余　晶，馬曉冬，郗　敏，吳毅平

（華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院整形美容外科　湖北　武漢　430030）

不同年齡大鼠脂肪組織移植后存活率比較研究

余晶，馬曉冬，郗敏，吳毅平

（華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院整形美容外科湖北武漢430030）

目的：建立不同年齡大鼠來源的脂肪組織注射移植的動(dòng)物模型，對比觀察研究年齡因素對移植脂肪存活的影響，為臨床脂肪移植應(yīng)用提供依據(jù)。方法：取年輕（4周齡）、中年（10月齡）、老年（18月齡）三個(gè)年齡組的雌性SD大鼠的皮下脂肪組織，注射移植到同一只SD大鼠（10周齡）的背部皮下，在移植術(shù)后24h，48h，72h，96h，5d，7d，14d，4周，8周，分別對脂肪移植物進(jìn)行超聲造影檢查，然后取移植物標(biāo)本，行形態(tài)學(xué)觀察，并制作HE染色、Perilipin免疫熒光染色切片，行組織學(xué)觀察，比較不同年齡來源的脂肪組織移植后的早期脂肪組織存活情況及遠(yuǎn)期存活率。結(jié)果：SD大鼠的顆粒脂肪組織在移植后出現(xiàn)從缺血退化到再生的動(dòng)態(tài)組織重塑過程，早期僅有移植物最外層的脂肪細(xì)胞存活，隨后出現(xiàn)血運(yùn)重建、脂肪細(xì)胞再生等組織重塑過程，最終形成正常脂肪組織樣結(jié)構(gòu)。4周齡組的脂肪組織在移植后3d內(nèi)存活脂肪細(xì)胞數(shù)目，移植后1周時(shí)脂肪存活區(qū)面積比，血流灌注恢復(fù)時(shí)間，新生的脂肪細(xì)胞數(shù)量，移植后8周時(shí)移植物存活指數(shù)明顯優(yōu)于10月齡、18月齡組（P＜0.05）；而10月齡與18月齡組間無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論：年輕大鼠的脂肪組織在移植后，脂肪組織的早期存活、血運(yùn)重建、脂肪細(xì)胞再生、遠(yuǎn)期脂肪組織存活率明顯優(yōu)于中、老年組；而中、老年組的脂肪組織在移植后遠(yuǎn)期存活率較低，且兩者間無明顯差異。

年齡；脂肪移植；存活率；組織重塑；超聲造影

自體顆粒脂肪移植因其良好的組織相容性、取材廣泛、對機(jī)體創(chuàng)傷小、成本相對低廉等優(yōu)勢，被整形美容外科醫(yī)師越來越廣泛地應(yīng)用于組織填充和重建、修復(fù)［1］。隨著抗衰老治療理念的推廣，自體脂肪移植在中老年人群的應(yīng)用需求顯著增加。然而，雖然整形外科醫(yī)師已經(jīng)作出了很多努力來完善和標(biāo)準(zhǔn)化脂肪移植的手術(shù)操作流程，但脂肪組織移植后存活率的仍不確定，仍可能出現(xiàn)囊腫、鈣化等并發(fā)癥，使得其臨床應(yīng)用受到限制。

移植脂肪的遠(yuǎn)期存活率除與手術(shù)操作、受區(qū)情況相關(guān)外，與脂肪來源本身亦存在關(guān)聯(lián)。對人類皮下脂肪組織的研究發(fā)現(xiàn)［2］，在不同年齡階段，皮下脂肪組織的分布、代謝狀態(tài)不同。人類皮下脂肪組織從胚胎發(fā)育組織發(fā)生后開始增長，至出生后第9個(gè)月停止，直至6～8歲又開始。但青春期后男女脂肪組織增長出現(xiàn)差異，20多歲時(shí)女性軀體脂肪穩(wěn)定增長，而男性停止；老年后則出現(xiàn)皮下脂肪萎縮?？梢?，不同年齡機(jī)體的皮下脂肪組織代謝活性不同。那么供體的年齡是否影響移植脂肪的遠(yuǎn)期存活率？對此目前尚未有明確研究報(bào)道。

因此，本實(shí)驗(yàn)觀察比較不同年齡來源的大鼠脂肪組織注射移植后的存活情況，通過形態(tài)學(xué)、組織病理學(xué)檢查、超聲學(xué)檢查等方式研究脂肪組織移植后的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)歸過程，初步探討年齡因素對移植脂肪存活率的影響及可能機(jī)制，以期對脂肪移植在臨床應(yīng)用中的可能出現(xiàn)的問題提供參考依據(jù)。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

