程霞

摘要：奶牛乳房炎是由于物理、化學(xué)、生物等因素引起的乳房炎癥，是奶牛常見(jiàn)病和多發(fā)病之一，給奶牛飼養(yǎng)業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病可使奶牛泌乳機(jī)能受損，生殖機(jī)能失調(diào)，導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降，乳品質(zhì)量發(fā)生改變，延長(zhǎng)產(chǎn)后發(fā)情和妊娠時(shí)間，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文通過(guò)對(duì)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定和其耐藥程度的調(diào)查，可以更好地指導(dǎo)臨床治療工作。進(jìn)行臨床采集病原菌標(biāo)本和耐藥性實(shí)驗(yàn)，根本目的是為了防治奶牛乳房炎，促進(jìn)我國(guó)奶制品產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎；病原菌；耐藥性調(diào)查

奶牛乳房炎主要是由微生物引起的一類(lèi)疾病，物理或化學(xué)性損傷也可導(dǎo)致該病發(fā)生，它已成為世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)的主要?dú)⑹郑瑢?dǎo)致奶產(chǎn)量減少，乳品質(zhì)量下降而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題。掌握奶牛乳房炎致病菌的種類(lèi)和耐藥性對(duì)預(yù)防治療工作是至關(guān)重要的。

1 材料與方法

1.1 關(guān)鍵材料和試劑

培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、綿羊鮮血、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、甘露醇高鹽瓊脂、疊氮鈉血；營(yíng)養(yǎng)肉湯和各種生物微量鑒定管（購(gòu)自蘭州榮昌生物制品有限公司）。

試驗(yàn)試劑：阿莫西林、青霉素、慶大霉素、林可霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、紅霉素、四環(huán)素、恩諾沙星。

1.2 采集乳樣

乳樣的數(shù)量是100份，在整個(gè)采集過(guò)程中注意清潔，采集之前用清水和酒精對(duì)乳頭進(jìn)行消毒，之后對(duì)乳頭進(jìn)行擦拭，擦拭材料應(yīng)選擇消毒紙。采樣過(guò)程中要從第四奶開(kāi)始采集，大約5～10mL，置于滅菌瓶中在零下20℃的溫度下保存。

實(shí)驗(yàn)試劑：革蘭氏染色試劑，CMT試劑，藥敏紙片。

實(shí)驗(yàn)儀器：恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、接種針、L棒、酒精燈、吸管和錐形瓶等。

1.3 分離鑒定病原菌

在兀菌操作下，將普通瓊脂培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行接種，放置在37℃的條件下約24～48h，選取不同的菌落涂片進(jìn)行染色檢查，從中分離出鏈球菌的菌株和葡萄球菌的菌株。在菌株培養(yǎng)工作完成后，將檢驗(yàn)出的菌類(lèi)進(jìn)行株菌培養(yǎng)，加入營(yíng)養(yǎng)湯縮短培養(yǎng)時(shí)間，時(shí)間在24h之內(nèi)，再選用合理的試劑進(jìn)行鑒定，鑒定過(guò)程要按照完整的流程，過(guò)程保持連續(xù)以免發(fā)生錯(cuò)誤，在整個(gè)過(guò)程中要進(jìn)行嚴(yán)格的兀菌操作，一旦被細(xì)菌感染，實(shí)驗(yàn)即兀效。

1.4 耐藥性的實(shí)驗(yàn)

耐藥性可選用較常見(jiàn)的藥物進(jìn)行測(cè)試，這些藥物效果明顯成本較低，比如青霉素類(lèi)的、糖苷類(lèi)的和四環(huán)素類(lèi)的等等，具體的測(cè)試方法包括3個(gè)程序：通過(guò)可行的方法來(lái)調(diào)節(jié)菌液的濃度，再將細(xì)菌進(jìn)行涂片來(lái)接種，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)量出具體的數(shù)據(jù)并認(rèn)真記錄。

2 結(jié)果分析

2.1 細(xì)菌分離

在100份樣品中查出有91份含有6種病原菌，其中金黃色葡萄球菌占52.78%，表皮葡萄球菌占12.67%，停乳鏈球菌占20.83%，無(wú)乳鏈球菌占2.12%，乳房鏈球菌占6.94%，大腸桿菌占2.78%。根據(jù)分離和鑒定，總細(xì)菌中主要的細(xì)菌有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及其他細(xì)菌等。

2.2 耐藥性實(shí)驗(yàn)

對(duì)復(fù)方新諾明有較強(qiáng)耐藥性的菌類(lèi)：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌；對(duì)四環(huán)素有較強(qiáng)耐藥性的菌類(lèi)：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；對(duì)萬(wàn)古霉素和青霉素有較強(qiáng)耐藥性的菌類(lèi)：大腸桿菌和停乳鏈球菌。接種有分離菌落營(yíng)養(yǎng)肉湯的小白鼠12h后，出現(xiàn)腹瀉，發(fā)燒各狀況，精神萎靡，18h后死亡3只，其他沒(méi)有太大變化，收集死亡小白鼠肝臟、脾病料，涂片。革蘭氏顯鏡與上述細(xì)菌分離生化結(jié)果是一樣的。

3 討論

經(jīng)過(guò)本次調(diào)查，發(fā)現(xiàn)奶牛乳房炎的致病菌種類(lèi)主要有葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，其中葡萄球菌46株，站24.8%，鏈球菌100株，占總數(shù)的55%，大腸桿菌34株，約占18.4%，其他細(xì)菌主要為沙門(mén)氏菌和棒狀菌混合感染比較嚴(yán)重，這三種菌類(lèi)的致病因素都與環(huán)境衛(wèi)生質(zhì)量差有關(guān)，因此發(fā)生奶牛乳房炎的主要原因是養(yǎng)殖場(chǎng)在飼養(yǎng)和擠奶過(guò)程中沒(méi)有做好衛(wèi)生工作。長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直關(guān)注如何防止奶牛乳房炎卻沒(méi)有考慮到衛(wèi)生消毒問(wèn)題。由于長(zhǎng)期使用抗生素，養(yǎng)殖場(chǎng)中的細(xì)菌有一定的耐藥性，消毒液不能殺死它們。因此，養(yǎng)殖戶們要做好養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生工作，保持舍內(nèi)外清潔，擠奶過(guò)程中嚴(yán)把消毒關(guān)，做到提前預(yù)防，早發(fā)現(xiàn)，早治療，嚴(yán)格控制病情的蔓延。

藥敏實(shí)驗(yàn)表明：分離出的細(xì)菌很大部分對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星，左氧沙星有很大的刺激感應(yīng)，不過(guò)對(duì)青霉素、紅霉素等卻有很大的耐藥性，由此可見(jiàn)，奶牛市場(chǎng)防治乳房炎的藥物使用有很大的盲目性存在，過(guò)度使用青霉素、紅霉素這些抗生素，免疫系統(tǒng)就會(huì)出現(xiàn)很大的抗藥性，導(dǎo)致細(xì)菌肆意滋生，因此要加強(qiáng)抗生素科學(xué)用藥的宣傳。

目前，在奶牛乳房炎的防治過(guò)程中，抗生素仍發(fā)揮著難以比擬的作用，但它也造成了很大的問(wèn)題，大量的耐藥性細(xì)菌使奶牛的生活環(huán)境受到威脅。這就要求在病癥出現(xiàn)時(shí)，要采用藥物交叉使用的方法，防止菌體內(nèi)出現(xiàn)耐藥基因。