劉濤 周正劍 王萍 成雄鷹

摘要 自從1992年第一株轉基因小麥誕生以來，小麥的轉基因技術經有了很大的發(fā)展。該研究分析了Web of knowledge數(shù)據庫和CNKI數(shù)據庫收錄的2010～2014年發(fā)表的關于普通小麥轉基因的文獻。篩選得到102篇英文文獻和103篇中文文獻，涉及296個試驗，共對152個普通小麥品種進行了遺傳轉化研究。目前小麥遺傳轉化主要采用基因槍和農桿菌介導法，分別占總試驗數(shù)的68.25%和30.4%；少數(shù)試驗使用花粉管通道和電轉化進行轉基因。轉化靶標組織主要是幼胚及其愈傷組織，占試驗總數(shù)的80.35%；其次為成熟胚來源的愈傷組織，占8.62%。Bar、HPT、NPTII、PMI和AtMYB12分別在不同的試驗中被使用，但Bar是最常用的篩選標記，占試驗總數(shù)的61.22%。不同試驗的轉化率相差較大，從0.1%到45%不等。

關鍵詞 小麥；轉化體系；文獻分析

中圖分類號 S126 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）34-345-05

小麥是世界上主要的糧食作物之一，2013年全球小麥產量7.15億t，僅次于玉米（10.18億t）和水稻（7.4億t）。然而小麥的生產受到多方面的威脅，分析2004～2013的全球小麥單產，發(fā)現(xiàn)小麥單產不穩(wěn)定，且增幅較小。最低單產是2007年的2 828.08 kg/hm2，最高的是2013年的3 268.30 kg/hm2。我國已成為世界上最大的小麥生產國，2013年我國小麥產量占世界產量的17.03%。2010～2014年，我國小麥產量增速減緩，平均年增長率僅為1.5%[1]。鑒于目前人口的持續(xù)增長和耕地的不斷減少。有必要采用多種措施穩(wěn)定或增加產量。

植物轉基因技術是利用現(xiàn)代生物技術的方法，將有利基因導入受體植物的基因組中，產生有附加值的性狀。近年來，轉基因產品在大豆、玉米和棉花上取得巨大的成功，創(chuàng)造了良好的經濟和社會效益。作為世界3大糧食作物之一，小麥的轉基因研究滯后于水稻和玉米，直到1992年才有Vasil利用基因槍法獲得世界上第一株轉基因小麥[2]。但至今小麥的遺傳轉化率仍較低，容易導致插入沉默，且表現(xiàn)出很強的品種依賴性[3]。但隨著技術的發(fā)展，新的遺傳改良工具CRISPRCas[4]和TALEN[5]等技術的發(fā)展，為高效的植物改良提供了新的途徑。而且這些技術的應用都需要通過遺傳轉化技術來實現(xiàn)。

在Web of knowledge數(shù)據庫是由湯森路透（Thomson Reuters）開發(fā)維護的全球最大的生命科學數(shù)據庫，包括2 000多種來自世界各地的期刊[6]。CNKI是我國最大的文獻數(shù)據庫，覆蓋96%的中文期刊[7]。筆者搜集整理了2010～2014年Web of knowledge數(shù)據庫和CNKI的文獻數(shù)據庫收錄的關于普通小麥轉基因的文獻，系統(tǒng)地分析以往的小麥遺傳轉化研究，旨在更全面地了解小麥遺傳轉化的過程和現(xiàn)狀，比較不同實驗技術的優(yōu)缺點，為進一步提高小麥遺傳轉化效率提供新的思路。

