安繼榮，李麗君，陳 宏，成建榮，魏文濤

（1.天水市第四人民醫(yī)院，甘肅 天水 741020；2.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050）

異粘蛋白、血管內(nèi)皮生長因子和CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的臨床病理研究

安繼榮1，李麗君1，陳 宏1，成建榮1，魏文濤2

（1.天水市第四人民醫(yī)院，甘肅 天水 741020；2.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050）

目的 探討異粘蛋白（MTDH）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)水平及臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)70例粘液表皮樣癌組織和26例癌旁組織中MTDH、VEGF、CD44V6的表達(dá)水平。結(jié)果 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的陽性表達(dá)率分別為88.6%、68.6%、72.9%，在對(duì)照組中的陽性表達(dá)率為15.4%、7.7%、19.2%，存在顯著性差異（P＜0.01）。MTDH陽性表達(dá)與組織分化程度、浸潤深度、臨床分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P＞0.05），CD44V6、VEGF陽性表達(dá)與組織分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（均P＜0.05）。隨著臨床病理分期的升高，MTDH陽性檢出率逐漸上升（IV期除外）；VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率隨著分化程度降低而升高。MTDH、VEGF、CD44V6在組織分化良好組與分化不良組中的陽性表達(dá)率分別為87.1%、51.6%、51.6%和89.7%、82.1%、89.7%。淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為82.5%、57.5%、60.0%；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為96.7%、83.3%、90.0%。結(jié)論 MTDH、VEGF、CD44V6參與了粘液表皮樣癌的發(fā)生發(fā)展過程，檢測(cè)其表達(dá)水平有助于判斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

異粘蛋白；血管內(nèi)皮生長因子；CD44V6；粘液表皮樣癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

腫瘤的轉(zhuǎn)移及局部廣泛浸潤是一個(gè)涉及多基因、多信號(hào)通路、多種調(diào)節(jié)機(jī)制的復(fù)雜過程，是細(xì)胞中基因改變不斷累積的結(jié)果［1］。涎腺粘液表皮樣癌為涎腺最常見的惡性腫瘤［2］，是由柱狀、透明和嗜酸性粒細(xì)胞樣特點(diǎn)的粘液細(xì)胞、中間細(xì)胞、表皮樣細(xì)胞構(gòu)成的上皮惡性腫瘤［3］。筆者選擇與腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的異粘蛋白（MTDH）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、CD44V6進(jìn)行研究，探討其在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為臨床判斷預(yù)后及早期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究組為天水市第四人民醫(yī)院腫瘤外科及口腔科2009年1月至2014年1月住院病人的手術(shù)標(biāo)本（70例），術(shù)前均未做化療、放療，男性48例，女性22例，年齡38～74歲，平均53.4歲。其中，原發(fā)腮腺粘液表皮樣癌25例，頜下腺粘液表皮樣癌30例，腭腺粘液表皮樣癌9例，小涎腺粘液表皮樣癌6例，30例區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，所有病例均經(jīng)病理檢查明確診斷。對(duì)照組為粘液表皮樣癌病人的正常涎腺組織（26例）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

研究中使用的鼠抗人MTDH多克隆抗體及SP試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)有限公司。鼠抗人CD44V6多克隆抗體、鼠抗人VEGF多克隆抗體及SABC試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本制成4 um厚的切片兩張，貼于經(jīng)多聚賴氨酸處理過的玻片上，58℃烘烤24 h，一張行HE染色復(fù)查診斷，另一張行免疫組織化學(xué)法處理。染色方法嚴(yán)格按照SABC試劑盒說明書步驟進(jìn)行DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

MTDH著色部位為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色為陽性；在高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)的75%以上為表達(dá)強(qiáng)陽性（+++），51%～74%為表達(dá)陽性（++），25%～50%為表達(dá)弱陽性（+），＜25%為表達(dá)陰性（-），見圖1。CD44V6陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒（見圖2）。以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為VEGF陽性表達(dá)，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野計(jì)算陽性細(xì)胞的百分比，無陽性細(xì)胞計(jì)0分，≤25%計(jì)1分，26%～50% 計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分；著色強(qiáng)度依多數(shù)陽性細(xì)胞染色情況判斷，無著色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。將陽性細(xì)胞百分比計(jì)分與著色強(qiáng)度計(jì)分相加，0～2分為陰性（-），≥3分為陽性（+），見圖3。采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05差異有顯著性。

