任卓如　毛光明　陳彥清

賴氨大黃酸對(duì)糖尿病大鼠肝臟及胰腺的保護(hù)作用

任卓如毛光明陳彥清

目的對(duì)賴氨大黃酸（RHL）在糖尿病大鼠肝臟和胰腺保護(hù)作用進(jìn)行探討。方法將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和25 mg/kg RHL組、50 mg/kg RHL組，分別對(duì)其肝臟組織的丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶以及血糖、甘油三酯、總膽固醇進(jìn)行觀察比較，對(duì)胰腺活性氧水平、抗氧化酶活性水平進(jìn)行觀察比較。結(jié)果與對(duì)照組相比，模型組肝臟組織的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶明顯降低，血糖、甘油三酯和總膽固醇以及胰腺活性氧水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，兩個(gè)治療組的血糖、甘油三酯、總膽固醇和胰腺活性氧水平明顯降低，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論RHL能夠有效抑制肝臟和胰腺的氧化應(yīng)激，提高氧化酶活性，從而起到保護(hù)糖尿病大鼠肝臟和胰腺作用。

賴氨大黃酸；糖尿??；肝臟；胰腺

【Abstract】Objective To study the protective mechanism of rhein lysinate（RHL）on the liver and pancreas in rat with diabetes.Method The rats were randomly assigned into four groups：the control group，the model group，25 mg/kg RHL group and 50 mg/kg RHL group.The levels of the malonaldehyde，superoxide dismutase and glutathione peroxidase in the liver tissue，glucose，triglyceride and total cholesterol in blood were observed and compared；levels of active oxygen and antioxidant enzymes in the pancreas were also observed and compared.Results Compared with the control group，the level of superoxide dismutase and glutathione peroxidase in the liver of the model group were significantly decreased，the glucose，triglyceride，and total cholesterol in blood and active oxygen levels in the pancreas were significantly elevated（P＜0.05）；Compared with the model group，the glucose，triglyceride，total cholesterol in blood and active oxygen levels in the pancreas were significantly decreased；the superoxide dismutase and glutathione peroxidase were significantly increased（P＜0.05）.Conclusion Rhein lysinate could effectively inhibit the oxidative stress in the liver and pancreas，improve the activity of antioxidant enzyme，and thus protect the liver and pancreas in rat with diabetic.

【Key words】Rhein lysinate；Diabetes；Liver；Pancreas

糖尿病是現(xiàn)代常見(jiàn)慢性疾病，以血糖升高為主要表現(xiàn)，對(duì)人體的肝臟和胰腺具有較大損害，并可引發(fā)多種并發(fā)癥，對(duì)人體健康造成嚴(yán)重威脅。為減輕糖尿病對(duì)患體肝臟、胰腺的損傷，本文主要對(duì)賴氨大黃酸（RHL）在保護(hù)糖尿病患鼠肝臟和胰腺方面的作用機(jī)制進(jìn)行了分析，并與正常組大鼠和模型組大鼠進(jìn)行了比較，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

一、一般資料

選取60只雄性大鼠，體質(zhì)量在290～310 g之間，放置于濕度65%～70%、溫度22℃中進(jìn)行飼養(yǎng)1周后開(kāi)始進(jìn)行試驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備好各種試劑，包括RHL，鏈脲佐菌素，丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）測(cè)定試劑盒，胰島素檢測(cè)試劑盒。

結(jié)果

一、各組大鼠血糖、血脂、胰島素水平比較

模型組大鼠的血糖、TG、TC明顯高于對(duì)照組，胰島素水平明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；25 mg/kg RHL治療組和50 mg/kg RHL治療組的血糖、TG、TC明顯低于模型組，胰島素水平明顯高于模型組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

二、各組大鼠肝臟和胰腺中MDA、GSH-Px、SOD活性變化

模型組大鼠的SOD、GSH-Px活性明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），MDA水平?jīng)]有發(fā)生明顯變化；與模型組相比，RHL治療組的MDA水平均沒(méi)有明顯變化，50 mg/kg RHL治療組的SOD、GSH-Px的活性明顯高于模型組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

三、大鼠胰腺組織活性氧水平變化

通過(guò)對(duì)胰腺染色組織進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示模型組大鼠的胰腺活性氧水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；25 mg/kg RHL治療組和50 mg/kg RHL治療組的胰腺組織活性氧水平明顯低于模型組（P＜0.05）。

四、大鼠肝臟組織病理觀察比較

與對(duì)照組大鼠肝臟組織相比，模型組大鼠的肝細(xì)胞中可見(jiàn)大量的脂肪空泡，肝臟脂肪發(fā)生變性；接受25 mg/kg RHL治療的大鼠組，其肝臟組織細(xì)胞中的脂肪空泡較少，接受50 mg/kg RHL治療的大鼠組，其肝臟組織細(xì)胞中未見(jiàn)脂肪空泡。

