殷正輝，王世勝，陸華強

（1.新縣畜牧局，河南 新縣　465500；2.鄭州福源動物藥業(yè)有限公司；3.鶴壁市畜牧局）

一例豬傳染性胸膜肺炎的診斷與防治

殷正輝1，王世勝2，陸華強3

（1.新縣畜牧局，河南 新縣465500；2.鄭州福源動物藥業(yè)有限公司；3.鶴壁市畜牧局）

豬傳染性胸膜肺炎是由巴氏桿菌科放線桿菌屬胸膜肺炎放線桿菌（ActinobacillusPleuropneumonia）引起的一種高度接觸性呼吸道傳染病，以急性出血性纖維素性肺炎和慢性局灶性纖維素性壞死性胸膜肺炎為主要特征。該病于1957年由英國的Pattison首次報道，目前該病在世界范圍內(nèi)廣泛存在，中國于1987年首次發(fā)現(xiàn)該病，并且發(fā)生和流行也日趨嚴重。豬場一旦發(fā)生則很難根除，并且易與其他疾病混合發(fā)生，給規(guī)?；i場造成巨大的經(jīng)濟損失，該病在國際上也被公認為是危害現(xiàn)代化養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一。2014年3月中旬，河南省某養(yǎng)豬場育肥豬發(fā)生呼吸道疾病，死亡豬只口鼻流出白色或者血色泡沫，發(fā)病率60%，死亡率15%，造成巨大經(jīng)濟損失。2014年3月17日，畜場主帶一頭30～35kg育肥豬來河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病檢測中心求助，檢測中心經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查、病理剖檢、實驗室檢測等確診為豬傳染性胸膜肺炎，并進行了藥敏試驗，給出了科學(xué)的治療方案，使豬場疾病得到有效控制?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1試驗地點、時間

試驗地點：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病檢測中心；時間：2014年2-5月。

1.2實驗動物

6只健康小白鼠，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病檢測中心提供。

1.3主要器材

電熱恒溫培養(yǎng)箱；手提式電熱壓力蒸汽消毒器；SW—CJ—2G型雙人單面凈化工作臺；OLYMPUS光學(xué)顯微鏡；常用的試管、平皿、載玻片。

1.4主要試劑與藥品

1.4.1主要試劑葡萄糖、硝酸鉀、蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫代硫酸鈉、醋酸鉛、氯化鈉等，均為分析純，為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)傳染病實驗室提供。

1.4.2主要培養(yǎng)基巧克力瓊脂培養(yǎng)基、綿羊血瓊脂培養(yǎng)基；營養(yǎng)肉湯；生化試管等。

1.4.3主要藥敏紙片標準藥敏紙片均在有效期內(nèi)，均為北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。抗生素藥物種類14種：阿米卡星、林可霉素、頭孢哌酮、頭孢唑啉、大觀霉素、氨芐西林、卡那霉素、多西環(huán)素、阿奇霉素、頭孢曲松、阿莫西林、氧氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星，保存條件-20℃。

1.5操作過程和方法

1.5.1觀察方法按常規(guī)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化等進行綜合判斷。

1.5.2實驗室診斷

鏡檢：無菌采取病死豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等病料直接觸片，革蘭氏染色鏡檢。

細菌分離與純化：無菌采取病死豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等組織接種于巧克力瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。觀察菌落形態(tài)，挑選單個疑似菌落涂片，革蘭氏染色，鏡檢。確定為待檢目的菌后，接種于肉湯中培養(yǎng)，置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后，檢測無雜菌生長者，置4℃冰箱備用。

細菌培養(yǎng)特性觀察：將上述菌接種于巧克力瓊脂培養(yǎng)基、綿羊血瓊脂培養(yǎng)基等，37℃培養(yǎng)24～48h，觀察其生長情況，革蘭氏染色，鏡檢。

