尚艷雙，劉亞敏，劉玉民，李　力

（西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，三峽庫(kù)區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715）

楓香葉正丁醇提取物抗氧化活性及其對(duì)金橘的保鮮效果

尚艷雙，劉亞敏，劉玉民*，李力

（西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，三峽庫(kù)區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715）

為追蹤楓香葉正丁醇提取物的體外抗氧化活性及其對(duì)果品的采后貯藏保鮮效果，以楓香葉正丁醇提取物（楓香葉依次經(jīng)醇提、正丁醇萃取、大孔樹(shù)脂層析、50%乙醇溶液洗脫后所得產(chǎn)物）為材料，分別研究 其對(duì)1，1-二苯基-2-苦基肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、羥自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（O2－·）的體外清除能力和還原力；并用不同質(zhì)量濃度（10、30、50 mg/100 mL）的楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘果實(shí)進(jìn)行浸泡處理，室溫（14～16 ℃）貯藏，每3 d測(cè)定金橘果實(shí)的質(zhì)量損失率、腐爛率、硬度、可溶性固形物（total soluble solids，TSS）含量、可滴定酸（titratable acid，TA）含量、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、VC含量等果實(shí)的品質(zhì)和生理指標(biāo)。結(jié)果表明，楓香葉正丁醇提取物的體外清除DPPH自由基、·OH、O2－·能力和還原力較強(qiáng)；可以減少金橘果實(shí)腐爛、質(zhì)量損失和MDA含量，減緩果實(shí)硬度下降和TSS、TA、VC含量的降低，增強(qiáng)SOD的活性，在金橘果實(shí)的貯藏應(yīng)用上有較好的前景。

楓香葉；正丁醇提取物；體外抗氧化；金橘；貯藏保鮮；生理特性

楓香（Liquidambar formosana Hance）屬金縷梅科楓香屬植物，全株均可入藥，具有通經(jīng)活絡(luò)、祛風(fēng)濕、止血生肌的功效。其葉片中含有逆沒(méi)食子酸、α-莽草酸、蘆丁、驅(qū)蛔腦、異槲皮苷、黃芪苷、金絲桃苷、三葉豆苷、水晶蘭苷、紫云英苷、β-谷甾醇、木麻黃鞣寧等［1-2］物質(zhì)。研究［3-5］發(fā)現(xiàn)楓香葉醇提物和揮發(fā)油具有抗氧化作用，清除1，1-二苯基-2-苦基肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基活性較強(qiáng)［6］；且對(duì)辣椒黑斑病病原菌［7-8］、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、傷寒沙門氏 菌、銅綠假單胞菌皆有較好的抑制作用［9-10］。

眾所周知，果蔬的貯藏品質(zhì)與其抗氧化能力及抑菌活性關(guān)系密切，多數(shù)植物的提取物中含具有抑菌、抗氧化作用的多糖類、苷類、黃酮類、多酚類、萜類等，通過(guò)抑制或殺死致腐真菌保持果實(shí)鮮度；清除活性氧防止細(xì)胞膜質(zhì)過(guò)氧化；誘導(dǎo)果蔬抗氧化酶系統(tǒng)中與活性氧清除相關(guān)酶活性的上升，從而延長(zhǎng)果蔬貯藏期［11-12］。金橘（Fortunella margarita （Lour.） Swingle）屬蕓香科金柑屬，果實(shí)富含維生素、胡蘿卜素、果膠以及鈣、磷、鐵等成分［13］，具有理氣、解郁、化痰、醒酒的功效。金橘果皮肉質(zhì)化，不耐貯藏，采后由于組織生理失調(diào)和衰老、病原微生物侵染、機(jī)械損傷，傷口易受青霉病和綠霉病的侵染，室溫條件下貨架期短［14］。但由于金橘果實(shí)連皮食用，不宜使用2，4-二氯苯氧乙酸、施?？说雀涕俪Ｓ帽ｕr劑，因此尋找具有抗氧化物質(zhì)的植物源保鮮劑用于金橘貯藏尤其重要［15-16］。