討論

糖尿病是臨床常見(jiàn)慢性糖代謝障礙疾病，以持續(xù)升高血糖為主要臨床表現(xiàn)［3］，進(jìn)而引發(fā)多種并發(fā)癥，累及肝臟、腎臟、心血管和視網(wǎng)膜等，對(duì)人類身體健康造成極大威脅。目前臨床上尚無(wú)根治糖尿病的方法，只能通過(guò)降糖藥物來(lái)控制血糖，從而有效預(yù)防糖尿病晚期并發(fā)癥。

近年來(lái)RHL作為一種有效的血糖激動(dòng)劑［4］，能夠有效改善肝臟葡萄糖利用不足情況，保護(hù)患者肝臟，提高對(duì)胰島素的敏感性，起到保護(hù)肝臟和胰腺的作用，有效控制和治療糖尿病，預(yù)防肝臟和胰腺并發(fā)癥的發(fā)生。RHL是賴氨酸和大黃酸反應(yīng)生成的新化合物［5］，能夠溶于水，對(duì)于給藥治療提供了方便。本文主要對(duì)RHL對(duì)糖尿病大鼠肝臟和胰腺影響進(jìn)行了分析，將大鼠分為模型組、25 mg/kg RHL治療組和50 mg/kg RHL治療組，并將其與對(duì)照組進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，糖尿病模型組的大鼠的血糖、TG和TC水平明顯高于對(duì)照組，胰島素水平明顯低于模型組大鼠，這說(shuō)明糖尿病模型組大鼠的血糖升高，并存在明顯的血脂代謝異常表現(xiàn)，且胰島素分泌明顯減少，影響糖代謝。而在MDA、SOD和GSH-Px活性比較上，模型組大鼠的MDA水平?jīng)]有明顯變化，在SOD和GSH-Px活性比較上明顯低于對(duì)照組，這說(shuō)明糖尿病大鼠的肝臟處于容易遭受氧化應(yīng)激損傷的狀態(tài)中［6］，這使得肝臟缺乏相應(yīng)保護(hù)，發(fā)生相關(guān)并發(fā)癥的可能性明顯提高。在接受RHL治療后，兩個(gè)治療組的血糖、TG和TC水平明顯低于模型組大鼠，胰島素水平明顯高于模型組大鼠，這說(shuō)明RHL能夠有效控制患鼠血糖、血脂，增強(qiáng)胰島素水平，加強(qiáng)糖代謝。在接受治療后，兩個(gè)治療組的SOD和GSH-Px活性明顯增強(qiáng)，使得肝臟抵御氧化損傷能力得到加強(qiáng)，從而有效預(yù)防肝臟和胰腺受損，減少并發(fā)癥的發(fā)生。模型大鼠的活性氧水平明顯高于正常組的大鼠，說(shuō)明糖尿病會(huì)直接影響患體胰腺的氧活性，使得胰腺的抗氧化酶活性降低，促進(jìn)活性氧自由基的釋放。而給予RHL治療的兩組大鼠，其治療后胰腺活性氧水平明顯降低，說(shuō)明胰腺抗氧化酶活性增強(qiáng)，抑制了活性氧自由基的釋放，對(duì)于延緩胰腺衰老、保護(hù)胰腺具有重要作用。模型組大鼠肝臟組織細(xì)胞中有大量脂肪空泡，說(shuō)明肝臟已經(jīng)發(fā)生脂肪變性，出現(xiàn)脂肪肝表現(xiàn)，也是糖尿病臨床常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥，而接受RHL治療的兩組大鼠，其肝臟組織細(xì)胞中的脂肪空泡明顯較少，50 mg/kg治療組的大鼠其肝臟組織細(xì)胞中脂肪空泡已經(jīng)消失，說(shuō)明RHL能夠有效治療和抑制肝臟組織細(xì)胞脂肪變性，減少脂肪肝的發(fā)生。這一研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究結(jié)果一致［7］，另外有其他相關(guān)研究對(duì)RHL對(duì)抑制脂肪肝發(fā)生和促進(jìn)胰島素分泌作用進(jìn)行了進(jìn)一步研究，表明RHL能夠明顯減少胰島細(xì)胞凋零，激活脂肪酸代謝相關(guān)因子［8］，從而起到保護(hù)肝臟和胰腺作用，本文由于篇幅有限未對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步探討。

綜上所述，RHL能夠有效抑制肝臟脂肪的形成，提高肝臟的抗氧化能力，清除氧自由基，減少胰腺細(xì)胞的凋亡，從而起到保護(hù)肝臟和胰腺的作用，對(duì)于治療和預(yù)防糖尿病及并發(fā)癥具有重要作用。

1 甄永占，胡剛，趙毓芳，等.賴氨大黃酸對(duì)快速老化小鼠SAMP 10腎組織TNF-α、IL-6、NF-κB表達(dá)的影響.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，35（3）：411-414.

2 紀(jì)春梅，甄永占，范曉禹，等.賴氨大黃酸與順鉑聯(lián)合對(duì)人肺癌A549細(xì)胞系增殖和凋亡的影響.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，34（2）：155-159.

