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        拮抗放線菌F2發(fā)酵液的穩(wěn)定性

        2015-10-20 14:58:14蔣桂芳宋力
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年9期
        關(guān)鍵詞:放線菌發(fā)酵液穩(wěn)定性

        蔣桂芳++宋力

        摘要:采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定放線菌F2發(fā)酵液的抑菌活性及發(fā)酵液的穩(wěn)定性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),F(xiàn)2發(fā)酵液對(duì)辣椒炭疽病菌有較強(qiáng)的拮抗作用,且在低溫貯藏下仍有很好的抑菌效果,在偏酸性或偏堿性條件下穩(wěn)定,抗熱性較差,具有較強(qiáng)的抗紫外線能力,該活性物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的分配率較高,為一種酯溶-水溶性抗生素。

        關(guān)鍵詞:放線菌;發(fā)酵液;活性物質(zhì);穩(wěn)定性

        中圖分類號(hào): S432.4+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2015)09-0184-02

        辣椒炭疽?。–olletotrichum capsici)是危害甜椒、辣椒生產(chǎn)的主要病害之一。目前,辣椒炭疽病的防治主要集中于施用化學(xué)農(nóng)藥及抗病品種選育等農(nóng)業(yè)措施,大量化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、病蟲(chóng)害抗性增加、環(huán)境污染等問(wèn)題,嚴(yán)重影響農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展[1]。農(nóng)用抗生素是微生物產(chǎn)生的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物,可用來(lái)殺蟲(chóng)、滅菌、除草及調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)發(fā)育的一類微生物農(nóng)藥[2]。隨著環(huán)境保護(hù)、綠色食品及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要,農(nóng)用抗生素以其選擇性強(qiáng)、高效低毒、殘留短等優(yōu)點(diǎn),正日益受到人們的重視。目前,已發(fā)現(xiàn)的抗生素中大約有2/3由放線菌產(chǎn)生,從土壤中分離具有農(nóng)用活性的放線菌是目前微生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要途徑[3]。本研究從重慶地區(qū)的土壤中分離篩選出1株對(duì)辣椒炭疽病具較強(qiáng)抑菌活性的放線菌F2,對(duì)該拮抗菌發(fā)酵液的抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行研究,以便為該菌株的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論和實(shí)踐依據(jù)。

        1材料和方法

        1.1供試菌株

        拮抗放線菌F2和辣椒炭疽病菌由筆者所在的實(shí)驗(yàn)室自行分離保存。

        1.2培養(yǎng)基

        PDA培養(yǎng)基:用于辣椒炭疽病菌培養(yǎng)及抑菌試驗(yàn)。高氏一號(hào)培養(yǎng)基:用于放線菌F2培養(yǎng)。種子培養(yǎng)基:20 g可溶性淀粉,0.5 g K2HPO4,1 g KNO3,0.5 g NaCl,0.5 g MgSO4·7H2O,0.01 g FeSO4·7H2O,1 000 mL H2O,pH值7.2~7.4。發(fā)酵培養(yǎng)基:20 g大豆粉(沸水煮30 min,紗布過(guò)濾后保留濾液),10 g蔗糖,5 g可溶性淀粉,2 g蛋白胨,2 g酵母膏,2 g NaCl,1 g CaCO3,0.5 g KH2PO4,0.5 g MgSO4·7H2O,1 000 mL H2O,pH值 7.0。

        1.3培養(yǎng)方法

        種子液制備:挑取活化菌種F2,接入裝有50 mL種子培養(yǎng)基的150 mL三角瓶中,在28 ℃、180 r/min下培養(yǎng)48 h作為活化的種子液。發(fā)酵液的制備:取1 mL種子液接入裝有50 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,在28 ℃、180 r/min條件下振蕩培養(yǎng)5 d。將發(fā)酵液經(jīng)粗濾后再經(jīng)微孔濾膜(0.22 μm)過(guò)濾,得到無(wú)菌發(fā)酵濾液,無(wú)菌容器保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.4菌株F2發(fā)酵液中活性產(chǎn)物的抑菌作用測(cè)定

        采用菌絲生長(zhǎng)速率法[4-5],以辣椒炭疽病菌為檢測(cè)菌,測(cè)定菌株F2發(fā)酵液中活性代謝產(chǎn)物的抑菌作用。將菌株F2的發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基按1 ∶3混勻,倒平板,待凝固后將辣椒炭疽病菌菌餅(8 mm)倒置放在平板中央,每處理3次重復(fù),以無(wú)菌水和PDA培養(yǎng)液處理為對(duì)照。培養(yǎng)96 h后,用“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑,計(jì)算抑制率:抑菌率=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)×100%。