圖1 MTDH在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

圖2 CD44V6在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

2 結(jié)果

2.1 MTDH、VEGF、CD44V6在研究組與對(duì)照組中的表達(dá)

研究組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為88.6%、68.6%、72.9%，對(duì)照組為15.4%、7.7%、19.2%，兩者比較有顯著性差異（P＜0.01），見表1。

表1 兩組MTDH、VEGF、CD44V6表達(dá)情況比較［n（%）］

2.2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

MTDH表達(dá)與組織分化程度、癌浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P＞0.05），CD44V6、VEGF陽性表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P＜0.05或P＜0.01）。隨著臨床分期的增高，癌組織中MTDH陽性檢出率有逐漸增高趨勢(shì)（IV期除外）；隨著組織分化程度降低，CD44V6、VEGF陽性表達(dá)率升高，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組（見表2）。

表2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

3 討論

異粘蛋白（Metadherin，MTDH）又名星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1（astocyted eievated gene 1，AEG-1），有文獻(xiàn)報(bào)道MTDH既是一種致癌基因，又是血管形成的誘導(dǎo)因子［4］。國內(nèi)外有關(guān)研究表明，MTDH與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究提示，粘液表皮樣癌組織中MTDH陽性表達(dá)率為88.6%（62/70），對(duì)照組為15.4%（4/26），兩者比較有顯著性差異（P＜0.01）。說明MTDH對(duì)粘液表皮樣癌有高度特異性，可能成為較好的粘液表皮樣癌早期診斷的分子生物學(xué)標(biāo)志物。本研究提示，MTDH在組織分化良好組與分化不良組的陽性表達(dá)率分別為87.1%（27/31）、89.7%（35/39），在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為82.5% （33/40），在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為96.7%（29/30）。說明MTDH活性表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)、浸潤深度、臨床分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性。因此，用MTDH活性水平衡量腫瘤惡性程度并由此判斷預(yù)后還需進(jìn)一步研究。

圖3 VEGF在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種分子量為34 kD～45 kD的高度糖基化堿性蛋白，由分子量為17 kD～22 kD的同源雙聚體構(gòu)成。腫瘤血管生成過程受多種血管生成因子調(diào)控，已知有數(shù)十種，包括成纖維細(xì)胞生長因子家族、血管內(nèi)皮生長因子家族及其受體［5］。VEGF過度表達(dá)與腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。VEGF同時(shí)又是腫瘤血管生成最重要的調(diào)節(jié)因子［6］，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，在許多惡性腫瘤中都有VEGF過度表達(dá)。研究組VEGF陽性表達(dá)率為68.6%（48/70），對(duì)照組為7.7%（2/26），兩者比較有顯著性差異（P＜0.01）。VEGF在組織分化良好組與分化不良組的陽性表達(dá)率分別為51.6%（16/31）、82.1%（32/39），在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為57.5%（23/40），在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為83.3%（25/30），差異均有顯著性。提示隨著臨床分期的進(jìn)展，VEGF的陽性表達(dá)率不斷上升，且與組織分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明VEGF具有促進(jìn)粘液表皮樣癌轉(zhuǎn)移及浸潤性生長的作用，對(duì)判斷腫瘤良惡性與預(yù)后有幫助。

CD44指白細(xì)胞分化抗原分化簇第44號(hào)，是一個(gè)典型的單拷貝基因多種表型的細(xì)胞表面跨膜蛋白多糖分子，位于人類CD44基因的11號(hào)染色體短臂上（11p13）。CD44V6是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的CD44黏附分子，在多種腫瘤中表達(dá)，能顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力［7］。研究組中CD44V6的陽性表達(dá)率為72.9%（51/70），對(duì)照組為19.2%（5/26），二者比較有顯著性差異（P＜0.01）。CD44V6在分化良好組與分化不良組中的陽性表達(dá)率分別為51.6%（16/31）和89.7%（35/39），在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為60.0%（24/40），在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為90.0%（27/30）。CD44V6陽性表達(dá)率分化不良組明顯高于分化良好組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，且有顯著性差異，表明CD44V6與粘液表皮樣癌的分化程度及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，今后有可能把它作為判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。

綜上所述，MTDH、VEGF、CD44V6可能成為粘液表皮樣癌臨床診斷、判斷預(yù)后及療效的敏感指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)判斷療效有重要意義，但還需要進(jìn)一步大量病例分析證實(shí)。

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R730.261

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1671-1246（2015）11-0154-03