1 研究方法與數(shù)據來源

1.1 文獻收集方法

在Web of knowledge數(shù)據庫中，首先使用“Year Published=（2010-2014）Timespan=All years Search language=English”搜索組合搜索統(tǒng)計文獻數(shù)目；再使用“Topic=（transgenic）AND Year Published=（2010-2014）Timespan=All years.Search language=English”搜索組合搜索統(tǒng)計文獻數(shù)目；然后使用“Topic=（wheat）AND Topic=（transgenic）AND Year Published=（2010-2014）Refined by：Databases=（BCI OR WOS OR MEDLINE）Timespan=All years.Search language=English”搜索組合進行搜索，統(tǒng)計文獻數(shù)目；在CNKI的文獻數(shù)據庫（http：//epub.cnki.net/）首先使用發(fā)表時間20100101～20150101，進行搜索，統(tǒng)計文獻數(shù)目。再使用關鍵詞“轉基因”，范圍選擇為主題+發(fā)表時間為20100101～20150101，進行搜索，統(tǒng)計文獻數(shù)目。使用關鍵詞“轉基因”和“小麥”，范圍選擇為“主題”+發(fā)表時間為20100101～20150101進行搜索，統(tǒng)計文獻數(shù)目。使用同樣的方法對玉米和水稻的文獻狀況進行搜索，只統(tǒng)計文獻數(shù)目，不進行人工判讀。同時使用CNKI的成果數(shù)據庫（http：//epub.cnki.net/kns/brief/result.aspx？dbPrefix=SNAD）、CIMMYT的wheat atlas數(shù)據庫（http：//wheatatlas.cimmyt.org/）和USDA的GRIN數(shù)據庫（http：//www.arsgrin.gov/）獲得文獻中使用小麥品種的詳細信息。

1.2 文獻的篩選和信息收集

對搜索出的文獻進行人工判讀，排除摘要、重復文章、會議文章、綜述文章和以非普通小麥為受體的文章。收集篩選出的文獻的下列試驗信息：受體品種、外植體、轉基因方法、篩選基因和轉基因效率。其中外植體主要分為幼胚和成熟胚2類：轉化受體為幼胚和幼胚誘導的愈傷都被歸為幼胚類；受體為成熟胚和成熟胚誘導的愈傷歸為成熟胚類。轉基因效率=陽性植株/侵染受體數(shù)目。

2 結果與分析

2.1 小麥轉基因研究的活躍度

對上述搜索條件下獲取的文獻數(shù)目進行分析，用相關作物文獻所占的比例來表示該作物轉基因研究的活躍度，結果見表1。由表1可知，在Web of knowledge數(shù)據庫中，水稻轉基因的文獻數(shù)目是小麥轉基因文獻數(shù)目的5.86倍。玉米轉基因文獻數(shù)目是小麥轉基因文獻數(shù)目的1.88倍。在CNKI數(shù)據庫中同樣發(fā)現(xiàn)，水稻轉基因的文獻數(shù)目是小麥轉基因文獻數(shù)目的2.98倍，玉米轉基因文獻數(shù)目是小麥轉基因文獻數(shù)目的2.18倍。說明在這3種作物中，水稻轉基因研究最活躍，玉米轉基因研究次之，小麥轉基因研究最少。

2.2 受體品種

小麥按低溫春化時間長短，可分為春性小麥和冬性小麥。按播種時間可分為春小麥和冬小麥。春小麥一般是春性小麥，而冬小麥可能是春性小麥或冬性小麥[8]。春性品種小麥被選為受體材料的比例遠大于（3∶1）非春性品種。春性小麥不需要低溫春化即可抽穗結實，可以春播，生育期短。而冬性品種因需要低溫春化才可抽穗結實，必須秋播或人工春化，生育期較長。例如春性品種“隴春23”在甘肅省春播，生育期只有100 d[9]，而半冬性品種“周麥16”在河南省秋播，生育期為236 d[10]。因此春性小麥在幼胚供應、培養(yǎng)周期和轉基因苗結實率3個方面具有明顯的優(yōu)勢。

在Web of knowledge數(shù)據庫中檢索到921篇文獻，經篩選得到103篇英文文獻，信息收集結果如表2。103篇文獻涉及137個轉化試驗，共用了68個普通小麥品種。137個試驗中，41個試驗采用品種Bobwhite，占試驗總數(shù)29.93%。CNKI數(shù)據庫中檢索到834篇文獻中，經篩選103篇中文文獻符合要求。信息收集結果如表3。103篇文獻涉及157個轉化試驗，對84個普通小麥品種進行了轉化。157個試驗中，25個使用揚麥系列品種做為受體材料，占實驗總數(shù)15.92%。小麥品種按生態(tài)類型進行分類，Web of knowledge數(shù)據庫收集的139個試驗中有103個試驗的受體品種確定了生態(tài)類型，其中使用春性品種的有94個，占試驗總數(shù)的91.26%。CNKI數(shù)據庫收集的157個試驗中，130個試驗所采用的品種確定了生態(tài)類型。其中82個試驗使用了春性品種，占試驗總數(shù)的63.08% ?？偣?33個轉基因試驗中有176個使用了春性品種，占試驗總數(shù)的75.54%。

