鄭立娜 金明珠

[摘要] 目的 研究HIV、HBV共感染患者病毒載量與外周T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。 方法 選取2011年1月～2014年1月就診于樂清市血站門診和住院部未經(jīng)高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的HIV感染患者1230例為單純感染組和HIV、HBV共感染患者148例為共感染組。采用RT-PCR、熒光定量PCR和流式細(xì)胞儀進(jìn)行HIV、HBV病毒載量和T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)檢測(cè)，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定患者相關(guān)生化指標(biāo)，比較兩組的檢測(cè)結(jié)果。分析HIV、HBV共感染患者病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。 結(jié)果 兩組患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、總膽紅素水平和HIV RNA載量比較，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。兩組患者CD4+、CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。HIV RNA載量與HBV DNA載量呈正相關(guān)（r = 0.471）；CD4+/CD8+與HBV DNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.841、-0.583）。 結(jié)論 HBV可能存在促進(jìn)HIV復(fù)制的功能，患者的肝損傷和免疫損傷較單純HIV感染更為嚴(yán)重，在臨床上應(yīng)引起重視。

[關(guān)鍵詞] HIV、HBV共感染；病毒載量；外周T淋巴細(xì)胞亞群

[中圖分類號(hào)] R511 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）09（b）-0103-04

流行病學(xué)調(diào)查顯示，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染引起的肝炎是肝硬化和原發(fā)性肝癌發(fā)生的主要原因之一[1-2]。HBV和人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）存在相同的感染途徑，如毒品途徑傳播、性途徑傳播和母嬰途徑傳播等，且HIV感染患者的免疫能力較健康人群更為低下，因此在HIV感染者中HBV感染率也居高不下[3]。有研究報(bào)道，約50%的HIV感染者血清中存在HBV的病毒標(biāo)志物[4]。在HIV感染患者中，乙型肝炎的感染率高達(dá)4%～10%[4-5]。機(jī)體對(duì)HBV的清除需要通過特異性CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫途徑進(jìn)行，然而在HIV和HBV共感染的患者中，HIV破壞了患者體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞的正常生理功能，導(dǎo)致HIV患者對(duì)HBV的清除能力降低，臨床癥狀也更為嚴(yán)重[6]。隨著雞尾酒療法的普及，HIV感染患者的生活質(zhì)量和生存期已顯著升高[7]。有關(guān)HIV、HBV共感染患者的治療情況，尤其是感染發(fā)生后病毒載量和免疫學(xué)關(guān)系的研究較為少見，因此對(duì)其展開研究具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2014年1月就診于樂清市血站門診和住院部未經(jīng)高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的HIV感染患者（單純感染組，1230例）和HIV、HBV共感染患者（共感染組，148例）作為研究對(duì)象，共計(jì)1378例，其中男1031例，女347例，年齡16～72歲，平均（54.3±12.6）歲。單純感染組中男932例，女298例，平均年齡為（54.4±11.8）歲；共感染組中男99例，女49例，平均年齡為（54.3±13.1）歲。HIV感染依據(jù)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年版）》確診，首先對(duì)患者血液進(jìn)行HIV抗體初查確認(rèn)，對(duì)陽性患者抽取血樣后送往樂清市CDC經(jīng)蛋白印跡法確診；HBV感染依據(jù)《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》確診，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者血清中的HBsAg，兩次重復(fù)陽性結(jié)果判為HBV感染陽性。本研究經(jīng)樂清市血站倫理學(xué)會(huì)批準(zhǔn)，所有患者或其家屬均被告知且簽署了知情同意書。兩組患者性別、年齡等比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)內(nèi)容

1.2.1 HIV-1抗體檢測(cè) 采用上海生工生物公司提供的酶聯(lián)免疫試劑盒對(duì)HIV-1抗體進(jìn)行檢測(cè)，陽性者抽取血樣后送往樂清市CDC經(jīng)蛋白印跡法確診，檢驗(yàn)步驟嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 HBsAg檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測(cè)血清中的HBsAg，兩次重復(fù)陽性結(jié)果判為HBV感染陽性，操作過程依據(jù)說明書進(jìn)行。

1.2.3 T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù) 使用FACS Calibur流式細(xì)胞儀對(duì)研究對(duì)象外周靜脈血中的T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量和CD4+/CD8+的比值。使用試劑和流程均依照FACS Calibur流式細(xì)胞儀使用說明書進(jìn)行。

1.2.4 病毒載量測(cè)定 血清HIV RNA病毒載量采用RT-PCR方法測(cè)定，使用羅氏公司的全自動(dòng)核酸分離純化系統(tǒng)及核酸提取試劑盒進(jìn)行，提取病毒總RNA并測(cè)定病毒載量，操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。血清HBV DNA病毒載量采用熒光定量PCR監(jiān)測(cè)系統(tǒng)（FQD-33B型）進(jìn)行，操作嚴(yán)格依據(jù)說明書進(jìn)行。

1.2.5 生化指標(biāo)檢測(cè) 采用全自動(dòng)生化分析儀分析患者的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總蛋白（TP）、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后符合正態(tài)分布，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者生化指標(biāo)和病毒學(xué)指標(biāo)比較

兩組患者ALT、AST、TP、ALB、TBIL水平和HIV RNA載量比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見表1。

