徐建輝　何燕武　陳海明

38kD-lgG和TSPOT-TB聯(lián)合檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用

徐建輝何燕武陳海明

目的 探討抗結(jié)核抗體（38kD-lgG）和結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（TSPOT-TB）聯(lián)合檢測(cè)在結(jié)核病臨床診斷中的價(jià)值。方法 采用上述兩種方法單項(xiàng)或聯(lián)合檢測(cè)疑結(jié)核患者114例，其中結(jié)核患者72例，非結(jié)核患者42例，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果 TSPOT-TB及38kD-IgG試驗(yàn)單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)核菌陽(yáng)性（菌陽(yáng)）結(jié)核患者的敏感性分別為90.63%和78.13%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)敏感性為96.88%。TSPOT-TB及38kD-IgG試驗(yàn)單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)核菌陰性（菌陰）結(jié)核患者的敏感性分別為80.00%和77.50%，聯(lián)合檢測(cè)敏感性為95.00%，聯(lián)合檢測(cè)與兩種單項(xiàng)檢測(cè)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組中，TSPOT-TB及38kD-IgG試驗(yàn)特異性分別為90.48%和78.57%，聯(lián)合檢測(cè)特異性為66.67%。TSPOT-TB試驗(yàn)對(duì)3種肺外結(jié)核的檢測(cè)敏感性顯著高于38kD-IgG試驗(yàn)（P＜0.05）。結(jié)論 對(duì)于菌陽(yáng)患者，TSPOT-TB試驗(yàn)敏感性較高。對(duì)于菌陰患者，聯(lián)合檢測(cè)敏感性較高。38kD-lgG和TSPOT-TB聯(lián)合檢測(cè)可提高結(jié)核病的診斷敏感性。

結(jié)核病 抗結(jié)核抗體 結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)

結(jié)核病是一種慢性傳染病，近幾年環(huán)境污染日益嚴(yán)重，結(jié)核病發(fā)病率逐年升高［1］。我國(guó)是結(jié)核病高發(fā)國(guó)家［2］，由于病因復(fù)雜，確診相對(duì)較為困難。臨床調(diào)查顯示，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（TSPOT-TB）較抗結(jié)核抗體（38kD-lgG）試驗(yàn)具有更高的特異性和敏感性［3，4］。本文通過(guò)對(duì)結(jié)核病患者及健康對(duì)照組進(jìn)行38kD-lgG檢測(cè)和TSPOT-TB斑點(diǎn)試驗(yàn)，探討兩種方法單項(xiàng)或聯(lián)合檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇本院2012年1月至2014年1月收治的114例疑患結(jié)核患者，行涂片檢測(cè)、胸部X線或CT、結(jié)核菌素試驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)室生化檢查，檢測(cè)過(guò)程參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)頒布的《肺結(jié)核診斷和治療指南》［5］。最終確診非結(jié)核病患者42例，其中男27例，女15例；平均年齡（45.3±17.4）歲。確診結(jié)核病患者72例，男47例，女25例；平均年齡（49.3±20.5）歲。其中，結(jié)核性胸膜炎患者27例、結(jié)核性腹膜炎患者20例、結(jié)核性腦膜炎患者25例。結(jié)核菌陰性（菌陰）患者40例，結(jié)核菌陽(yáng)性（菌陽(yáng)）患者32例。排除合并有心腦血管、造血系統(tǒng)及肝、腎等內(nèi)臟器官嚴(yán)重疾病患者，無(wú)免疫抑制劑用藥史及放化療治療史。患者及其家屬均已簽署知情同意書(shū)。

1.2方法 （1）結(jié)核抗體檢查：真空采血管采集患者靜脈血約5ml，迅速混勻，在最短時(shí)間內(nèi)用玻璃棒剝離纖維蛋白，保證血標(biāo)本無(wú)渾濁沉淀，以免吸入而導(dǎo)致反應(yīng)膜孔堵塞。利用斑點(diǎn)免疫金滲濾試驗(yàn)（DIGFA）原理測(cè)定檢測(cè)血清標(biāo)本中的38kD-lgG（試劑盒由濰坊市康華生物技術(shù)有限公司提供）。（2）結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)：真空采血管采集患者靜脈血約5ml，密度梯度離心分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，保證血標(biāo)本無(wú)渾濁沉淀，采用上海復(fù)星科技有限公司提供的TSPOTTB試劑盒對(duì)結(jié)核菌致敏T細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。隨后顯微鏡觀察并記錄陰性斑點(diǎn)的數(shù)量，同時(shí)檢測(cè)并記錄結(jié)合特異性抗原致敏的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的數(shù)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.138kD-lgG和TSPOT-TB對(duì)菌陽(yáng)和菌陰結(jié)核患者檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)菌陽(yáng)結(jié)核患者，TSPOT-TB方法的檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.217，P＜0.05）。聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=5.113，P＜0.05），而與TSPOT-TB比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.247，P＞0.05）。對(duì)菌陰結(jié)核患者，聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)（χ2=4.927、3.816，P＜0.05）。對(duì)照組中，38kD-lgG和TSPOT-TB的特異性分別為78.57%和90.48%，TSPOT-TB的特異性顯著高于38kD-lgG（χ2=3.912，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1　38kD-lgG和TSPOT-TB對(duì)菌陽(yáng)結(jié)核和菌陰結(jié)核患者檢測(cè)結(jié)果比較（n）

