艾司唑侖、阿普唑侖中、高、低三種濃度九個樣品置于冰箱中保存，分別于1、2、3天取出，于37.5℃水浴中融化，依據(jù)樣品方法進行測定，結(jié)果RSD均不超過10%。

2.7臨床應(yīng)用

采用本法對我院兩位腦?；颊哌M行測定，結(jié)果顯示，男性患者血清中艾司唑侖濃度0.34μg/mL，女性患者血清阿普唑侖濃度0.4μg/mL。兩患者均未表現(xiàn)出顯著的中毒癥狀。

3討論

本文采用甲醇：水（65：35）作為流動相，避免緩沖液對色譜柱所帶來的損傷，且所檢測藥物分離效果良好。相同條件下，萃取溶劑二氯甲烷、氯仿、乙醚中，乙醚萃取藥物具有較高的色譜峰，且雜質(zhì)較少，操作過程簡單方便。本文采用的是內(nèi)標定量法，因而所得結(jié)果準確、快速，即可用于血藥中毒定性與定量，也可用于常規(guī)血藥濃度測試，具有較好的臨床推廣和應(yīng)用價值。

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