        1.5F2菌株發(fā)酵液性質(zhì)測(cè)定[6-10]

        1.5.1熱穩(wěn)定性試驗(yàn)將F2菌株發(fā)酵液經(jīng)40、50、60、70、80、90、100 ℃分別處理30 min,以未處理的發(fā)酵液為對(duì)照,用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌活性,重復(fù)3次。

        1.5.2pH值穩(wěn)定性試驗(yàn)將F2菌株發(fā)酵液用1 mol/L NaOH溶液和l mol/L HCl溶液分別調(diào)pH值為3、4、5、6、7、8、9、10,并于4 ℃冰箱中過(guò)夜,然后將各發(fā)酵液的pH值調(diào)回至原發(fā)酵液pH值為6.5,以未處理的發(fā)酵液為對(duì)照,用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌活性,重復(fù)3次。

        1.5.3紫外照射對(duì)發(fā)酵液穩(wěn)定性的影響將F2菌株發(fā)酵液于254 nm紫外燈下分別照射5、10、15、20、25、30 min后,以未處理的發(fā)酵液為對(duì)照,用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌活性,重復(fù)3次。

        1.5.4儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)將F2菌株發(fā)酵液在4 ℃和室溫(25 ℃)條件下分別保存3、7、15 d后,以未處理的發(fā)酵液為對(duì)照,用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌活性,重復(fù)3次。

        1.5.5活性物質(zhì)萃取試驗(yàn)取40 mL發(fā)酵液分成4份,分別加入等體積的正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚,在磁力攪拌器上攪拌均勻,于分液漏斗中靜置過(guò)夜。以未處理的發(fā)酵液為對(duì)照,用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑菌活性,重復(fù)3次。

        2結(jié)果與分析

        2.1菌株F2發(fā)酵液對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用

        將拮抗放線菌F2的發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合制平板,接種辣椒炭疽病菌培養(yǎng)4 d。與對(duì)照相比,處理組平板上炭疽病菌株生長(zhǎng)緩慢,菌落邊緣蔓延不明顯,經(jīng)測(cè)定該發(fā)酵液的抑菌率達(dá)到81.81%(圖1)。以上結(jié)果表明,F(xiàn)2發(fā)酵液對(duì)辣椒炭疽病菌絲生長(zhǎng)有顯著的拮抗作用。

        2.2溫度對(duì)穩(wěn)定性的影響

        隨著處理溫度升高,F(xiàn)2發(fā)酵液的抑菌活性緩慢下降,與對(duì)照比較,在70 ℃條件下抑菌率為60%以上,但70 ℃后發(fā)酵液的抑菌效果明顯降低,90 ℃處理后抑菌率降低到27%(圖2)。以上結(jié)果表明,F(xiàn)2發(fā)酵液中生物活性物質(zhì)熱穩(wěn)定性較弱,高溫會(huì)對(duì)其活性造成嚴(yán)重影響。

        2.3pH值對(duì)穩(wěn)定性的影響

        在室溫下F2發(fā)酵液中活性代謝產(chǎn)物在酸性條件下抑菌活性較穩(wěn)定,pH值在3~5范圍內(nèi),發(fā)酵液活性代謝產(chǎn)物的抑菌活性與對(duì)照發(fā)酵液相近,穩(wěn)定性較好。隨著堿性增強(qiáng),抑菌率呈下降趨勢(shì),但幅度不大,pH值在10下依然保持著較強(qiáng)的抑菌活性,抑菌率為72.7%(圖3)。因此,F(xiàn)2發(fā)酵濾液pH值在3~10范圍內(nèi),對(duì)酸堿具有較好的穩(wěn)定性,但要注意控制pH值范圍,以盡量減少活性成分的損失。

        2.4紫外照射對(duì)穩(wěn)定性的影響

        在紫外線照射5~30 min的情況下,隨著紫外線照射時(shí)間的增長(zhǎng),活性物質(zhì)的抑菌率有下降趨勢(shì),經(jīng)過(guò)半個(gè)小時(shí)照射,活性物質(zhì)的抑菌率為63.6%,與對(duì)照比較下降幅度小于5%(圖4)。以上結(jié)果表明,該菌株發(fā)酵液中活性代謝產(chǎn)物對(duì)紫外線不敏感,有較強(qiáng)的抗紫外線照射的能力,可以用紫外光適當(dāng)照射發(fā)酵液來(lái)殺滅雜菌。