本課題組前期研究表明楓香葉乙醇提取物和正丁醇萃取物均具有較強(qiáng)的抗氧化能力，楓香葉乙酸乙酯的大孔樹(shù)脂層析物對(duì)枇杷果實(shí)具有較好的保鮮功效，為進(jìn)一步追蹤楓香葉正丁醇提取物中具果品保鮮作用的活性物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)選擇楓香葉依次通過(guò)醇提、正丁醇萃取、大孔樹(shù)脂層析所得楓香葉正丁醇提取物為研究材料，通過(guò)測(cè)定楓香葉正丁醇提取物的體外抗氧化能力和貯藏期間金橘果實(shí)各品質(zhì)和生理指標(biāo)的變化，研究其抗氧化活性和對(duì)金橘果實(shí)的防腐保鮮作用及機(jī)理，為楓香資源的深層次綜合開(kāi)發(fā)利用探索新的途徑，為尋找金橘的天然植物源保鮮劑提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

DPPH、三氯乙酸、硫代巴比妥酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鉬酸銨 金堆城鉬業(yè)股份有限公司；偏磷酸 天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；硫酸亞鐵、水楊酸、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷、三氯化鐵、鐵氰化鉀、酚酞指示劑、乙二胺四乙酸二鈉、氮藍(lán)四唑、核黃素、L-蛋氨酸、草酸、乙二胺四乙酸、抗壞血酸、D-101大孔樹(shù)脂 成都科龍化工試劑廠。所有試劑均為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

GY-2果實(shí)硬度計(jì) 樂(lè)清市寶特思儀器有限公司；VBR90A手持折光儀 杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司；T6新世紀(jì)紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；TGL-16G恰菲爾高速離心機(jī) 上海恰菲爾分析儀器有限公司；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；JYSD-100-11粉碎機(jī) 上海嘉定糧油儀器有限公司；SCQ-7201B數(shù)控超聲提取儀 上海聲彥超聲波儀器有限公司；玻璃層析柱（50 mm×600 mm） 南寧市精密儀器儀表有限公司。

1.3方法

1.3.1楓香葉正丁醇提取物的制備

2011年9月在北碚茅庵林場(chǎng)采集3～4 a生幼樹(shù)的成熟楓香葉，經(jīng)西南大學(xué)林學(xué)教研室鑒定為金縷梅科楓香樹(shù)屬的楓香葉。采后將新鮮葉子烘干粉碎，以體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液超聲波提取50 min，提取3 次合并濾液，提取液采用正丁醇萃取，減壓濃縮蒸干溶劑制備正丁醇相浸膏，浸膏采用大孔吸附樹(shù)脂層析法進(jìn)行分離，依次用水、10%、30%、50%乙醇溶液洗脫［17］，取50%乙醇溶液洗脫液，減壓濃縮蒸干溶劑得到提取物，用蒸餾水分別配制質(zhì)量濃度為10、30 mg/100 mL和50 mg/100 mL的楓香葉正丁醇提取物各1.5 L備用。

1.3.2材料處理

供試材料為九分熟的金橘果實(shí)，大小均勻，無(wú)病蟲(chóng)害和機(jī)械損傷，用體積分?jǐn)?shù)1%的洗潔劑溶液（食用殺毒型）浸果5～10 min，用清水清洗干凈后，分別浸泡在質(zhì)量濃度為0、10、30、50 mg/100 mL（分別為對(duì)照（CK）、T1、T2、T3）的楓香葉正丁醇提取物中5 min。在室溫條件下吹干，裝入聚乙烯保鮮袋（厚0.06 mm）內(nèi)，每袋15 個(gè)果實(shí)，扎口貯藏。 置于室溫（14～16℃）條件下貯藏，各指標(biāo)每3 d測(cè)一次。