無特定病原體級（SPF級）SD大鼠，雌性，4周齡（70～80g），10周齡（200～220g），10個(gè)月齡（400～420g），18個(gè)月齡（340～360g），購買于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心【許可證號SCXK（鄂）2008-0005】。實(shí)驗(yàn)過程中對動(dòng)物的處置遵守《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》相關(guān)要求。16G脂肪注射針，彩色多普勒診斷儀（GE，LOGIQ E9，美國），六氟化硫微泡（SonoVue）超聲造影劑，兔抗鼠Perilipin多克隆抗體（Santa），Alexa Fluor 488山羊抗鼠IgG抗體（Invitrogen，美國）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1建立大鼠顆粒脂肪注射移植的動(dòng)物模型：根據(jù)人類皮下脂肪的代謝活性變化特征［2］，以及人類與大鼠年齡的換算公式［3］，選取大鼠的4周齡、10月齡和18月齡，相當(dāng)于人類8歲（少年），25歲（中青年），50歲（中老年）三個(gè)年齡段，為研究對象。無菌操作下分別取三個(gè)年齡組大鼠的背部皮下的脂肪組織，分別制備成顆粒脂肪后，各取1ml，注射移植到同1只10周齡SD大鼠（受體）的背部皮下，以該大鼠脊柱線及其中垂線為界，將大鼠背部分為四個(gè)象限，將三組顆粒脂肪隨機(jī)移植在其中一個(gè)象限，各組間距不少于2cm。建模（n=36只）成功后，分籠飼養(yǎng)于SPF級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)間，自由飲食，每日觀察三組移植物的變化，包括移植物的大小、質(zhì)地、有無出現(xiàn)局部感染、壞死等并發(fā)癥，并記錄。

于移植術(shù)后24h，48h，72h，96h，5d，7d，14d，4周，8周，各分別隨機(jī)選取4只造模成功的大鼠，對三組脂肪移植物進(jìn)行超聲學(xué)檢查，然后處死大鼠，獲取三組脂肪移植物標(biāo)本行形態(tài)學(xué)及病理組織學(xué)檢查。

1.2.2脂肪移植物的超聲學(xué)檢查：將隨機(jī)選取的脂肪移植受體大鼠經(jīng)腹腔麻醉（2%戊巴比妥鈉按4mg/kg）后，尾靜脈穿刺，留置24G套管針，背部備皮。麻醉狀態(tài)下，由華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院超聲科醫(yī)師，對每只大鼠背部的三組移植物，采用彩色多普勒診斷儀分別行超聲學(xué)檢查，檢查項(xiàng)目包括：

1.2.2.1觀察脂肪移植物，區(qū)分其邊界，并觀察其內(nèi)部回聲，根據(jù)回聲強(qiáng)度特征判斷組織構(gòu)成，如纖維包膜層，脂肪組織，水腫、可能的壞死、液化、囊性變、鈣化等。

1.2.2.2脂肪移植物超聲造影（CEUS）檢查：自大鼠尾靜脈留置針快速推注六氟化硫微泡造影劑（0.3ml/kg），記錄六氟化硫微泡造影劑在移植物內(nèi)顯影至代謝的全過程，并對超聲造影圖像定量分析。移植物內(nèi)造影劑顯影區(qū)域即為有血流供應(yīng)、血流灌注恢復(fù)的區(qū)域，于軸線上測量有造影劑顯影區(qū)域的厚度，記錄造影劑完全充盈的時(shí)間。分別選取移植物整體（a）、移植物內(nèi)造影劑顯影區(qū)（b）、移植物中心區(qū)（c）、大鼠皮下脂肪組織（d）、無組織區(qū)（e）為ROI（感興趣區(qū)Region of interest），繪出時(shí)間-強(qiáng)度曲線（time-intensity curve，TIC），對TIC定量分析，記錄各ROI的信號強(qiáng)度峰值，達(dá)峰時(shí)間，并進(jìn)行比較分析（見圖1）。

1.2.3脂肪移植物的形態(tài)學(xué)觀察

1.2.3.1標(biāo)本采集：在完成超聲學(xué)檢查后，將麻醉狀態(tài)下的受體大鼠，俯臥位固定，背部備皮，從皮下層游離掀起背部皮膚，顯露三組脂肪移植物，觀察其大小、血管長入情況、與周邊組織關(guān)系等，并拍照記錄，然后沿著移植物包膜邊緣將其完整切取。