英文文獻試驗中使用頻率最高的Bobwhite為墨西哥春性小麥品種。CIMMYT研究了129個Bobwhite姐妹系的轉化效率。其中Bobwhite SH9826獲得了73.81%的轉化效率，在所見文獻中最高[11]。但品種Bobwhite的農藝性狀較差，影響轉基因技術的直接應用[12]。中文文獻中使用最多的小麥品種為揚麥系列。張月婷等[13]使用品種“揚麥158”的幼胚為外植體，經過農桿菌介導、Bar基因篩選，獲得了2.33%的轉化效率。在總共178個試驗中有28.65%選擇了這2個系列的品種，可以推測它們在目前的轉化體系下的轉化效率是穩(wěn)定的。

Terese Richardson等[14]用同樣的轉化方法對10個小麥品種的進行轉化，比較轉化率發(fā)現(xiàn)，差異巨大，最高的轉化率為45%，最低為0。Pellegrineschi等[11]研究了129個Bobwhite姐妹系的轉化效率，得到了類似的結論，轉化率的分布從0到73.81%。由此可以看出小麥轉化表現(xiàn)出很強的品種依賴性。表明轉化效率在一定程度上受品種的遺傳特性影響。

2.3 外植體

由圖1可知，Web of knowledge數(shù)據庫收集的137個試驗，使用了3種外植體，分別為幼胚、成熟胚、生長點。117個試驗采用幼胚為外植體，占試驗總數(shù)的85.40%。13個試驗選用成熟胚為外植體，占試驗總數(shù)的9.49%。CNKI數(shù)據庫收集的157個試驗，使用了4種外植體，分別為幼胚、幼穗、成熟胚和生長點。114個試驗以幼胚為外植體，占試驗總數(shù)的72.61%。12個試驗以成熟胚為外植體，占試驗總數(shù)的7.64%。25個試驗采用生長點為外植體，占試驗總數(shù)的15.92%。

高通量的轉化體系要求外植體具有穩(wěn)定高效的再生能力，一般不應低于80%，且以叢生芽再生植株形式為宜[15]。幼胚是目前使用頻率最高的外植體，且獲得的轉化率也最高。一般選取開花后12～14 d左右的幼胚，大小為0.5～1.5 mm[16-22]。但幼胚的供應受時間限制且幼胚的狀態(tài)也很難控制，造成以幼胚為外植體的轉化實驗的重復性差。成熟胚則沒有以上問題，種子可以方便的保存在實驗室內，隨時使用且質量均一，試驗重復性好[23-24]。但成熟胚的再生能力不如幼胚。近些年在有許多學者對成熟胚的再生能力進行研究。Moghaieb等[25]使用小麥品種“Gemmiza10”和“Gemmiza9”的成熟胚進行農桿菌轉化試驗，獲得了95%和87.5%的再生頻率，最終的轉化率為8.8%和6.9%[25]。Raja等[26]使用小麥品種“Tartara2002”的成熟胚進行農桿菌轉化試驗，獲得了40%的轉化效率。我國學者張東武等[27]使用品種“西農928”的成熟胚為外植體，通過基因槍介導轉化，以Bar基因為篩選標記，獲得了1.2%的轉化效率。Ding等[28]使用“鄂麥12”的成熟胚為外植體，用農桿菌介導轉化，以Bar基因為篩選標記，獲得了1.52%的轉化效率。生長點和幼穗是植物生長分化的活躍部位，利用農桿菌對這些部位進行活體侵染，在后代可得到陽性轉化苗[29-30]。生長點和幼穗為外植體進行轉化有明顯的優(yōu)勢，主要包括不依賴于組織培養(yǎng)、不受基因型限制、操作方便，不受設備限制；同時劣勢也十分明顯，轉化率低、容易產生嵌合體和轉化體系不成熟，限制了這些外植體的使用[31]。

2.4 轉化方法

由圖2可知，Web of knowledge數(shù)據庫收集的137個試驗，使用了3種方法介導小麥轉基因，分別為基因槍介導法、農桿菌介導法和花粉管通道法。91個試驗采用基因槍介導法進行轉基因，占試驗總數(shù)的66.42%。45個試驗使用農桿菌介導法完成基因導入，占總數(shù)的32.85%。CNKI數(shù)據庫收集的157個試驗使用了4種轉化方法（基因槍介導法、農桿菌介導法、花粉管通道法和電轉化法）。111個試驗應用基因槍介導法，占總試驗數(shù)的70.7%。43個試驗采用農桿菌介導法，占試驗總數(shù)的27.39%。