1.3.3楓香葉正丁醇提取物體外抗氧化活性測(cè)定

DPPH自由基清除能力的測(cè)定：參照向進(jìn)樂(lè)等［18］的方法；·OH清除能力的測(cè)定：采用水楊酸法［19］；O2－·清除能力的測(cè)定：采用鄰苯三酚自氧化法［20］；還原能力的測(cè)定：參照向進(jìn)樂(lè)等［18］的方法，以吸光度表示還原力大小。

1.3.4金橘果實(shí)品質(zhì)、生理測(cè)定方法

質(zhì)量損失率測(cè)定采用稱質(zhì)量法，每個(gè)處理取15 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次，計(jì)算公式為：質(zhì)量損失率/%=（貯藏初始的質(zhì)量－測(cè)定時(shí)的質(zhì)量）/貯藏初始的質(zhì)量×100；腐爛率：?jiǎn)喂癄€面積超過(guò)20%均按爛果計(jì)算，每個(gè)處理取15 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次，計(jì)算公式為：腐爛率/%=腐爛果實(shí)數(shù)/總果實(shí)數(shù)×100；金橘果實(shí)硬度測(cè)定：采用硬度計(jì)法，選取金橘中段進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)處理取3 個(gè)果實(shí)，每個(gè)果實(shí)測(cè)定3 個(gè)值，取平均值；可溶性固形物total soluble solid，TSS含量：用手持折光儀測(cè)定，3組重復(fù)3次，取平均值；可滴定酸（titratable acid，TA）含量測(cè)定：采用酸堿中和法［21］，每個(gè)處理取6個(gè)果實(shí)，3次重復(fù)；丙二醛（malonic dialdehyde，MDA）含量的測(cè)定：采用硫代巴比妥酸比色法［22］，根據(jù)材料鮮質(zhì)量計(jì)算MDA含量，單位為μmol/g，每個(gè)處理取5 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性測(cè)定：采用氮藍(lán)四唑（nitroblue tetrazolium，NBT）光化還原法，以抑制NBT光化學(xué)還原50%為一個(gè)酶活力單位，單位為U/g，每個(gè)處理取5 個(gè)果實(shí)，3 次重復(fù)測(cè)定；VC含量測(cè)定：采用鉬藍(lán)比色法［23］，每個(gè)處理取5 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次。

1.4數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，楓香葉正丁醇提取物體外抗氧化作用采用單因素方差分析，楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘果實(shí)貯藏效果采用雙因素方差分析，多重比較采用新復(fù)極差法。

2　結(jié)果與分析

2.1楓香葉正丁醇提取物體外抗氧化作用

表1　楓香葉正丁醇提取物的還原力和清除DPPH自由基、OH、能力Table1　Reducing power and scavenging activities against DPPH，hydroxyl， and superoxide anion free radicals of -butanol extract from L. formosana leaves

楓香葉正丁醇提取物質(zhì)量濃度在0.2～2.0 mg/mL時(shí)，其還原力和對(duì)DPPH自由基、·OH、的清除能力呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系（表1），隨著楓香葉正丁醇提取物質(zhì)量濃度的增加，還原力和各清除率也逐漸升高；當(dāng)楓香葉正丁醇提取物質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL，還原力及DPPH自由基、·OH、清除率分別為3.584、92.76%、59.52%、67.67%。當(dāng)楓香葉正丁醇提取物質(zhì)量濃度大于2.0 mg/mL時(shí)，其中DPPH清除率和還原力在質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL和4.0 mg/mL時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。楓香葉正丁醇提取物對(duì)DPPH自由基、·OH、的IC50值分別為0.99、0.36、0.88 mg/mL，表明楓香葉正丁醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力。

2.2楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘果實(shí)的保鮮作用

2.2.1楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘貯藏期間質(zhì)量損失率、腐爛率的影響

圖1　不同處理對(duì)金橘果實(shí)質(zhì)量損失率（A）和腐爛率（B）的影響Fig.1　Effects of different treatments on weight loss and decay rate of kumquat fruits