1.2.3.2形態(tài)學(xué)觀察：對切取的脂肪移植物標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)的觀察和對比。應(yīng)用精密電子天平測量移植物重量，每個(gè)樣本測量三次，取平均值；應(yīng)用排水法測量移植物樣本的體積。大體標(biāo)本測得移植物存活率=移植后樣本體積/移植前體積。

1.2.4脂肪移植物的組織學(xué)觀察：將切取的標(biāo)本用4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，然后沿著標(biāo)本縱軸制成4μm厚的石蠟切片，分別行HE染色，及perilipin免疫熒光組織化學(xué)染色。

圖1　大鼠背部皮下脂肪移植物超聲造影檢查及定量分析

1.2.4.1HE染色切片的鏡下觀察：在病理學(xué)專家指導(dǎo)下，對以下觀察指標(biāo)評分［4］：①脂肪組織的完整性：指存活的脂肪細(xì)胞（直徑小于120μm）占整體面積的比例；②壞死的程度：組織壞死所占的面積比；③囊腔和空泡程度：指異常的、破壞融合的脂肪細(xì)胞所占面積比；④纖維化程度：纖維結(jié)締組織的面積比；⑤炎癥反應(yīng)強(qiáng)度：炎性細(xì)胞浸潤的程度；⑥毛細(xì)血管計(jì)數(shù)【個(gè)/高倍視野（HPF）】：在低倍顯微鏡下（×100）下隨機(jī)選取5個(gè)不重疊的視野，然后在高倍顯微鏡（×400）下分別計(jì)數(shù)5個(gè)視野的毛細(xì)血管數(shù)，取均值為該片的毛細(xì)血管計(jì)數(shù)。

除毛細(xì)血管計(jì)數(shù)外，所有指標(biāo)按0到5分分級評分，半定量化：0，幾乎無；1，極少出現(xiàn)（＜25%）；2，極少到中等（25%～50%）；3中等（50%～75%）；4中等到廣泛（＞75%）；5，幾乎全部。

1.2.4.2Perilipin免疫熒光染色切片觀察：脂滴包被蛋白（Perilipin）作為一種重要的脂肪代謝相關(guān)蛋白包被于脂滴的表面。Perilipin免疫熒光染色是目前最可靠的、特異性染色有活性的脂肪細(xì)胞的方法，且染色后良好的顯示脂肪細(xì)胞的形態(tài)［5］。應(yīng)用正置全自動(dòng)熒光顯微鏡觀察移植物的perilipin免疫熒光染色切片，在綠色激發(fā)光源下觀察：①存活的成熟脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)：在每張組織切片內(nèi)，隨機(jī)選取5個(gè)放大400倍的視野，對perilipin陽性、直徑小于20μm的成熟脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)（個(gè)/HPF），取平均值；②應(yīng)用Imge-Pro Plus 6.0圖像分析軟件，計(jì)算所有樣本組織切片內(nèi)脂肪細(xì)胞存活區(qū)域（即perilipin陽性區(qū)域）面積比。使用脂肪移植物存活指數(shù)［5］來評估脂肪移植物的存活情況，脂肪移植物存活指數(shù)=存活脂肪面積比×樣本體積/移植前體積。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析，采用方差分析和多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同年齡大鼠來源的脂肪移植物的動(dòng)態(tài)時(shí)序性變化

對移植后脂肪組織的行大體形態(tài)及超聲影像學(xué)觀察，見所有年齡組的脂肪移植物與大鼠背部正常脂肪組織、肌肉組織等界限清晰、包膜完整，體積逐漸減小，質(zhì)地由韌逐漸變得柔軟、有彈性。所有的移植脂肪樣本內(nèi)未見鈣化、明顯的囊性變、壞死液化等并發(fā)癥?？梢娧苡芍車史派錉铋L入移植物。

對脂肪移植物的病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，所有年齡組的脂肪移植物隨時(shí)間推移出現(xiàn)相似的、動(dòng)態(tài)的組織重塑過程，從缺血退化到組織再生。移植后前3d，鏡下觀察見移植的顆粒脂肪組織纖維包膜包裹，脂肪細(xì)胞排列整齊，大小形態(tài)均勻，perilipin染色強(qiáng)陽性；但隨時(shí)間推移逐漸出現(xiàn)脂肪細(xì)胞融合、壞死，perilipin染色強(qiáng)陽性的細(xì)胞數(shù)量逐漸減少（見圖2A），組織周圍開始出現(xiàn)以中性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤。移植后1周時(shí)，除最外周脂肪細(xì)胞仍大小、形態(tài)正常，整齊排列外，內(nèi)層由融合的脂肪細(xì)胞、纖維間隔和中心的無細(xì)胞區(qū)構(gòu)成，大量炎癥細(xì)胞自周邊浸潤組織；熒光顯微鏡下可見明顯的分區(qū)，最外層充滿perilipin染色強(qiáng)陽性，排列整齊，大小、形狀均勻的細(xì)胞，為有活性的成熟脂肪細(xì)胞，該區(qū)為存活區(qū)［5-6］；而內(nèi)層無perilipin染色陽性的細(xì)胞，表明該區(qū)域內(nèi)的成熟脂肪細(xì)胞全部缺血壞死（見圖3A）。