細菌的生化特性鑒定：取經(jīng)24h肉湯培養(yǎng)的分離菌株，分別接種于葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、木糖、半乳糖、乳糖等生化試管中進行糖發(fā)酵試驗，同時進行V-P試驗，MR試驗，尿素酶試驗，H2S試驗，硝酸鹽還原試驗等。

藥敏試驗：采用紙片擴散法。將適量培養(yǎng)24h的分離菌株接種于巧克力瓊脂平板，加適量無菌生理鹽水，用L型玻璃棒涂布均勻。加蓋靜置5min，用鑷子將藥敏片平放在平板上，并輕壓使其緊貼平板表面。每個平板7張藥敏片，貼好藥敏片的平板于37℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。

對小白鼠致病性試驗：分離菌株接種于營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24h。同時取18～20g的健康小白鼠6只，其中3只作為實驗組，均腹腔注射上述培養(yǎng)物0.5ml，另外3只作為對照組，腹腔注射等量普通肉湯。觀察小白鼠死亡和發(fā)病情況，對死亡的小白鼠進行剖檢。

1.6治療

根據(jù)病豬的常規(guī)檢查和實驗室診斷結(jié)果，結(jié)合藥敏試驗結(jié)果篩選的藥物，制定合理的治療方案。

2　結(jié)果與分析

2.1病豬常規(guī)檢查

2.1.1流行情況及臨床癥狀2014年3月上旬，河南省某豬場個別育肥豬突然出現(xiàn)嚴重咳嗽和喘氣，呼吸高度困難，犬坐，張口，喘鳴，體溫40.5～41℃，皮膚發(fā)紅，耳朵發(fā)紫，少數(shù)病例來不及治療，突然倒地死亡，死亡豬只口、鼻流出白色或者血色泡沫。大多數(shù)病豬用廣譜抗生素治療后明顯好轉(zhuǎn)。耐過豬群增重明顯減慢，發(fā)育不整齊。

2.1.2剖檢病變?nèi)砹馨徒Y(jié)周邊出血，出血性、壞死性、纖維素性胸膜肺炎，纖維素性心包炎，肺表面有一層黃色纖維素性滲出物與胸腔粘連，胸腔、腹腔有淡黃色積液，脾臟腫大、壞死、背部丘疹。

2.2實驗室診斷

2.2.1鏡檢無菌采取病死豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等病料直接涂片，革蘭氏染色鏡檢發(fā)現(xiàn)待檢物有大量革蘭氏陰性菌，小桿狀或球桿菌，有的呈絲狀，多形態(tài)。

2.2.2細菌培養(yǎng)與純化將病死豬的病料培養(yǎng)物經(jīng)培養(yǎng)分離純化出一株胸膜肺炎放線桿菌疑似菌株。

2.2.3細菌培養(yǎng)性狀觀察綿羊血瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18～24h，可見光滑、濕潤、圓形的針尖大小的菌落，并出現(xiàn)不太明顯的溶血環(huán)；巧克力瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18～24 h，菌落稍大些；普通肉湯中生長良好，培養(yǎng)24h肉湯渾濁。

2.2.4生化試驗反應(yīng)結(jié)果分離菌株的生化反應(yīng)鑒定結(jié)果如表1所示，參照《伯杰氏細菌鑒定手冊》。

表1　生化試驗結(jié)果

2.2.5藥敏試驗將分離鑒定的純菌株采用常規(guī)紙片擴散法進行藥敏試驗，結(jié)果該菌株對頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢哌酮高度敏感，對阿米卡星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星中度敏感，藥敏試驗結(jié)果見表2。

表2　藥敏試驗結(jié)果

2.2.6對小白鼠致病性試驗結(jié)果接種48h后實驗組3只小白鼠全部發(fā)病，其中1只耳尖、尾稍出現(xiàn)紫紅色小斑點，肺腫大，表面有輕微纖維素性滲出物，胸腔有黃色積液，脾腫大。對發(fā)病鼠進行剖檢，在肺臟分離到胸膜肺炎放線桿菌。

