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        異粘蛋白、血管內(nèi)皮生長因子和CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的臨床病理研究

        2015-10-18 04:55:24安繼榮李麗君成建榮魏文濤
        衛(wèi)生職業(yè)教育 2015年11期
        關(guān)鍵詞:樣癌粘液表皮

        安繼榮,李麗君,陳 宏,成建榮,魏文濤

        (1.天水市第四人民醫(yī)院,甘肅 天水 741020;2.甘肅省腫瘤醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050)

        異粘蛋白、血管內(nèi)皮生長因子和CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的臨床病理研究

        安繼榮1,李麗君1,陳 宏1,成建榮1,魏文濤2

        (1.天水市第四人民醫(yī)院,甘肅 天水 741020;2.甘肅省腫瘤醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050)

        目的 探討異粘蛋白(MTDH)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)水平及臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)70例粘液表皮樣癌組織和26例癌旁組織中MTDH、VEGF、CD44V6的表達(dá)水平。結(jié)果 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的陽性表達(dá)率分別為88.6%、68.6%、72.9%,在對(duì)照組中的陽性表達(dá)率為15.4%、7.7%、19.2%,存在顯著性差異(P<0.01)。MTDH陽性表達(dá)與組織分化程度、浸潤深度、臨床分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05),CD44V6、VEGF陽性表達(dá)與組織分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(均P<0.05)。隨著臨床病理分期的升高,MTDH陽性檢出率逐漸上升(IV期除外);VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率隨著分化程度降低而升高。MTDH、VEGF、CD44V6在組織分化良好組與分化不良組中的陽性表達(dá)率分別為87.1%、51.6%、51.6%和89.7%、82.1%、89.7%。淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為82.5%、57.5%、60.0%;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為96.7%、83.3%、90.0%。結(jié)論 MTDH、VEGF、CD44V6參與了粘液表皮樣癌的發(fā)生發(fā)展過程,檢測(cè)其表達(dá)水平有助于判斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

        異粘蛋白;血管內(nèi)皮生長因子;CD44V6;粘液表皮樣癌;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

        腫瘤的轉(zhuǎn)移及局部廣泛浸潤是一個(gè)涉及多基因、多信號(hào)通路、多種調(diào)節(jié)機(jī)制的復(fù)雜過程,是細(xì)胞中基因改變不斷累積的結(jié)果[1]。涎腺粘液表皮樣癌為涎腺最常見的惡性腫瘤[2],是由柱狀、透明和嗜酸性粒細(xì)胞樣特點(diǎn)的粘液細(xì)胞、中間細(xì)胞、表皮樣細(xì)胞構(gòu)成的上皮惡性腫瘤[3]。筆者選擇與腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的異粘蛋白(MTDH)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、CD44V6進(jìn)行研究,探討其在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為臨床判斷預(yù)后及早期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        研究組為天水市第四人民醫(yī)院腫瘤外科及口腔科2009年1月至2014年1月住院病人的手術(shù)標(biāo)本(70例),術(shù)前均未做化療、放療,男性48例,女性22例,年齡38~74歲,平均53.4歲。其中,原發(fā)腮腺粘液表皮樣癌25例,頜下腺粘液表皮樣癌30例,腭腺粘液表皮樣癌9例,小涎腺粘液表皮樣癌6例,30例區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,所有病例均經(jīng)病理檢查明確診斷。對(duì)照組為粘液表皮樣癌病人的正常涎腺組織(26例)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        研究中使用的鼠抗人MTDH多克隆抗體及SP試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)有限公司。鼠抗人CD44V6多克隆抗體、鼠抗人VEGF多克隆抗體及SABC試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本制成4 um厚的切片兩張,貼于經(jīng)多聚賴氨酸處理過的玻片上,58℃烘烤24 h,一張行HE染色復(fù)查診斷,另一張行免疫組織化學(xué)法處理。染色方法嚴(yán)格按照SABC試劑盒說明書步驟進(jìn)行DAB顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封固,以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,用已知陽性切片作為陽性對(duì)照。

        1.3 結(jié)果判斷

        MTDH著色部位為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì),以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色染色為陽性;在高倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野,每個(gè)視野下計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞,陽性細(xì)胞數(shù)占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)的75%以上為表達(dá)強(qiáng)陽性(+++),51%~74%為表達(dá)陽性(++),25%~50%為表達(dá)弱陽性(+),<25%為表達(dá)陰性(-),見圖1。CD44V6陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜,呈棕黃色顆粒(見圖2)。以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為VEGF陽性表達(dá),隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野計(jì)算陽性細(xì)胞的百分比,無陽性細(xì)胞計(jì)0分,≤25%計(jì)1分,26%~50% 計(jì)2分,51%~75%計(jì)3分,>75%計(jì)4分;著色強(qiáng)度依多數(shù)陽性細(xì)胞染色情況判斷,無著色計(jì)0分,淡黃色計(jì)1分,棕黃色計(jì)2分,棕褐色計(jì)3分。將陽性細(xì)胞百分比計(jì)分與著色強(qiáng)度計(jì)分相加,0~2分為陰性(-),≥3分為陽性(+),見圖3。采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05差異有顯著性。