可以看出，目前小麥轉基因主要使用基因槍和農桿菌介導法。在總共294個試驗中，68.7%采用基因槍介導，31.29%使用農桿菌介導完成轉化。從轉化效率上看，基因槍法目前最高獲得73.81%的轉化率[11]。農桿菌法最高獲得41.00%的轉化率[14]。Hu等[18]比較了基因槍法和農桿菌法的轉化質量，發(fā)現(xiàn)農桿菌法得到的低拷貝的轉化事件優(yōu)于基因槍法。Sparks使用同一個轉化系統(tǒng)，基因槍介導可以實現(xiàn)了35個小麥品種的轉化。而農桿菌介導只有少數(shù)幾個品種獲得了轉基因植株[32]，推測原因是小麥品種對農桿菌不敏感。Li等[33]研究發(fā)現(xiàn)與基因槍法比較，農桿菌介導的轉化事件能在后代中穩(wěn)定的遺傳表達，不會出現(xiàn)基因沉默的現(xiàn)象。

花粉管通道技術是利用作物授粉后所形成的天然花粉管通道（又稱花粉管引道組織）經珠心通道將 外源 DNA 攜帶入胚囊，轉化受精卵和其前后的生殖細胞（精子、 卵子），由于它們仍處于未形成細胞壁的類似 “原生質體” 狀態(tài)，并且正在進行活躍的 DNA 復制、分離和重組，所以很容易將外源 DNA 的片段整合到受體基因組中，達到遺傳轉化的目的[34]。該法操作簡單，易于推廣，不受基因型限制，但轉化機理不清晰，受環(huán)境影響大，轉化效率低[35]。

2.5 篩選標記

由圖3可知，Web of knowledge數(shù)據庫收集的137個試驗，使用了5種篩選標記，分別為Bar、HPT、NPTII、PMI和AtMYB12。Bar基因使用最為普遍，占試驗總數(shù)的59.12%。HPT基因和NPTII基因次之，分別占試驗總數(shù)的10.22%和14.60%。AtMYB12是一種可視的報告基因，是黃酮醇生物合成專一性的激活因子。AtMYB12導入小麥中，提高小麥黃酮和花甘色素的含量?；ǜ噬氐拇罅勘磉_能夠使小麥表現(xiàn)出紅色或紫色[36]。CNKI數(shù)據庫收集的157個試驗也采用了上述5種篩選標記。Bar基因被97個試驗采用，占試驗總數(shù)的61.78%。NPTII基因在25個試驗中出現(xiàn)，占試驗總數(shù)的15.92%。

圖3 CNKI和Web of science數(shù)據庫中使用各種篩選基因的頻數(shù)分布

Vasil等[2]獲得第一株轉基因小麥，使用的篩選標記是Bar基因。此后Bar基因在小麥轉化中被廣泛利用。在此次收集到的294個試驗中，180個試驗使用Bar基因為篩選標記，占試驗總數(shù)的61.22%。2002年Pellegrineschi等[11]使用Bobwhite的幼胚為外植體，用基因槍介導，以Bar基因為篩選標記，獲得了73.81%轉化效率，在所見文獻中最高。2003年Hu等[18]采用Bobwhite的幼胚為外植體，農桿菌介導，EPSPS基因為篩選標記，獲得了4.4%的轉化效率，說明EPSPS在小麥中也可應用[37]。

2012年Agnieszka Bińka等[38]在2個小麥品種“Kontesa”和“Torka”對比了Bar和NptII 2種篩選標記的效率，發(fā)現(xiàn)在這2個小麥品種中，以NptII為篩選標記的轉化體系的轉化率顯著大于以Bar為篩選標記的轉化體系的轉化率[38]。由此可以看出轉化率和篩選標記之間存在關系，選擇合適的篩選標記，可以提高轉化效率。