2.2 兩組患者外周T淋巴細(xì)胞亞群比較

兩組患者CD4+、CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見表2。

2.3 HIV、HBV病毒載量與外周T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

HIV RNA載量與HBV DNA載量呈正相關(guān)（r = 0.471）；CD4+/CD8+與HBV DNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.841、-0.583）。見表3。

3 討論

HIV和HBV具有相似的傳播途徑（主要是性傳播、靜脈吸毒傳播）和易感人群，因此HIV和HBV共感染現(xiàn)象在我國(guó)和全世界范圍內(nèi)都十分普遍，雖然HBV屬于DNA病毒而HIV屬于RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒，但HBV與HIV在復(fù)制能力和基因結(jié)構(gòu)上均有相似之處，且HBV同樣具有感染T淋巴細(xì)胞的能力[8]。目前，我國(guó)缺乏有關(guān)HIV、HBV共感染的大規(guī)模調(diào)查，衛(wèi)大英等[9]調(diào)查顯示，HIV、HBV共感染的主要原因是靜脈注射毒品，約93.6%的靜脈吸毒HIV患者共感染HBV。有報(bào)道指出，HIV、HBV共感染加速了艾滋病的病情發(fā)展，增加了治療的肝毒性，并降低了患者生存率[10-11]，因此，艾滋病和HIV感染患者中，共感染其他病毒尤其是HBV感染情況的調(diào)查對(duì)于提高艾滋病和HIV感染的治療效果具有重要意義。HIV的病毒載量對(duì)HIV感染患者的生存率具有顯著影響，然而對(duì)HIV、HBV共感染患者中病毒載量和外周T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性研究較少。在HIV、HBV共感染患者體內(nèi)，HIV與HBV的存在是呈競(jìng)爭(zhēng)性相互抑制關(guān)系，還是存在一定程度的促進(jìn)作用仍未有統(tǒng)一定論，且共感染患者中病毒載量與患者病情尤其是對(duì)肝臟和免疫系統(tǒng)的影響是否與單純HIV感染患者的情況相同尚需要大量的研究進(jìn)行證實(shí)。王海斌[12]調(diào)查了HIV、HBV、丙型肝炎病毒三重病毒共感染患者中病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，HBV和丙型肝炎病毒的病毒載量與HIV病毒載量具有相關(guān)性，且HBV的病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群呈負(fù)相關(guān)，但HIV和丙型肝炎病毒的病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群無相關(guān)性，提示三重感染患者對(duì)免疫系統(tǒng)的破壞以HBV對(duì)患者的影響為主，而與HIV的關(guān)系較小，提示HBV雖然促進(jìn)HIV的復(fù)制，但是會(huì)抑制其對(duì)機(jī)體免疫功能的破壞。黃海軍等[13]研究肝炎患者（B型和C型）病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者基因型與病毒載量和集體細(xì)胞免疫存在一定相關(guān)性，提示HBV對(duì)于患者的免疫系統(tǒng)具有一定的破壞作用[14-15]。

本研究結(jié)果顯示，1378例HIV患者中，HIV、HBV共感染患者148例，感染率超過10%，單純HIV感染和共感染患者的年齡和性別分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HBV、HIV共感染患者的肝損傷程度顯著高于單純HIV感染患者，提示不同年齡和性別的患者共同感染HIV和HBV的概率相近，但HBV、HIV共感染患者的肝損傷程度相較于單純HIV感染患者更為嚴(yán)重。其原因一方面是由于HBV對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生了直接的破壞作用，另一方面是HBV導(dǎo)致抗病毒治療對(duì)肝細(xì)胞的損傷增加，因此在HIV感染患者中應(yīng)進(jìn)行HBV感染的篩查以確認(rèn)患者是否共感染HBV，對(duì)共感染HBV的患者應(yīng)及時(shí)進(jìn)行保肝治療，降低病毒對(duì)肝臟的損傷。本研究還顯示，HBV、HIV共感染患者的HIV病毒載量顯著高于單純HIV病毒感染患者，且HIV RNA載量與HBV DNA載量呈正相關(guān)（r = 0.471），與王海斌[12]的研究結(jié)果相近，提示HBV共感染會(huì)促進(jìn)HIV感染的病程，原因可能是HBV感染對(duì)患者的免疫功能造成較大的影響，降低了患者免疫系統(tǒng)對(duì)HIV病毒的抑制作用，且HBx蛋白的發(fā)現(xiàn)也支持了這一結(jié)論[16]。進(jìn)一步分析共感染患者中HIV、HBV病毒載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，在共感染患者中單純感染組與共感染組的HIV RNA載量和外周T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；CD4+/CD8+與HBV DNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA載量呈負(fù)相關(guān)（r = -0.841、-0.583）。本研究結(jié)果提示HIV、HBV共感染會(huì)增加HIV感染患者的免疫損傷，且免疫損傷程度不僅與HBV的感染程度（即病毒載量）相關(guān)，而且與HIV的感染程度也有一定的相關(guān)性。HIV病毒載量與CD4+、CD4+/CD8+的相關(guān)性較HBV更為密切，因此筆者推測(cè)共感染患者中免疫損傷主要由HIV引起；HBV會(huì)增加HIV的病毒載量，因此其與患者的免疫損傷指標(biāo)有一定的相關(guān)性

綜上所述，HBV可能存在促進(jìn)HIV復(fù)制的功能，因此患者的肝損傷和免疫損傷較單純HIV感染更為嚴(yán)重，在臨床上應(yīng)引起重視。

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（收稿日期：2015-03-19 本文編輯：李亞聰）