楓香葉正丁醇提取物能減少果實(shí)貯藏期間的質(zhì)量損失（圖1A）。經(jīng)不同質(zhì)量濃度楓香葉正丁醇提取物處理的金橘果實(shí)的質(zhì)量損失率均低于未處理的對(duì)照組，果實(shí)貯藏18 d時(shí)，T1、T2、T3處理的金橘果實(shí)質(zhì)量損失率分別比CK組低24.26%、25.66%、28.38%，T1、T2、T3 3 個(gè)處理的質(zhì)量損失率分別為9.78%、9.60%、9.25%。經(jīng)方差分析，在整個(gè)貯藏期間3個(gè)處理組與CK間質(zhì)量損失率差異顯著（P＜0.05），第3、9、12、15、18天時(shí)，3 個(gè)處理組間差異不顯著，T3處理組的質(zhì)量損失率略低于其他各處理組。

金橘果實(shí)貯藏期間，金橘果實(shí)腐爛率均呈上升趨勢(shì)，經(jīng)不同質(zhì)量濃度楓香葉正丁醇提取物處理的金橘果實(shí)，腐爛率低于對(duì)照組（圖1B）。貯藏18 d時(shí)，CK、T1、T2、T3處理的腐爛率分別為10.00%、5.50%、4.00%、3.50%。經(jīng)方差分析，第9、12、15、18天時(shí)，3個(gè)處理組與CK間腐爛率差異顯著（P＜0.05），50 mg/100 mL楓香葉正丁醇提取物處理對(duì)金橘防腐效果相對(duì)較好。說(shuō)明楓香葉正丁醇提取物對(duì)防止金橘果實(shí)腐爛有一定效果；可能與其中具抗氧化作用的物質(zhì)可以抑制或殺死致腐真菌有關(guān)。

2.2.2楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘貯藏期間TSS和TA含量的影響

圖2　不同處理對(duì)金橘果實(shí)TSS含量（A）和TA含量（B）的影響Fig.2　Effects of different treatments on TSS and TA of kumquat fruits

在整個(gè)貯藏過(guò)程中，金橘果實(shí)的TSS含量先升后降（圖2A）。貯藏前6 d，TSS含量有所上升，可能與金橘果實(shí)的后熟有關(guān)；呼吸非躍變型貯藏過(guò)程中，TSS又作為呼吸底物參與呼吸作用被消耗［24-25］。第18天時(shí)，TSS含量分別為7.40%、8.00%、7.90%、8.90%?？赡苁菞飨闳~正丁醇提取物中的抗氧化物質(zhì)，如多酚降低了細(xì)胞膜對(duì)氧氣的通透性，從而減少了果實(shí)的呼吸消耗。經(jīng)方差分析，在整個(gè)貯藏期間3 個(gè)處理組與CK間TSS含量差異顯著（P＜0.05），且第9、12、15、18天時(shí)，T3處理的TSS含量高于其他各處理。

楓香葉正丁醇提取物可以減少金橘果實(shí)貯藏期間TA含量的下降（圖2B）。貯藏初期，金橘的TA含量在1%以上。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，金橘果實(shí)中的酸含量逐漸下降，可能與金橘中的檸檬酸作為呼吸作用底物被消耗有關(guān)［26］。第18天時(shí)，金橘果實(shí)TA含量分別為0.49%、0.54%、0.49%、0.61%。第3、9、12、15天時(shí)，3 個(gè)處理組與CK之間差異顯著（P＜0.05）。經(jīng)楓香葉正丁醇提取物處理過(guò)的金橘果實(shí)TA含量高于未處理的對(duì)照組。

2.2.3楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘貯藏期間VC含量、硬度的影響

圖3　不同處理對(duì)金橘果實(shí)VC含量（A）和硬度（B）的影響Fig.3　Effects of different treatments on vitamin C and hardness of kumquat fruits

