張翔，江興林，周利玲，吳和平，梁長健

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，湖南 長沙 410007；2.湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南 懷化 418000

大黃素對大鼠動脈粥樣硬化形成的干預(yù)及對血清T-AOC、SOD和MDA水平的影響

張翔1，江興林2，周利玲2，吳和平2，梁長健2

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，湖南 長沙 410007；2.湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南 懷化 418000

目的：旨在探討大黃素干預(yù)大鼠動脈粥樣硬化的作用及機制。方法：選擇SPF級雄性SD大鼠48只，隨機分為6組，每組8只，共飼養(yǎng)實驗觀察12周。普通飼料組全程每天給予普通飼料喂養(yǎng)，其它5組前8周每天給予高脂飼料喂養(yǎng)，后4周改為每天普通飼料喂養(yǎng)，并進行藥物干預(yù)。大黃素大/中/小劑量3個組，分別給予大黃素80mg/kg、40mg/kg、20mg/kg灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀0.3mg/kg灌胃，高脂飼料組和普通飼料組不給藥物干預(yù)，僅給予等量（2mL）生理鹽水灌胃。6組在實驗前和實驗后第4、8、12周觀察體質(zhì)量的變化；第12周末處死動物，測其血清總抗氧化能力（total-antioxidantcapacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）的含量；切片觀察主動脈壁粥樣硬化改變情況。結(jié)果：實驗前各組大鼠間體質(zhì)量的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。實驗的第4周、8周、12周周末各組大鼠體質(zhì)量均有增長，其中第4周末各組大鼠的體質(zhì)量與實驗前比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），各組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；第8周末大黃素大/中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組的體質(zhì)量顯著高于普通飼料組（P＜0.05）；第12周末大黃素中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組的體質(zhì)量顯著高于普通飼料組（P＜0.05）。第12周末血清測定結(jié)果，大黃素大/中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組T-AOC、SOD的含量均高于普通飼料組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而MDA的含量，高脂飼料組明顯高于普通飼料組、大黃素大/中/小劑量組和阿托伐他汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。普通飼料組大鼠動脈壁形態(tài)正常，高脂飼料組呈明顯的AS，中層平滑肌細(xì)胞增生，并向內(nèi)膜下遷移，內(nèi)膜水腫，并可見明顯的泡沫狀脂質(zhì)顆粒沉積。大黃素大劑量組、阿托伐他汀組動脈壁形態(tài)接近正常。結(jié)論：大黃素與阿托伐他汀均可干預(yù)大鼠動脈粥樣硬化的形成，兩者作用相似。

動脈粥樣硬化；大黃素；大鼠；血清總抗氧化能力（T-AOC）；超氧化物歧化酶（SOD）；丙二醛（MDA）

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）的發(fā)病機制較為復(fù)雜，炎癥和氧化應(yīng)激是AS形成的主要因素，近年來研究也顯示氧化應(yīng)激與AS的發(fā)病密切相關(guān)。本實驗應(yīng)用不同劑量大黃素（em odin，EMD）干預(yù)SD大鼠AS的效果，并觀察SD大鼠血清總抗氧化能力（total-antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dism utase，SOD）、丙二醛（malonal dehyde，MDA）3種抗氧化物、抗氧化酶及氧化物的水平的變化，并與阿托伐他?。寡趸幬铮┳霰容^，結(jié)果報道如下。

1 材料和方法

1.1 動物分組及處理 選擇SPF級雄性SD大鼠48只，體質(zhì)量200～240 g（220±15）g，7～8周齡，購于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院動物實驗中心，動物許可證編號：SYXK（湘）2012-0003。大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后按隨機數(shù)字表法分為6組，每組8只。分別為：普通飼料組、大黃素大劑量組（80m g/kg）、大黃素中劑量組（40m g/kg）、大黃素小劑量組（20m g/kg）、阿托伐他汀組（0.3 m g/kg）、高脂飼料組。6組動物共飼養(yǎng)觀察12周。從實驗第一天開始，普通飼料組全程每天給予普通飼料喂養(yǎng)；其它5組前8周每天給予高脂飼料（3%膽固醇、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料）喂養(yǎng)，后4周改為普通飼料喂養(yǎng)。均為自由進食和飲水。大黃素大/中/小劑量組：后4周改為普通飼料喂養(yǎng)，同時分別給予大黃素80 m g/kg、40 m g/kg、20m g/kg灌胃，每天1次；阿托伐他汀組：后4周改為普通飼料喂養(yǎng)，同時給予阿托伐他汀0.3 m g/kg灌胃，每天1次；高脂飼料組：后4周改為普通飼料喂養(yǎng)，并和普通飼料組一起給予等量（2m L）生理鹽水灌胃，每天1次。喂養(yǎng)觀察12周后，處死前禁食12 h以上，用3%異戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動脈取血后處死。血液標(biāo)本3 000 r/m in離心10m in后取血清測T-AOC、SOD、MDA。取大鼠主動脈弓與胸主動脈交界處約1 cm長，以10%中性甲醛固定，石蠟包埋，水平橫切面制備石蠟切片，蘇木精伊紅（HE）染色。