2.6 轉化效率

Web of knowledge數(shù)據庫收集的137個試驗中有50個提供了轉化效率，最小的轉化效率為0.28%，最大的為45%，中位數(shù)是2.1%。最大的轉化效率來源于Richardson等[14]，試驗采用小麥品種Westonia的成熟胚為外植體，誘導愈傷組織。使用農桿菌（AGL1）介導進行遺傳轉化，bar為篩選基因。CNKI數(shù)據庫收集的157個試驗中有100個提供了轉化效率，其中最小的為0.1%，最大的為34.8%，中位數(shù)為0.66%。王維[30]采用農桿菌（EHA105）將水稻OsDREB2.1基因導入小麥品種周麥16和冀麥38的幼穗中，獲得了34.8%的轉化效率。蔡琳[39]使用基因槍介導法，以小麥品種隴春23的幼胚為外植體，Bar基因為篩選基因，獲得了15.88%的轉化效率。值得一提的是，在所有提供轉化效率的試驗中，75.33%轉化率低于3%。

3 結論

文獻分析結果表明，農桿菌和基因槍法能有效地轉化小麥，Bar基因是可靠的篩選標記，受體材料受基因型限制明顯。受體組織主要依賴于幼胚，但有些基因型的成熟胚轉化成功，說明在小麥遺傳轉化中成熟胚有進一步利用的潛力。

參考文獻

[1] [1] FAO.FAO Statistics[EB/OL].[2015-02-12].http：//www.fao.org/statistics/en/.

[2] VASIL V，CASTILLO A M，F(xiàn)ROMM M E，et al.Herbicide resistant fertile transgenic wheat plants obtained by microprojectile[J].Nature Biotechnology，1992，10：667-674.

[3] 喻修道，徐兆師，陳明，等.小麥轉基因技術研究及其應用[J].中國農業(yè)科學，2010，43（8）：1539-1553.

[4] UPADHYAY S K，KUMAR J，ALOK A，et al.RNAguided genome editing for target gene mutations in wheat[J].Genomes genetics，2013，3（12）：2233-2238.

[5] WANG Y，CHENG X，SHAN Q，et al.Simultaneous editing of three homoeoalleles in hexaploid bread wheat confers heritable resistance to powdery mildew[J].Nat Biotechnol，2014，32：947-951.

[6] Reuters T. Web of Science Core Collection[EB/OL].[2015-02-12]. http：//thomsonreuters.com/web-of-knowledge/.

[7] CNKI.中國學術期刊網絡出版總庫[DB/OL].[2015-02-12]. http：//cnki.hznet.com.cn/kns55/brief/result.aspx.

[8] 曹新有，劉建軍，程敦公，等.小麥品種冬春性、抗寒性與廣適性的關系[J].麥類作物學報，2012，32（6）：1210-1214.

[9] 袁俊秀，楊文雄.豐產廣適優(yōu)質春小麥新品種：隴春23號[J].麥類作物學報，2009（4）：740.

[10] 殷貴鴻，韓玉林，黃峰，等.小麥新品種周麥16的選育及其特征特性[J].作物雜志，2005（2）：54.

[11] PELLEGRINESCHI A，NOGUERA L M，SKOVMAND B，et al.Identification of highly transformable wheat genotypes for mass production of fertile transgenic plants[J].Genome，2002，45（2）：421-430.

[12] PREZPIEIRO P，GAGO J，LANDN M，et al.Agrobacteriummediated transformation of wheat：general overview and new approaches to model and identify the key factors involved[M]//IFTI .Transgenic plantsAdvances and limitations.Agricultural and Biological Sciences，2012.

[13] 張月婷，廖玉才，黃濤，等.農桿菌介導的小麥轉化體系的優(yōu)化[J].華中農業(yè)大學學報，2012（1）：23-27.

[14] RICHARDSON T，THISTLETON J，HIGGINS T J，et al.Efficient Agrobacterium transformation of elite wheat germplasm without selection[J].Plant cell，tissue and organ culture，2014，119（3）：647-659.

[15] 謝叢華，柳俊.植物細胞工程[M].2版.北京：高等教育出版社，2004.

[16] CHENG M，F(xiàn)RY J E，PANG S，et al.Genetic transformation of wheat mediated by Agrobacterium tumefaciens[J].Plant physiology，1997，115（3）：971-980.

[17] MELCHIORRE M N，LASCANO H R，TRIPPI V S.Transgenic wheat plants resistant to herbicide BASTA obtained by microprojectile bombardment[J].Biocell，2002，26（2）：217-223.