VC不但是果蔬營(yíng)養(yǎng)成分之一，同時(shí)也是一種清除果蔬內(nèi)活性氧的抗氧化劑，對(duì)延緩衰老有一定效果［27］，果蔬VC含量會(huì)隨著貯藏期的延長(zhǎng)或組織衰老而降低。整個(gè)貯藏過(guò)程中，金橘果實(shí)VC含量呈下降趨勢(shì)（圖3A）。貯藏初期，金橘果實(shí)VC含量在45 mg/100 g，第9天下降趨于緩慢。到第18天，各處理果實(shí)VC含量分別為15.00、18.19、15.82、21.48 mg/100 g，3個(gè)處理組的VC含量分別比對(duì)照組高21.26%、5.45%、30.16%。經(jīng)方差分析，第3、9、12、15天時(shí)，處理組與CK間差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明楓香葉正丁醇提取物可以抑制金橘果實(shí)VC含量的下降。

果實(shí)貯藏期間硬度總體呈降低的趨勢(shì)（圖3B），貯藏過(guò)程中，3 個(gè)處理的金橘果實(shí)硬度均高于對(duì)照。第6天時(shí)，T2處理的金橘果實(shí)硬度最高；第18天時(shí)，CK和T1、T2、T3 3 個(gè)處理的金橘果實(shí)硬度分別為2.11、2.49、2.31、2.60 kg/cm2。經(jīng)方差分析，貯藏過(guò)程中3 個(gè)處理與CK之間差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘果實(shí)硬度的降低有抑制作用，其中50 mg/100 mL（T3）效果最好。這可能與果實(shí)組織內(nèi)較高的水分可以維持果實(shí)細(xì)胞形態(tài)及膨壓有關(guān)。

2.2.4楓香葉正丁醇提取物對(duì)金橘貯藏期間SOD活性和MDA含量的影響

圖4　不同處理對(duì)金橘果實(shí)SOD活性（A）和MDA含量（B）的影響Fig.4　Effects of different treatments on SOD activity and MDA content of kumquat fruits

正常情況下，SOD可以維持活性氧的產(chǎn)生與清除的平衡。由圖4A可看出，在金橘的貯藏過(guò)程中，SOD活性呈上升的趨勢(shì)，且3 個(gè)處理組的SOD活性高于CK。第18天時(shí)，T3處理比CK、T1、T2的SOD活性分別高8.03%、1.55%、2.27%。第3、6、9、12、18天時(shí)，3 個(gè)處理組與CK之間差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明楓香葉正丁醇提取物可以使貯藏期金橘維持較高的SOD活性，維持活性氧的產(chǎn)生與清除的平衡，減緩果實(shí)衰老，延長(zhǎng)貯藏期。

在金橘貯藏的過(guò)程中MDA含量呈上升趨勢(shì)（圖4B），可能是由于金橘貯藏期間膜質(zhì)過(guò)氧化造成的，第9天后，上升趨勢(shì)變緩。在整個(gè)貯藏的過(guò)程中對(duì)照組金橘中MDA含量始終高于3 個(gè)處理組，說(shuō)明用楓香葉正丁醇提取物處理可以減少M(fèi)DA的積累，通過(guò)抑制細(xì)胞膜質(zhì)過(guò)氧化的程度從而延緩了金橘果實(shí)的衰老。貯藏第18天時(shí)，各處理金橘果實(shí)中MDA含量分別為25.34、22.69、24.49、21.72 μmol/g。經(jīng)方差分析，第3、9、12、15天時(shí)，3 個(gè)處理組與CK之間差異顯著（P＜0.05）；3 個(gè)處理組金橘M(fèi)DA含量低于對(duì)照，且前12 d，T3處理的MDA含量低于其他處理。