2.238kD-lgG和TSPOT-TB對(duì)3種肺外結(jié)核的檢測(cè)結(jié)果比較 對(duì)結(jié)核性腦膜炎患者，TSPOT-TB的陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=3.858，P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)（χ2=6.179、4.029，P＜0.05）。對(duì)結(jié)核性腹膜炎患者，TSPOT-TB的陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.227，P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于單項(xiàng)檢測(cè)（χ2=5.445、3.997，P＜0.05）。對(duì)結(jié)核性胸膜炎患者，TSPOT-TB的陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=4.568，P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于38kD-lgG（χ2=6.002，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2　38kD-lgG和TSPOT-TB對(duì)結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性腹膜炎和結(jié)核性胸膜炎檢測(cè)結(jié)果比較（n）

3　討論

目前全國(guó)關(guān)于結(jié)核病的治療原則是“早期、聯(lián)合、適量、規(guī)律和全程”，早期診斷對(duì)于控制疾病的發(fā)展與傳播具有十分重要的作用。38kD-lgG試驗(yàn)?zāi)軌蛲ㄟ^(guò)檢測(cè)人體血液中的結(jié)核分枝桿菌抗體，判斷患者體內(nèi)是否存在結(jié)核分枝桿菌［6，7］。本文結(jié)果顯示，38kD-lgG試驗(yàn)對(duì)非結(jié)核組的檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)21.43%，證實(shí)38kD-lgG試驗(yàn)具有較高的交叉反應(yīng)存在，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。TSPOT-TB試驗(yàn)是利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法探測(cè)結(jié)核感染者的特異性T細(xì)胞診斷結(jié)核的一種新方法［8］，該法特異性好，靈敏度高，在結(jié)核病臨床診斷中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。本文中TSPOT-TB試驗(yàn)對(duì)菌陽(yáng)患者和菌陰患者的檢測(cè)敏感性達(dá)90.63%和80.00%，對(duì)非結(jié)核組為9.52%，此結(jié)果接近國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道［9，10］。38kD-lgG試驗(yàn)聯(lián)合TSPOT-TB試驗(yàn)對(duì)菌陰患者的檢測(cè)敏感性達(dá)95.00%，原因可能是由于患者的免疫狀態(tài)不同，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)的互補(bǔ)作用提高了結(jié)核病患者的診斷率［11，12］。對(duì)25例結(jié)核性腦膜炎、20例結(jié)核性腹膜炎和27例結(jié)核性胸膜炎的檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明TSPOT-TB試驗(yàn)對(duì)這3種肺外結(jié)核的檢測(cè)敏感性顯著高于38kD-lgG試驗(yàn)。對(duì)結(jié)核性胸膜炎患者，TSPOT-TB試驗(yàn)的檢測(cè)敏感性接近聯(lián)合檢測(cè)，說(shuō)明TSPOT-TB試驗(yàn)在結(jié)核性胸膜炎的診斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，而在結(jié)核性腦膜炎和結(jié)核性腹膜炎檢測(cè)中應(yīng)優(yōu)先采用聯(lián)合檢測(cè)法［13］。

1 Diel R，Loddenkemper R，Nienhaus A. Evidence-based comparison of commercial interferon-gamma release assays for detecting active TB： a metaanalysis. Chest，2010，137（4）： 952～968.

2 全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組.第四次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告.中華結(jié)核和呼吸雜志，2005，25（1）：3～7.

3 趙靜，蔣彩花，汪運(yùn)山，等.抗結(jié)核抗體及結(jié)核感染 T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用.中國(guó)防癆雜志，2011，31（1）：19～21.

4 王立紅，付秀華，張桂芝，等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，中國(guó)防癆雜志，2013，35（12）：992～996.

5 中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì).肺結(jié)核診斷和治療指南.中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24（2）：70～74.

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Objective To evaluate the application value of tuberculosis antibody and enzyme linked immune-spot assay used for Clinical diagnosis of tuberculosis. Methods The two methods were used individually and in combination respectively to 72 active tuberculosis patients and 42 non-tuberculosis in control group. Results For smear positive TB，the sensitivity of TSPOT-TB（90.63%）was significantly higher than that of 38kD-lgG test（78.13%）（P＜0.05），and was epual to the sensitivity of 96.88% of combined detection；for bacteriological negative TB，the sensitivity of combined detection（95%）was significantly higher than that of 85% and 77.50% by TSPOT-TB and 38kD-lgG（P＜0.05）；42 non-tuberculosis control，the sensitivity were 78.57% and 90.48% respectively，the sensitivity of combined detection was 66.67%；the detection sensitivity of extra pulmonary TB by TSPOT-TB were significantly higher than those of 38kD-lgG，and was equal to the sensitivity of combined detection. Conclusion TSPOT-TB test in smear positive patients and tuberculous pleurisy and meningitis in patients with higher sensitivity，in the non tuberculosis population specifi city is good；in the differential diagnosis of smear negative patients，38kD-lgG and TSPOT-TB test and application will improve the greater sensitivity.

Tuberculosis 38kD-lgG TSPOT-TB Diagnosis

315700 浙江省象山縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科