2.3治療情況

根據(jù)臨床、實驗室診斷及藥敏試驗的結(jié)果制定治療方案，同時補充多維，堅持每天消毒一次，注意豬舍的通風(fēng)和衛(wèi)生環(huán)境的改善。用藥3d后電話回訪，豬的死亡數(shù)量減少，豬群有明顯好轉(zhuǎn)，精神開始恢復(fù)，采食量逐漸上升。15d后電話回訪，疫情得到全部控制，豬群健康狀況已明顯好轉(zhuǎn)。

3　小結(jié)與討論

根據(jù)分離菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生化試驗以及動物實驗結(jié)果，依據(jù)該豬場疫病的流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化等，將該豬場的疾病確診為傳染性胸膜肺炎，制定有效措施，并通過藥敏試驗選擇敏感藥物進行治療，有效地控制了疫情。

該病的防治措施如下：一是加強飼養(yǎng)管理，注意通風(fēng)換氣，保持舍內(nèi)空氣清新，保持豬群足夠的營養(yǎng)水平；二是早期使用抗生素（如頭孢唑啉）治療有效，可減少死亡，一般采用肌肉或皮下注射，需要大劑量重復(fù)給藥，注意豬群易產(chǎn)生耐藥性，可采取交叉用藥；三是做好免疫接種，疫苗免疫接種一般在5～8周首免，2～3周后二免。母豬在產(chǎn)前3～4周接種豬傳染性胸膜肺炎疫苗，種公豬每年進行定期接種；四是做好豬舍消毒，最好做到全進全出，胸膜肺炎放線桿菌對常用消毒劑和溫度敏感。一般消毒藥即可殺滅，在60℃下15～20min內(nèi)即可被殺死；五是減少應(yīng)激，特別是注意溫差的變化，豬怕熱不怕冷，最怕忽冷忽熱；六是做好保健，在轉(zhuǎn)豬前后和天氣變化時，飼料中加保健藥一周；七是做好檢疫，引進豬種之前應(yīng)用血清學(xué)試驗進行檢疫。

豬傳染性胸膜肺炎是由對豬有高度特異性的呼吸道寄生菌胸膜肺炎放線桿菌（APP）引起的一種接觸性傳染病。胸膜肺炎放線桿菌屬于巴氏桿菌科放線桿菌屬，目前已報道的有15個血清型，各血清型之間具有特異性，其特異性取決于莢膜多糖和菌體脂多糖。該菌通過呼吸道進入肺臟，在肺內(nèi)被肺泡巨噬細胞迅速吞噬產(chǎn)生毒素，對肺巨噬細胞和血液中單核細胞產(chǎn)生細胞毒性作用，導(dǎo)致肺部病理變化，并且導(dǎo)致支氣管充滿黏稠的分泌物，隨著病理變化時間的延長，出現(xiàn)壞死并有纖維化現(xiàn)象。各年齡豬只均可感染，通常以2～5月齡（3月齡尤為敏感），體質(zhì)量為30～60kg的豬多發(fā)。豬傳染性胸膜肺炎一年四季均可發(fā)生，特別是在春季（4-5月）和秋末（9-11月）多發(fā)。現(xiàn)在該病在許多豬場廣泛流行，且豬群規(guī)模越大，發(fā)病風(fēng)險亦越大，每年都會造成嚴重的經(jīng)濟損失。該病的傳播途徑主要是呼吸道，也可通過豬只之間的接觸傳播，病豬和帶菌豬是主要傳染源，無臨診癥狀有病理變化豬，或無臨診癥狀無病理變化隱性帶菌豬較常見。飼養(yǎng)環(huán)境突然改變，豬群的轉(zhuǎn)移或混群，擁擠或長途運輸，通風(fēng)不良，濕度過高，氣溫驟變，飼養(yǎng)密度大，維生素E缺乏，過堂風(fēng)等均能促使該病發(fā)生，使發(fā)病率和死亡率升高?！?/p>

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