3　討論與結(jié)論

自由基衰老學(xué)說(shuō)認(rèn)為，生物體的衰老與自由基代謝平衡密切相關(guān)［28-29］，衰老期間，活性氧大量生成。其中O2

－·是需氧細(xì)胞線粒體內(nèi)電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的一種自由基，由氧分子接收一個(gè)電子形成，在生物體內(nèi)可長(zhǎng)時(shí)間攻擊靶向目標(biāo)，對(duì)細(xì)胞有較強(qiáng)的氧化毒性［30］?！H是生物細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)活性最強(qiáng)的氧族自由基，可由超氧陰離子和過(guò)氧化氫在金屬離子的作用下產(chǎn)生，能與生物體內(nèi)脂類、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等所有的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，對(duì)生物大分子有很強(qiáng)的氧化破壞效應(yīng)，引起細(xì)胞與組織的氧化損傷，導(dǎo)致器官的病變與機(jī)體的衰老［31-32］。本實(shí)驗(yàn)中，楓香葉正丁醇提取物能清除自由基，具有很好的抗氧化能力，可能與其含有的黃酮類、萜類、多糖類、苷類等物質(zhì)有關(guān)［17］。而類黃酮類和不溶性多酚類物質(zhì)主要在細(xì)胞壁上并與蛋白質(zhì)、多糖以氫鍵、疏水鍵相結(jié)合；可溶性酚類物質(zhì)主要在液泡中分布，水及低體積分?jǐn)?shù)乙醇、甲醇可以自由進(jìn)出細(xì)胞，高體積分?jǐn)?shù)乙醇、甲醇可能會(huì)引起植物組織中蛋白質(zhì)變性，從而影響提取率，鑒于甲醇的毒性，因此，本研究選取50%乙醇溶液提取。

果實(shí)貯藏期間，其品質(zhì)和生理特性均產(chǎn)生了較大的變化。由于自身的呼吸作用和蒸騰代謝，果蔬組織中水分和水溶性營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)隨著貯藏期的延長(zhǎng)而流失加劇，用適宜的外源保鮮材料處理，可顯著提高果蔬的耐貯性［33］。鄧麗莉等［34］研究認(rèn)為，用殼聚糖處理可明顯延緩柑橘營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失，降低腐爛率及改善果蔬風(fēng)味方面效果明顯，同時(shí)果實(shí)組織中相對(duì)較高的水分也有利于維持果實(shí)細(xì)胞膨壓和硬度。本實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照相比，由于楓香葉提取物中具有抑菌、抗氧化作用的多糖類、苷類、黃酮類、多酚類、萜類等，這些物質(zhì)可以通過(guò)抑制或殺死致腐真菌保持果實(shí)鮮度；減少呼吸作用消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；清除活性氧防止細(xì)胞膜質(zhì)過(guò)氧化；誘導(dǎo)果蔬抗氧化酶系統(tǒng)中與活性氧清除相關(guān)酶活性的上升，楓香葉正丁醇提取物有效地減少了金橘果實(shí)的質(zhì)量損失和腐爛，抑制了果實(shí)硬度、TSS和TA含量的下降，從而較好地保持了金橘果實(shí)風(fēng)味。