1.2 藥品與試劑 大黃素，購自陜西西安森弗生物技術(shù)有限公司，批號：SF201107；阿托伐他汀，購自北京嘉林藥業(yè)股份有限公司，批號：110808；膽固醇，購自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號：20110403。

1.3 主要儀器 石蠟包埋機（德國Leica）；721型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；37℃水浴箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠）；高速離心機（美國Eppendorf）；自動切片機（德國Leica）；倒置顯微鏡（東京OLYMPUS）；低速自動平衡離心機（白洋離心機廠）；漩渦混合器（通達科技）。

1.4 體質(zhì)量測定 各組在實驗開始時和實驗后第4周、8周、12周末，采用動物電子天平稱量大鼠的體質(zhì)量，觀察體質(zhì)量（g）的增長情況。

1.5 T-AOC、SOD、MDA的檢測 取血清，采用T-AOC測定試劑盒，購自上海陽光試劑有限公司，通過比色可測出其抗氧化能力的高低原理檢測機體的總抗氧能力；采用黃嘌呤氧化酶法（羥胺法）測血清中SOD活力和MDA含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件處理，計量資料以（±s）表示，組間比較方差齊時直接采用t檢驗，方差不齊時采用近似t檢驗（t'檢驗），并在不同時間點上進行組間比較。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠不同時間點體質(zhì)量變化的比較 見表1。實驗前各組大鼠間體質(zhì)量的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。實驗的第4周、8周、12周周末各組大鼠體質(zhì)量均有增長，其中第4周末各組大鼠的體質(zhì)量與實驗前比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），各組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；第8周末大黃素大/中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組的體質(zhì)量顯著高于普通飼料組（P＜0.05）；第12周末大黃素中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組的體質(zhì)量顯著高于普通飼料組（P＜0.05）。

表1 各組大鼠不同時間點體質(zhì)量變化的比較（±s） g

表1 各組大鼠不同時間點體質(zhì)量變化的比較（±s） g

與實驗前比較，①P＜0.05；與普通飼料組比較，②P＜0.05

組別普通飼料組大黃素大劑量組大黃素中劑量組大黃素小劑量組阿托伐他汀組高脂飼料組樣本數(shù)888888實驗前214.34±10.11 214.48±20.13 216.01±14.09 213.02±18.36 215.05±21.12 214.74±20.66 第4周279.31±23.14①292.57±25.21①291.12±22.07①289.56±17.73①293.76±16.22①291.16±19.71①第8周291.46±16.32 316.09±16.08②320.16±17.31②318.22±17.36②321.62±16.82②320.13±19.21②第12周301.04±11.24 312.07±15.61 324.50±19.25②325.02±16.24②319.05±14.05②329.25±17.84②

2.2 各組大鼠第12周末血清T-AOC、SOD、MDA的測定結(jié)果比較 見表2。第12周末血清測定結(jié)果，大黃素大/中/小劑量組、阿托伐他汀組、高脂飼料組T-AOC、SOD的含量均高于普通飼料組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而MDA的含

量，高脂飼料組明顯高于普通飼料組、大黃素大/中/小劑量組和阿托伐他汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。需要說明之一，大黃素大/中/小劑量組T-AOC、SOD的含量隨著劑量的減少而減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。需要說明之二，高脂飼料組T-AOC含量明顯高于其它5組（P＜0.05），這可能與高脂飲食抗氧化能力加強有關(guān)，但MDA含量明顯高于其它5組，這是氧化產(chǎn)物過多的表現(xiàn)。

表2 各組大鼠第12周末血清T-AOC、SOD、MDA測定結(jié)果比較（x±s）

2.3 各組組織切片觀察結(jié)果 見圖1。普通飼料組大鼠動脈壁形態(tài)正常，高脂飼料組呈明顯的AS，中層平滑肌細(xì)胞增生，并向內(nèi)膜下遷移，內(nèi)膜水腫，并可見明顯的泡沫狀脂質(zhì)顆粒沉積。大黃素大劑量組、阿托伐他汀組動脈壁形態(tài)接近正常。

圖1 各組HE染色組織切片圖（×200）

3 討論

氧化應(yīng)激是指機體在遭受各種有害刺激時，體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)活性氧族（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生與抗氧化之間失衡，從而導(dǎo)致組織的損傷［1］。氧化應(yīng)激學(xué)說是AS形成學(xué)說的重要組成部分［2］。ROS可以氧化細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸，反應(yīng)的最終產(chǎn)物是MDA，MDA含量與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度間接相關(guān)，可間接反映AS斑塊的穩(wěn)定性和嚴(yán)重程度，因此本試驗選取富有代表性的氧化指標(biāo)MDA進行研究。SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，SOD可以消除體內(nèi)的超氧陰離子及脂質(zhì)過氧化物，是體內(nèi)重要的ROS清除劑，可以在分子水平、細(xì)胞水平防止和減輕機體組分受到過氧化損傷。因此，通過對SOD的測定可反映機體抗氧化能力。人體的抗氧化系統(tǒng)是一個可與免疫系統(tǒng)相比擬的、具有完善和復(fù)雜功能的系統(tǒng)，當(dāng)機體處于亞健康或疾病狀態(tài)的時候，血清T-AOC可作為疾病的診斷和預(yù)測指標(biāo)。所以本研究選取T-AOC、SOD 2種有代表性的抗氧化指標(biāo)。