        圖1 MTDH在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

        圖2 CD44V6在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

        2 結(jié)果

        2.1 MTDH、VEGF、CD44V6在研究組與對(duì)照組中的表達(dá)

        研究組MTDH、VEGF、CD44V6陽性表達(dá)率分別為88.6%、68.6%、72.9%,對(duì)照組為15.4%、7.7%、19.2%,兩者比較有顯著性差異(P<0.01),見表1。

        表1 兩組MTDH、VEGF、CD44V6表達(dá)情況比較[n(%)]

        2.2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

        MTDH表達(dá)與組織分化程度、癌浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05),CD44V6、VEGF陽性表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05或P<0.01)。隨著臨床分期的增高,癌組織中MTDH陽性檢出率有逐漸增高趨勢(shì)(IV期除外);隨著組織分化程度降低,CD44V6、VEGF陽性表達(dá)率升高,且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組(見表2)。

        表2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮樣癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

        3 討論

        異粘蛋白(Metadherin,MTDH)又名星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1(astocyted eievated gene 1,AEG-1),有文獻(xiàn)報(bào)道MTDH既是一種致癌基因,又是血管形成的誘導(dǎo)因子[4]。國內(nèi)外有關(guān)研究表明,MTDH與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究提示,粘液表皮樣癌組織中MTDH陽性表達(dá)率為88.6%(62/70),對(duì)照組為15.4%(4/26),兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。說明MTDH對(duì)粘液表皮樣癌有高度特異性,可能成為較好的粘液表皮樣癌早期診斷的分子生物學(xué)標(biāo)志物。本研究提示,MTDH在組織分化良好組與分化不良組的陽性表達(dá)率分別為87.1%(27/31)、89.7%(35/39),在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為82.5% (33/40),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為96.7%(29/30)。說明MTDH活性表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)、浸潤深度、臨床分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性。因此,用MTDH活性水平衡量腫瘤惡性程度并由此判斷預(yù)后還需進(jìn)一步研究。

        圖3 VEGF在粘液表皮樣癌中的表達(dá)

        血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種分子量為34 kD~45 kD的高度糖基化堿性蛋白,由分子量為17 kD~22 kD的同源雙聚體構(gòu)成。腫瘤血管生成過程受多種血管生成因子調(diào)控,已知有數(shù)十種,包括成纖維細(xì)胞生長因子家族、血管內(nèi)皮生長因子家族及其受體[5]。VEGF過度表達(dá)與腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。VEGF同時(shí)又是腫瘤血管生成最重要的調(diào)節(jié)因子[6],國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),在許多惡性腫瘤中都有VEGF過度表達(dá)。研究組VEGF陽性表達(dá)率為68.6%(48/70),對(duì)照組為7.7%(2/26),兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。VEGF在組織分化良好組與分化不良組的陽性表達(dá)率分別為51.6%(16/31)、82.1%(32/39),在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為57.5%(23/40),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為83.3%(25/30),差異均有顯著性。提示隨著臨床分期的進(jìn)展,VEGF的陽性表達(dá)率不斷上升,且與組織分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),表明VEGF具有促進(jìn)粘液表皮樣癌轉(zhuǎn)移及浸潤性生長的作用,對(duì)判斷腫瘤良惡性與預(yù)后有幫助。

        CD44指白細(xì)胞分化抗原分化簇第44號(hào),是一個(gè)典型的單拷貝基因多種表型的細(xì)胞表面跨膜蛋白多糖分子,位于人類CD44基因的11號(hào)染色體短臂上(11p13)。CD44V6是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的CD44黏附分子,在多種腫瘤中表達(dá),能顯著增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力[7]。研究組中CD44V6的陽性表達(dá)率為72.9%(51/70),對(duì)照組為19.2%(5/26),二者比較有顯著性差異(P<0.01)。CD44V6在分化良好組與分化不良組中的陽性表達(dá)率分別為51.6%(16/31)和89.7%(35/39),在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為60.0%(24/40),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率為90.0%(27/30)。CD44V6陽性表達(dá)率分化不良組明顯高于分化良好組,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,且有顯著性差異,表明CD44V6與粘液表皮樣癌的分化程度及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系,今后有可能把它作為判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。

        綜上所述,MTDH、VEGF、CD44V6可能成為粘液表皮樣癌臨床診斷、判斷預(yù)后及療效的敏感指標(biāo),聯(lián)合檢測(cè)對(duì)判斷療效有重要意義,但還需要進(jìn)一步大量病例分析證實(shí)。

        [1]胡福軍,凌志強(qiáng),方銑化,等.食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因篩選研究[J].中華腫瘤防治雜志,2008,15(4):273-274.

        [2]李樹玲.頭頸腫瘤學(xué)[M].天津:天津科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,1993.

        [3]劉紅剛.頭頸部腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006.

        [4]張艷艷,李紅雨.MTDH和VEGF在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2014,19(1):18-21.

        [5]耿海云,陳映霞.VEGF VEGFR信號(hào)通路抑制劑療效預(yù)測(cè)的研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2013,18(9):842-843.

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        [7]周榮平.黏附分子CD44的表達(dá)與大腸癌生物學(xué)特性間的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)雜志,2011,19(3):492-493.

        R730.261

        A

        1671-1246(2015)11-0154-03

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