果實(shí)貯藏期間生理特性均產(chǎn)生了較大的變化，果實(shí)貯藏過(guò)程也是其逐漸衰老的過(guò)程。果實(shí)的成熟和衰老往往伴隨著活性氧（O2－·、H2O2、·OH等）的大量積累。如果這些活性氧沒(méi)有及時(shí)清除，就會(huì)導(dǎo)致植物器官和組織處于氧化脅迫中，誘發(fā)膜不飽和脂肪酸的過(guò)氧化，致使新陳代謝紊亂、細(xì)胞膜松弛［35］。本實(shí)驗(yàn)也證明，金橘果實(shí)貯藏過(guò)程中，膜脂過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量不斷增高，MDA含量的增加 是膜脂過(guò)氧化加劇、膜受傷而加劇衰老的表現(xiàn)，其含量的高低可以反應(yīng)細(xì)胞膜脂氧化的程度［36］。同時(shí)作為保護(hù)酶系統(tǒng)的SOD等可有效地清除活性氧自由基，保持體內(nèi)活性氧平衡，其活性的高低可以作為判斷果實(shí)耐貯性指標(biāo)和衰老的標(biāo)志［37-38］。SOD是主要的活性氧清除酶，主要催化O2－的歧化反應(yīng)，使其轉(zhuǎn)變成為無(wú)毒的O2和毒性較低的H2O2。本實(shí)驗(yàn)中，金橘果實(shí)貯藏期間SOD活性呈緩慢上升趨勢(shì)，且經(jīng)楓香葉正丁醇提取物處理的果實(shí)SOD活性均高于對(duì)照，說(shuō)明楓香葉正丁醇提取物處理能有效的提高金橘果實(shí)SOD等抗氧化酶的活性，有利于O2－·等超氧自由基的清除；抗氧化實(shí)驗(yàn)也證明，楓香葉正丁醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力。它不僅能清除自由基，還可以通過(guò)提高內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的水平起到抗氧化的效果［39-40］。因此，楓香葉正丁醇提取物處理可提高金橘果實(shí)內(nèi)活性氧清除酶的含量，從而有效地抑制活性氧和MDA的積累，延緩果實(shí)衰老。

本實(shí) 驗(yàn)中，楓香葉正丁醇提取物具有較強(qiáng)的還原力和清除DPPH自由基、·OH、O2－·能力，可以減少果實(shí)腐爛、質(zhì)量損失和MDA含量，減緩果實(shí)硬度下降和TSS、TA、VC含量的降低，增強(qiáng)SOD的活性。在金橘果實(shí)的貯藏應(yīng)用上有較好的前景。

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Antioxidant Activities of n-Butanol Extract from Liquidambar formosana Leaves in vitro and Their Effects on the Quality of Kumquats （Fortunella margarita） during Storage

SHANG Yanshuang， LIU Yamin， LIU Yumin*， LI Li
（Key Laboratory of the Three Gorges Reservoir Region's Eco-environments， Ministry of Education，College of Resources and Environment， Southwest University， Chongqing 400715， China）

The antioxidant activities in vitro of n-butanol extract from Liquidambar formosana leaves prepared by sequential extraction with ethanol and n-butanol， and macroporous resin chromatography as the 50% ethanol eluate were examined by 1，1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl （DPPH）， hydroxyl （·OH）， superoxide anion （O-2·） and reducing power assays. The effects of different concentrations of the extract（0， 10， 30， and 50 mg/100 mL）on storage characteristics of post-harvest kumquats were investigated. After pre-impregnation with the extra ct at 10， 30， or 50 mg/100 mL， kum quats were stored at room temperature （14-16 ℃）. During storage， mass loss rate， decay rate， hardness， total soluble solids （TSS）， titratable acid （TA），malondialdehyde （MDA）， superoxide dismutase （SOD）， and vitamin C （VC） were measured at 3-day intervals. The results showed that the extract from L. formosana leaves possessed strong reducing power and scavenging activ ities against DPPH，hydroxyl， and superoxide anion free radicals， and could reduce decay rate， mass loss and MDA content， retard the decrease in hardness and TSS， TA， VC content and enhance the activity of SOD. These results indicated that the n-butanol extract from L. formosana leaves has promising applications in postharvest preservation of kumquat fruits.

Liquidam bar formosana leaves； n-butanol extract； antioxidant activity； Fortunella margarita； storage；physiological properties

TS201.1；R284.2

A

1002-6630（2015）14-0212-06

10.7506/spkx1002-6630-201514041

2014-11-12

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31170546）

尚艷雙（1988—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)榱之a(chǎn)資源開(kāi)發(fā)利用。E-mail：shangyanshuang08@163.com

劉玉民（1974—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)榱之a(chǎn)資源開(kāi)發(fā)利用。E-mail：yuminliu@163.com