大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根和根莖。大黃素是一種從傳統(tǒng)中藥大黃的根莖提取的主要有效單體，其藥理作用主要為抗炎、抗氧化、清除氧自由基、護肝及糾正脂代謝紊亂等［3］。

本實驗采用高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠復(fù)制AS大鼠模型，8周末高脂飼料飼養(yǎng)的5組大鼠的體質(zhì)量均明顯高于普通飼料組；12周末HE染色發(fā)現(xiàn)高脂飼料組大鼠動脈出現(xiàn)平滑肌細(xì)胞增生，并向內(nèi)膜下遷移，內(nèi)膜水腫，明顯的泡沫狀脂質(zhì)顆粒沉積，說明大鼠AS模型形成。而大黃素大劑量組與阿托伐他汀組動脈壁形態(tài)接近普通飼料組，提示大黃素對高脂大鼠動脈壁形態(tài)的影響隨著劑量的增加效果逐步明顯，至大劑量才與阿托伐他汀作用相似，動脈壁形態(tài)接近正常，這與課題組以往的研究結(jié)果即大黃素的作用效果有劑量依賴關(guān)系較為一致［3］。

本實驗進一步證明，大黃素組與阿托伐他汀組血清中T-AOC、SOD的含量均高于普通飼料組，提示抗氧化能力增強；而MDA含量低于高脂飼料組，提示氧化減弱；大黃素與阿托伐他汀的作用無顯著區(qū)別，提示二者干預(yù)大鼠AS的機制可能相似。具體的干預(yù)機制有待于進一步的深入研究。

［1］岳雅麗，郭妍，王俊宏，等.老年高血壓患者血管硬化與非酶糖基化及氧化應(yīng)激的相關(guān)性研究［J］.實用老年醫(yī)學(xué)，2014，28（1）：33-36.

［2］吳先杰，王永霞.動脈粥樣硬化發(fā)生機制研究現(xiàn)狀及思路［J］.中華實用診斷與治療雜志，2012，26（7）：629-631.

［3］周利玲，吳和平，李樹平，等.大黃素對鵪鶉脂質(zhì)代謝的影響研究［J］.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，4（13）：821-823.

（責(zé)任編輯：駱歡歡）

Research o f Em od in on In terven tion o f Scleratherom a Fo rm ation in Rats Artery and Effect o f Serum T-AOC，SOD and MDA

Zhang Xiang，Jiang Xinglin，Zhou Liling，Wu Heping，Liang Changjian

Objective：To investigate the role and m echanism of em odin on intervention of the form ation of scleratherom a in rats artery.Methods：Forty-eightm ale SD rats in SPFw ere random ly divided into six groups，8 rats in each group，allofw hich w ere observed based on the feeding experim ents for12 w eeks.Norm aldietgroup w as given normaldiet throughout the days.In the first 8 w eeks，the other five groups w ere given high fat diet every day，and in the last 4 w eeks w ere given norm aldiet and drug intervention.The three groups，em odin large/m edium/sm alldoses，w ere given em odin 80 m g/kg，40m g/kg，20m g/kg orally once a day.Atorvastatin group w as given atorvastat0.3m g/kg orally once a day.High-fat diet group and norm aldiet group w ere not given drug intervention，and only given the same amount（2 m L）of norm al saline once a day.In these six groups，changes of bodym ass w ere observed in the 4 th，8 th，and 12 th w eek after the experim ent.At the end of the 12 th w eek，the content of Total antioxidation（T-AOC）， m alondialdehyde（MDA），Superoxide dism utase（SOD）in serum w ere m easured. Sliced observation of aorta atherosclerosis w as also conducted.Result：The increase of body m ass in the five high fat diet feeding groups w as larger than that in norm al diet feeding group（P＜0.05）.The levels of T-AOC， SOD in em odin large/m edium/low dose groups，atorvastatin group，the high-fat diet group w ere higher than those in norm al diet group（P＜

Artery scleratherom a； Em odin； Total antioxidation（T-AOC）； Ratm alondialdehyde（MDA）； Superoxide dism utase（SOD）

R543.5

A

0256-7415（2015）12-0230-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.12.103

2015-05-11

湖南省中醫(yī)藥管理局科學(xué)研究項目（2010066）

張翔（1984-），男，住院醫(yī)師，主要從事心腦血管系統(tǒng)疾病的病理學(xué)研究工作。

周利玲，E-mail：hhyzzll@126.com。

0.05），w hile the content of MDA in high-fat diet group w as significantly higher than that in the other five groups（P＜0.05）. High-fat diet group show ed a significant slice of atherosclerosis.The artery w allof the norm aldiet group w as in norm al form，thatof the em odin large dose and the atorvastatin group w as close to the norm al form.Conclusion：Em odin and atorvastatinm ay exertsim ilareffecton rats atherosclerosis form.