姜巧方，王小平，白吉慶

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

·基礎(chǔ)研究·

秦皮薄層鑒別方法的改進△

姜巧方，王小平，白吉慶*

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

目的：對秦皮薄層鑒別的展開系統(tǒng)進行改進。方法：改進了原標(biāo)準(zhǔn)的展開系統(tǒng)，采用硅膠G板，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)為展開劑，置紫外光燈(365 nm)下檢視秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素。結(jié)果：在供試品色譜中，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素斑點清晰，分離度好，重現(xiàn)性好。結(jié)論：該方法的展開系統(tǒng)減少了對環(huán)境的污染和對人體的傷害，可替代原標(biāo)準(zhǔn)用于秦皮的鑒別。

秦皮；薄層鑒別；秦皮甲素；秦皮乙素；秦皮素

秦皮為木犀科植物苦櫪白蠟樹FraxinusrhynchophyllaHance、白蠟樹FraxinuschinensisRoxb.、尖葉白蠟樹FraxinusszaboanaLingelsh.或宿柱白蠟樹Fraxinusstylosalingelsh.的干燥枝皮或干皮[1]。秦皮具有清熱燥濕，收澀止痢，止帶，明目之功能，用于治療熱痢，泄瀉，赤白帶下，目赤腫痛等癥[2-3]。研究表明，秦皮具有抗炎、止痛、抗氧化和降低血尿酸等功能，治療痛風(fēng)效果極佳[3-4]。秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素是秦皮的主要有效成分，具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用[5-6]?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版一部中以秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素3種成分作為秦皮定性鑒別的標(biāo)識成分，采用硅膠G薄層色譜法，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)為展開劑，對秦皮進行鑒別，但由于展開劑中使用了毒性較大的三氯甲烷，對環(huán)境和人體有一定的危害[7]。本試驗對秦皮薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)進行了改進，用二氯甲烷替代三氯甲烷，以減少對人體的危害和對環(huán)境的污染。通過研究，建立了一種較為理想的薄層鑒別展開系統(tǒng)，樣品中所鑒別的成分斑點清晰，分離度好，重現(xiàn)性好。該方法可以替代原標(biāo)準(zhǔn)用于秦皮的鑒別。

1 儀器與材料

1.1 儀器

200 g多功能粉碎機(上海樹立儀表有限公司)；BT125D電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，d=0.1 mg；d=0.01 mg)；2F-90多功能暗箱式紫外透射儀(上海寶山顧材電光儀器廠)；HH-2A型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)。

1.2 試藥

秦皮甲素對照品、秦皮乙素對照品、秦皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為0740-200104，110741-200506，111731-200501)；甲酸、甲醇、三氯甲烷等均為分析純；秦皮藥材經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院白吉慶副教授鑒定為苦櫪白蠟樹FraxinusrhynchophyllaHance、白蠟樹FraxinuschinensisRoxb.的干燥枝皮或干皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 供試品溶液的制備 取秦皮粉末1 g，置圓底燒瓶中，加入甲醇10 mL，置水浴加熱回流10 min，取出，放冷，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中，于水浴上揮干，殘渣加入5 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素對照品適量，置于量瓶中，分別加甲醇溶解，并以甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為0.115、0.98、0.18 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液

2.2 結(jié)果

2.2.1 改進方法 吸取上述3種對照品溶液各2 μL和供試品溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置于紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，結(jié)果見圖1。

注：1、2、6、7：秦皮供試品；3.秦皮甲素對照品；4.秦皮乙素對照品；5.秦皮素對照品。下同。圖1 秦皮薄層色譜鑒別(改進方法)

2.2.2 原方法 照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄薄層色譜法試驗[8]，吸取上述3種對照品溶液各2 μL和供試品溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置于紫外光燈(365 nm)下檢視，在供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，結(jié)果見圖2。

圖2 秦皮薄層色譜鑒別(2010版藥典方法)

3 討論

溫度和濕度也是薄層色譜鑒別的影響因素，本試驗對展開環(huán)境的溫度進行考察，結(jié)果在15～25 ℃，供試品色譜中主要斑點的分離度較好。同時對展開環(huán)境的相對濕度進行考察，分別考察了相對濕度為20%、30%、60%、75%，結(jié)果在20%～60%，供試品色譜中主要斑點的分離度較好。

本試驗對不同來源的秦皮和同一來源不同產(chǎn)地的秦皮，用改進后展開系統(tǒng)進行了鑒別，結(jié)果顯示，均能鑒別出秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素，只是不同基源、不同產(chǎn)地的秦皮中，秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素斑點的大小和顏色的深淺略有不同，說明基源和產(chǎn)地對秦皮中的主要成分秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的含量有一定的影響。

原標(biāo)準(zhǔn)秦皮薄層鑒別中使用三氯甲烷為展開劑的主要組分，該試劑毒性較大。而本試驗通過研究用毒性較小的二氯甲烷代替三氯甲烷，不僅不會影響秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的鑒別，而且還會減少對人體的危害和對環(huán)境的污染。采用改進后的TLC 鑒別方法鑒別秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素，方法簡單，專屬性強，重復(fù)性好，可替代原標(biāo)準(zhǔn)用于秦皮的鑒別。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：254.

[2] 付珊.秦皮質(zhì)量控制方法研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2014.

[3] 張林，張夢琪，傅延齡.秦皮歷代臨床用量分析[J].中藥材，2014，55(22)：1957-1960.

[4] 翁遠(yuǎn)超，劉靜雯，崔璨.秦皮中化學(xué)成分的分離鑒定及其體外抑菌活性[J].西北國防醫(yī)學(xué)雜志，2012，24(1)：40-47.

[5] 劉爽，謝鯤鵬，鄒丹.秦皮素對大腸埃希菌作用機制的初步研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2014，26(10)：1123-1126.

[6] 向小四.秦皮甲素提取純化工藝及降尿酸作用研究[D].長沙：中南大學(xué).2013.

[7] 王海蘭.三氯甲烷的職業(yè)危害與防護[J].現(xiàn)代職業(yè)安全，2014，(5)：110-112.

[8] 羅進斌，林惠芬，黃方取.一起急性三氯甲烷中毒事故的調(diào)查[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2014，31(6)：462-466.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34-35.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFraxiniCortex

JIANGQiaofang，WANGXiaoping，BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM，Xianyang712046，Shaanxi，China)

Objective：To improve the TLC identification method of Fraxini CortexMethods：TLC developing system of the original quality standard was improved.Using silica gel G thin layer plate，aesculin，aesculetin and fraxetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(7∶>0.5∶>0.5)，and detected under the uv lamp(365 nm).Results：In the chromatogram，the spots of aesculin，aesculetin and fraxetin were clear.The method was repeatable．Conclusion：The method is simple and environment friendly，could replace the original standard to identify Fraxini Cortex.

Fraxini Cortex；TLC；aesculin；aesculetin；fraxetin

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.008

2015-01-28)

陜西省中醫(yī)藥管理局科研項目(13-ZY049)

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白吉慶，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源開發(fā)與利用；Email：baijiqing323@126.com