孔艷娥 楊本壽 蘇麗娜

摘 要：對從野生茶樹菇子實體中分離、純化獲得的茶樹菇YBS408菌株進行了人工馴化，代料栽培取得了成功。紙片擴散法檢測初次純化得到的和人工馴化后的茶樹菇YBS408對12種病原指示菌的抑菌活性。結果初次純化的茶樹菇YBS408菌株對病原細菌抑菌活性明顯，而對病原真菌不明顯。人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株對所有指示菌均無抑菌活性，出現(xiàn)抑菌活性丟失現(xiàn)象。

關鍵詞：茶樹菇YBS408 抑菌活性 人工馴化

中圖分類號：TQ465.92 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）07（b）-0021-02

茶樹菇（Agrocybe cylindracea）屬于真菌門，擔子菌綱，糞銹傘科，田菇屬。又名茶薪菇、楊樹菇、柱狀田頭菇、柳菌、柳環(huán)菌、柳松茸、柱狀環(huán)銹傘等。營養(yǎng)豐富，味道鮮美，具有很高的實用價值。同時，具有明目、利尿、平肝、健脾、清熱等藥用價值。是一種珍貴的藥、食兩用菌，素有“中華神菇”之美譽。

茶樹菇YBS408菌株是從曲靖市麒麟?yún)^(qū)護城河旁的柳樹上采摘到的茶樹菇子實體分離、純化獲得。依照文獻報道[1-2]進行了形態(tài)分類鑒定，結合分子鑒定為茶樹菇并命名。茶樹菇YBS408菌株經(jīng)過人工馴化后，代料栽培獲得了成功。本研究主要對初次純化得到的及人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株進行抑菌活性檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

茶樹菇YBS408菌株，現(xiàn)存于曲靖醫(yī)學高等專科學校微生物研究所。

1.1.2 茶樹菇YBS408菌株代料栽培配方

棉籽殼78%、麥麩18%、石膏粉1%、糖1%、石灰粉2%，PH自然。茶樹菇YBS408菌株菌絲培養(yǎng)階段置于25℃恒溫箱內(nèi)，待褐化轉色后，開袋噴水，置于22℃條件下培養(yǎng)。

1.1.3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

病原指示細菌培養(yǎng)基：Nutrient Agar培養(yǎng)基（Pepton 5g，Beef extract 30 g，NaCl 5 g，Agar 15 g，加d H2O 至1000mL，pH：7.0-7.2）。病原指示真菌及茶樹菇YBS408菌株培養(yǎng)基：PDA固體培養(yǎng)基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，自來水1000mL，pH自然）；發(fā)酵培養(yǎng)基：PDB液體培養(yǎng)基；病原指示細菌培養(yǎng)基：培養(yǎng)溫度為28℃，病原指示細菌、皮膚致病真菌指示菌培養(yǎng)溫度為37℃，植物致病真菌指示菌培養(yǎng)溫度為28℃。

1.1.4 病原指示菌

抑菌活性測試中所用到的35種病原指示菌特性、來源見表1。

1.2 方法

1.2.1 發(fā)酵樣品的制備

將純化的及人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株接種到35 mL PDB培養(yǎng)基中，28℃，200r/min搖床培養(yǎng)5d，無菌條件下濾去菌絲體，在得到的發(fā)酵液中加入等體積乙酸乙酯，浸提48 h后過濾除去菌體，濃縮至干，加入2 ml甲醇制成發(fā)酵樣品。

1.2.2 含菌平板的制備

取各病原指示菌的新鮮斜面培養(yǎng)物分別接入5 ml無菌水稀釋制成菌懸液。無菌條件下分別取供試指示菌懸液各0.2 ml，加入相應的固體培養(yǎng)基制成含菌平板。

1.2.3 抑菌活性檢測

采用濾紙片法（直徑6 mm）測定抑菌活性，將浸泡有茶樹菇YBS408菌株發(fā)酵液的無菌濾紙片三片疊加在一起放入含菌平板上。置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，十字交叉法測量抑菌圈直徑。

2 結果與分析

2.1 代料栽培茶樹菇YBS408菌株結果

茶樹菇YBS408菌株菌絲培養(yǎng)60d后，菌絲長滿菌袋，出現(xiàn)褐化轉色現(xiàn)象。開袋噴水，在保持空氣濕度85%條件下10d～15d后，子實體原基大量形成，并開始出菇。出菇結果見圖1。

2.2 抑菌活性檢測結果

采用濾紙片法對初次純化得到的茶樹菇YBS408菌株發(fā)酵液的甲醇提液進行抑菌試驗（結果見表2）。從表2可見，茶樹菇YBS408菌株的甲醇提液對所測定的3種革蘭氏陽性菌和3種革蘭氏陰性細菌指示菌均具有抑菌活性。其中對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌抑菌活性較強。對所檢測的6種真菌抑菌活性較弱，只對水稻稻瘟菌16t有一定的抑制作用。

同時，對人工馴化后，獲得代料栽培成功后獲得的茶樹菇YBS408菌株的發(fā)酵液也進行了抑菌活性檢測。結果顯示，人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株對所檢測的12種病原指示菌均無抑菌活性。

3 結語

本次試驗成功的從野外生長的茶樹菇子實體中分離、純化得到茶樹菇YBS408菌株，并經(jīng)過人工馴化，獲得了代料栽培的成功。

通過抑菌活性檢測試驗，可以看出初次純化獲得的茶樹菇YBS408菌株甲醇發(fā)酵液對所檢測的6種細菌均具有不同程度的抑菌效果，但對真菌的抑菌效果不明顯。而對人工馴化后，經(jīng)過代料栽培取得成功后的茶樹菇YBS408菌株甲醇發(fā)酵液進行抑菌活性檢測，結果均無抑菌效果，出現(xiàn)了抑菌活性丟失現(xiàn)象。抑菌活性丟失現(xiàn)象是繼代培養(yǎng)造成的菌株退化引起的，菌株自身存在的自發(fā)突變和培養(yǎng)條件的改變都會造成菌株的退化。最根本的原因是菌株自身的自發(fā)突變引起的。傳代次數(shù)越多，菌株發(fā)生變異的幾率越高，控制抑菌活性性狀的基因發(fā)生突變的可能性就越高，從而造成抑菌活性的丟失。因此，在以后的食用菌培養(yǎng)栽培過程中，只有控制傳代次數(shù)，改變培養(yǎng)條件，改進菌種的保藏條件才可以有效避免抑菌活性的丟失。

參考文獻

[1]Barnett HL，Hunter BB. Illustrated genera of imperfect fungi[M].Illustrated genera of imperfect fungi，1972（3rd ed）.

[2]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上?？茖W技術出版社，1979.