3 甄永占，林雅軍，章廣玲，等.賴氨大黃酸抑制p-EGFR誘導(dǎo)宮頸癌CaSki細(xì)胞系細(xì)胞凋亡.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32（4）：413-416.

4 甄永占，林雅軍，駱廣玲，等.賴氨大黃酸通過(guò)激活JNK誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31（1）：68-72.

5 林雅軍，黃云虹，甄永占，等.賴氨大黃酸通過(guò)抑制HER-2信號(hào)通路誘導(dǎo)乳腺癌SK-Br-3細(xì)胞凋亡.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2008，43（11）：1099-1105.

6 劉曉慶，甄永占，郝曉方，等.賴氨大黃酸對(duì)糖尿病大鼠肝臟的保護(hù)作用及其機(jī)制.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，5（3）：499-503.

7 胡剛，甄永占，駱廣玲，等.賴氨大黃酸對(duì)2型糖尿病小鼠胰腺保護(hù)作用.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（5）：461-465.

8 甄永占，胡剛，章廣玲，等.賴氨大黃酸對(duì)快速老化小鼠SAMP 10腎組織COL1A1、COL3A1和COL4A1表達(dá)的影響.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（17）：1805-1808.

（本文編輯：鞏蘭波）

Protective mechanism of rhein lysinate on liver and pancreas in rat with diabetes

REN Zhuo-ru，MAO Guang-ming，CHEN Yan-qing.Department of Pharmacy，Panzhihua，central Hospital，Panzhihua，Sichuan 637000

10.3969/j.issn.1672-2159.2015.06.010

637000攀枝花市中心醫(yī)院藥學(xué)部

二、動(dòng)物分組

將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和兩個(gè)治療組，每組各有15只大鼠。接著建立糖尿病模型，分別給模型組和RHL治療組進(jìn)行鏈脲佐菌素注射，一次注射量在60 mg/kg，在72 h后對(duì)其進(jìn)行全血血糖測(cè)定，血糖水平在16.7 mmol/L以上為糖尿病鼠。

三、試驗(yàn)方法

對(duì)照組大鼠和模型組大鼠在試驗(yàn)期間給予等量溶媒灌胃，RHL治療組一組每天給予25 mg/kg RHL藥液，另一組每天給予50 mg/kg RHL藥液，所有大鼠在試驗(yàn)期間均接受標(biāo)準(zhǔn)飲食，自由飲用水，不給予胰島素治療。連續(xù)用藥觀察4周后，在麻醉?xiàng)l件下取腹腔靜脈血，進(jìn)行離心處理，血清作為檢測(cè)標(biāo)本。取大鼠的肝臟進(jìn)行反復(fù)清洗，做肝大葉縱切，放于甲醛溶液中進(jìn)行固定［1］，并在處理后進(jìn)行HE染色，對(duì)肝臟組織進(jìn)行觀察比較；取大鼠胰腺進(jìn)行反復(fù)清洗，制成冰凍切片，將其置于多聚甲醛中進(jìn)行固定，并在相關(guān)處理后進(jìn)行DHE染色，對(duì)大鼠肝臟切片組織和胰腺切片組織進(jìn)行觀察。

四、指標(biāo)測(cè)定

采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖，采用酶比色法測(cè)定甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）。對(duì)大鼠肝組織MDA水平的檢測(cè)采用硫代巴比妥酸方法［2］，對(duì)大鼠肝組織的SOD活性采用聯(lián)苯三酚自氧化法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)大鼠肝組織的GSH-Px活性采用NADPH偶聯(lián)法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)大鼠胰腺的胰島素分泌情況采用胰島素釋放試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

五、診斷標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)組中用藥治療效果有效標(biāo)準(zhǔn)為：用藥后血糖、TG、TC明顯下降，SOD、GSH-Px、胰島素水平明顯提高。

六、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)工具SPSS 15.0對(duì)幾組大鼠各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中各數(shù)據(jù)采用單因素方差分析檢驗(yàn)，結(jié)果以±s表示，其中P＜0.05說(shuō)明數(shù)據(jù)間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1各組大鼠血糖、血脂、胰島素水平比較（±s）

注：*與對(duì)照組相比，P＜0.05；#與模型組相比，P＜0.05。

組別只數(shù)血糖（mmol/L）TG（mmol/L）TC（mmol/L）胰島素（μg/L）%%%%%%%%對(duì)照組15%%7.7±0.41.6±0.20.8±0.10.24±0.2 %%%%%%%%模型組15%%22.3±1.8*%%3.5±0.3*%%2.5±0.2*%%0.11±0.1* %%%%%%%%25 mg/kg RHL治療組1520.6±1.7%2.5±0.2#%2.1±0.2#%0.21±0.2#%%%%%%%%50 mg/kg RHL治療組1518.3±1.5#%1.9±0.1#%1.3±0.1#%0.22±0.1#

表2各組大鼠MDA、SOD、GSH-Px活性比較（±s）

注：*與對(duì)照組相比，P＜0.05；#與模型組相比，P＜0.05。

2015-08-28）