從移植后第2周開始，移植物內(nèi)層重新出現(xiàn)perilipin染色強(qiáng)陽性的、單核或多核的小細(xì)胞，且數(shù)量逐漸增加，并在第4周達(dá)到峰值，隨后數(shù)量減少（見圖5）。這些細(xì)胞被認(rèn)為是再生的前體脂肪細(xì)胞［6］，表明移植脂肪組織內(nèi)開始出現(xiàn)脂肪再生。第2周～第8周，脂肪細(xì)胞融合區(qū)、中心無細(xì)胞區(qū)、寬的纖維間隔逐漸被新生的脂肪組織替代，新生的脂肪組織由纖細(xì)的纖維間隔分隔大小、形態(tài)均勻的、perilipin染色強(qiáng)陽性的脂肪細(xì)胞團(tuán)構(gòu)成，類似正常脂肪小葉樣結(jié)構(gòu)，纖維間隔內(nèi)可見血管走形。移植后第2周～第4周，再生區(qū)內(nèi)出現(xiàn)新生的脂肪細(xì)胞，而壞死區(qū)內(nèi)仍無活的脂肪細(xì)胞，再生區(qū)和壞死區(qū)的界線清晰。第8周時(shí)壞死區(qū)內(nèi)仍可見囊泡、纖維瘢痕、炎癥細(xì)胞浸潤，移植脂肪組織重塑尚未完全完成（見圖6）。

2.2移植后脂肪組織的早期存活率比較

2.2.1不同年齡大鼠脂肪移植后早期存活的成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量比較

對三個(gè)年齡組的脂肪組織，取移植前、移植術(shù)后24h、48h、72h移植物組織，制作perilipin免疫熒光染色切片，對存活的成熟脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示：①所有年齡組的脂肪移植物，在移植后72h內(nèi)，成熟脂肪細(xì)胞因缺血出現(xiàn)壞死，成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量逐漸減少；且在脂肪組織游離后的24h～72h間，脂肪細(xì)胞數(shù)量明顯減少；②在移植術(shù)后72h時(shí)，4周齡組存活的成熟脂肪細(xì)胞數(shù)量明顯高于其10月齡組或18月齡組（P＜0.05），而10月齡組和18月齡組間無明顯差異（P＞0.05）（見圖2），表明年輕組大鼠的脂肪組織耐缺氧的能力優(yōu)于中老年組。

2.2.2不同年齡組大鼠脂肪移植物脂肪存活區(qū)比較：比較移植術(shù)后1周各組脂肪移植物的存活區(qū)面積比，結(jié)果顯示，4周齡組的移植物的脂肪存活區(qū)面積比（29.20%± 3.41%）明顯高于10月齡組（11.63%±1.64%，P＜0.05）或18月齡組（10.48%±0.75%，P＜0.05），而10月齡組、18月齡組間無明顯差異（P＞0.05）（見圖3）。

以上結(jié)果表明，年輕（4周齡）組的脂肪組織在移植后，早期脂肪組織存活率高于中、老年組（10月齡、18月齡組）；而中、老年組間無明顯差異；年輕供體來源的脂肪組織耐缺氧能力優(yōu)于中老年供體來源的脂肪組織。

2.3移植后脂肪組織的再生情況比較

2.3.1脂肪移植物的血運(yùn)重建速率比較：按移植術(shù)后24h，48h，72h，96h，5d，7d，14d，7個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)對脂肪移植物進(jìn)行超聲造影檢查，直觀的顯示了脂肪組織移植后，血流灌注由移植物周邊逐漸向中心恢復(fù)的動(dòng)態(tài)過程。三個(gè)年齡組的脂肪組織移植后血運(yùn)重建率比較，發(fā)現(xiàn)4周齡組的造影劑充盈時(shí)間較其他兩組早，在移植后第4天或第5天；而10月齡和18月齡組幾乎都在移植后7d才被造影劑完全充盈；計(jì)算所得4周齡組血流灌注恢復(fù)速率快于10月齡或18月齡組（P＜0.05），而10月齡和18月齡組間無明顯差異（P＞0.05）（見圖4）。且4周齡組的移植物造影劑信號強(qiáng)度峰值在各時(shí)間點(diǎn)均高于其他兩組，表明4周齡組的移植物血流灌注較其他兩組豐富。