        2.5儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)穩(wěn)定性的影響

        在室溫與冷藏條件下活性物質(zhì)抑菌率都呈下降趨勢(shì),但冷藏條件下抑菌率下降緩慢,經(jīng)15 d儲(chǔ)藏后抑菌率為7272%,其抑菌活性變化均不明顯。而室溫條件下儲(chǔ)藏3 d時(shí)活性明顯降低,經(jīng)過(guò)15 d儲(chǔ)藏后抑菌率為63.6%,與對(duì)照相比下降了9.09百分點(diǎn)(圖5)。以上結(jié)果表明,F(xiàn)2發(fā)酵液中活性代謝產(chǎn)物儲(chǔ)藏穩(wěn)定性較好,且低溫儲(chǔ)藏效果更好。

        2.6不同有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)萃取的影響

        活性物質(zhì)在原始pH值條件下能被三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚及正丁醇萃取,且萃取效果較明顯,大部分抑菌活性物質(zhì)都進(jìn)入到有機(jī)相中,只有石油醚萃取活性物質(zhì)能力較弱(表1)。根據(jù)相似相溶原理,可大致判斷該活性物質(zhì)極性較強(qiáng)。此外,該活性物質(zhì)既能溶于溶媒又能溶于水,是一種酯溶-水溶性抗生素,且乙酸乙酯、正丁醇的萃取效果比三氯甲烷和石油醚的效果好。

        1發(fā)酵上清液萃取試驗(yàn)結(jié)果

        萃取溶劑生長(zhǎng)抑菌率(%)水相有機(jī)相三氯甲烷18.1977.27乙酸乙酯63.6381.81石油醚81.8127.28正丁醇54.5581.813結(jié)論

        菌株F2發(fā)酵液中的活性物質(zhì)對(duì)辣椒炭疽病菌有很好的抑制作用,菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)到80%以上,對(duì)用于防治辣椒炭疽病具有較高潛在價(jià)值。

        菌株F2發(fā)酵液活性物質(zhì)對(duì)高溫的穩(wěn)定性差,對(duì)酸堿具有較好的穩(wěn)定性,有較強(qiáng)的抗紫外線能力,耐低溫貯藏。

        菌株F2發(fā)酵液經(jīng)初步處理,采用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取活性物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的分配率較高,是一種酯溶-水溶性抗生素,可進(jìn)一步分離純化應(yīng)用于辣椒炭疽病的生物防治。

        參考文獻(xiàn):

        [1]蔣桂芳,宋力. 辣椒炭疽病生物防治技術(shù)的研究與展望[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,53(11):2481-2484,2485.

        [2]朱昌雄,宋淵. 我國(guó)農(nóng)用抗生素的現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)探討[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2006,8(6):17-19.

        [3]沈寅初. 農(nóng)用抗生素研究開(kāi)發(fā)新進(jìn)展[J]. 植保技術(shù)與推廣,1997,19(6):35-37.

        [4]張玲玲,董美玉,許鳳春,等. 放線菌C3-11的抗菌活性篩選及發(fā)酵液穩(wěn)定性研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(3):109-110,113.

        [5]黃劍,李天華,崔藝久,等. 放線菌H50發(fā)酵液抑菌活性及其穩(wěn)定性測(cè)定[J]. 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,43(3):311-315.

        [6]于銀霞. 168號(hào)放線菌發(fā)酵產(chǎn)物的分離提取和活性研究[D]. 北京:首都師范大學(xué),2009.

        [7]王守彬,王倩,姜曉艷,等. 一株拮抗放線菌的分離鑒定及抑菌活性物質(zhì)的初步研究[J]. 曲阜師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2012,38(4):75-79.

        [8]馮俊濤,張錦恬,韓立榮,等. 放線菌HJ1-2菌株發(fā)酵液抑菌譜及穩(wěn)定性的研究[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2009,18(6):280-284.

        [9]李璐寧,張薇,趙永強(qiáng),等. 放線菌Y23菌株發(fā)酵液抗菌活性及穩(wěn)定性測(cè)定[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(1):71-74.

        [10]楊曉楠,李楊,苗建強(qiáng),等. 拮抗放線菌T111菌株鑒定、發(fā)酵液理化性質(zhì)測(cè)定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2011,17(4):541-547.楊衛(wèi)民,杜京旗,趙君 . 火焰原子吸收光譜法測(cè)定不同產(chǎn)地棗果中的礦質(zhì)元素[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(9):331-334.

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