[18] HU T，METZ S，CHAY C，et al.Agrobacteriummediated largescale transformation of wheat（Triticum aestivum L.）using glyphosate selection[J].Plant cell reports，2003，21（10）：1010-1019.

[19] PRZETAKIEWICZ A，KARAS A，ORCZYK W，et al.Agrobacteriummediated transformation of polyploid cereals.The efficiency of selection and transgene expression in wheat[J].Cellular & molecular biology letters，2004，9（4B）：903-917.

[20] MACKINTOSH C A，GARVIN D F，RADMER L E，et al.A model wheat cultivar for transformation to improve resistance to Fusarium Head Blight[J].Plant cell reports，2006，25（4）：313-319.

[21] PELLEGRINESCHI A，NOGUERA L M，SKOVMAND B，et al.Identification of highly transformable wheat genotypes for mass production of fertile transgenic plants[J].Genome，2002，45（2）：421-430.

[22] HENSEL G，KASTNER C，OLESZCZUK S，et al.Agrobacteriummediated gene transfer to cereal crop plants：Current protocols for barley，wheat，triticale，and maize[J].International journal of plant genomics，2009，2009：835608.

[23] YE X G，WANG D W，TAO L L，et al.Transgenic wheat plants derived from Agrobacterium mediated transformation of mature embryo tissues[J].Cereal research communications，2009，37（1）：1-12.

[24] PATNAIK D，KHURANA P.Genetic transformation of Indian bread（T.aestivum）and pasta（T.durum）wheat by particle bombardment of mature embryoderived calli[J].BMC plant biology，2003，3：5.

[25] MOGHAIEB R E，ELARABI N I，MOMTAZ O A，et al.Genetic transformation of mature embryos of bread（T.aestivum）and pasta（T.durum）wheat genotypes[J].GM crops，2010，1（2）：87-93.

[26] RAJA N I A B，BANO A，RASHID H，et al.Improving agrobacterium mediated transformation protocol for integration of XA21 gene in wheat（Triticum aestivum L.）[J].Pakistan journal of botany，2010，42（5）：3613-3631.

[27] 張東武，劉輝，趙惠賢.小麥成熟胚組織培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及高再生率基因型的篩選[J].麥類作物學報，2011（5）：847-852.

[28] DING L，LI S，GAO J，et al.Optimization of Agrobacteriummediated transformation conditions in mature embryos of elite wheat[J].Molecular biology reports，2009，36（1）：29-36.

[29] He C M，ZHANG W W，GAO Q，et al.Enhancement of drought resistance and biomass by increasing the amount of glycine betaine in wheat seedlings[J].Euphytica，2011，177（2）：151-167.

[30] 王維.利用農桿菌介導的幼穗法將水稻OsDREB2.2基因導入小麥的研究[D].保定：河北農業(yè)大學，2012.

[31] 葉興國，陳明，杜麗璞，等.小麥轉基因方法及其評述[J].遺傳，2011（5）：422-430.

[32] SPARKS C A，JONES H D.Biolistics transformation of wheat[J].Methods in molecular biology，2009，478：71-92.

[33] LI J R，YE X G，AN B Y，et al.Genetic transformation of wheat：Current status and future prospects[J].Plant biotechnology reports 2012，6（3）：183-193.

[34] 李志亮，吳忠義，楊清，等.花粉管通道法在玉米基因工程改良中的應用[J].玉米科學，2010（4）：71-73，76.

[35] 簡純平，李開綿，歐文軍.花粉管通道法轉基因育種研究進展[J].熱帶作物學報，2012（5）：956-961.

[36] GAO X，ZHANG L，ZHOU S，et al.AtMYB12 gene：A novel visible marker for wheat transformation[J].Molecular biology reports，2011，38（1）：183-190.

[37] Center for Environmental Risk Assessment.MON71800[EB/OL].[2015-02-12].http：//www.cera-gmc.org/action=gm_crop_database&mode=ShowProd&data=MON71800.

[38] BINKA A，ORCZYK W，NADOLSKAORCZYK A.The Agrobacteriummediated transformation of common wheat（Triticum aestivum L.）and triticale（x Triticosecale Wittmack）：Role of the binary vector system and selection cassettes[J].Journal of applied genetics，2012，53（1）：1-8.

[39] 蔡琳.小麥組織培養(yǎng)體系優(yōu)化及抗凍基因KN2轉化小麥的研究[D].武漢：華中農業(yè)大學，2011.