圖2　移植早期存活脂肪細(xì)胞數(shù)量比較

圖3　移植后1周存活區(qū)面積比較

以上結(jié)果表明，年輕（4周齡）組的脂肪組織在移植后，血運(yùn)重建速率快于中、老年組（10月齡、18月齡組）；而中、老年組間無明顯差異。

2.3.2脂肪組織再生比較：從移植后第2周開始，移植物內(nèi)層出現(xiàn)perilipin染色陽性的、單核或多核的小的圓形細(xì)胞，即再生的脂肪細(xì)胞，隨時(shí)間推移，新生脂肪細(xì)胞的數(shù)量逐漸增加，并在第4周時(shí)達(dá)到峰值，隨后數(shù)量減少。三個(gè)年齡組比較，4周齡組在移植后第4周新生脂肪細(xì)胞數(shù)量明顯高于其他兩組（P＜0.05）；而在移植后第8周則數(shù)量明顯減少，且明顯少于其他兩組（P＜0.05）（見圖5）。結(jié)合組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，此時(shí)4周齡組的移植物在組織學(xué)上類似正常脂肪組織脂肪小葉樣結(jié)構(gòu)，脂肪組織所占面積比明顯高于其他兩組（P＜0.05）（見圖6，見表1），已基本完成脂肪組織再生。以上結(jié)果表明年輕（4周齡）組的脂肪組織在移植后，脂肪再生能力優(yōu)于中、老年組（10月齡、18月齡組）；而中、老年組間無明顯差異。

圖4　血流灌注恢復(fù)速率比較

2.4移植后脂肪組織的遠(yuǎn)期存活率比較

在本實(shí)驗(yàn)的觀察結(jié)束時(shí)間點(diǎn)，移植術(shù)后第8周，以移植物體積維持率、移植脂肪存活指數(shù)兩個(gè)指標(biāo)，分別計(jì)算得出三個(gè)年齡組的脂肪移植物的遠(yuǎn)期存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（見表1）：各年齡組的移植物體積維持率較低，組間比較無明顯差異，且10月齡組、18月齡組稍高于4周齡組。但結(jié)合組織病理學(xué)檢查，可見4周齡組的移植脂肪組織內(nèi)活的脂肪組織所占的面積明顯高于其他兩組，所得移植脂肪存活指數(shù)顯著高于其他兩組（P＜0.05）。

表1　三個(gè)年齡組的脂肪組織移植后第8周存活率比較（x±s）

圖5　新生脂肪細(xì)胞數(shù)量比較

圖6　移植后第8周組織學(xué)比較

因此，采用移植脂肪存活指數(shù)能更準(zhǔn)確的反應(yīng)移植物中脂肪組織的存活的情況，且年輕（4周齡）組的脂肪組織在移植后，遠(yuǎn)期的脂肪組織存活率明顯優(yōu)于中、老年組（10月齡、18月齡組）；而中、老年組間無明顯差異。

3　討論

自體顆粒脂肪移植的存活與多種因素相關(guān)，包括供區(qū)、受區(qū)情況，脂肪組織處理、手術(shù)操作等。對移植脂肪組織的轉(zhuǎn)歸，學(xué)者Kotaro Yoshimura［6］等經(jīng)過一系列研究提出了移植脂肪的三分層理論：最外層的存活區(qū)，中間的再生區(qū)和中心的壞死區(qū)。顆粒脂肪游離移植后早期由組織間滲液供養(yǎng)，在這種缺血環(huán)境下，移植脂肪組織退行性變，除最外層存活區(qū)外，大部分的成熟脂肪細(xì)胞出現(xiàn)融合、壞死，逐漸被巨噬細(xì)胞吞噬、被纖維結(jié)締組織替代。脂肪細(xì)胞的早期存活，排除受區(qū)因素外，與供體的脂肪細(xì)胞的耐缺氧能力、移植組織的血管再生、血流灌注恢復(fù)能力相關(guān)。自移植后第2周開始，在脂肪移植物的再生區(qū)內(nèi)，出現(xiàn)perilipin染色陽性的、單核或多核的小的圓形細(xì)胞，這些細(xì)胞是再生的前脂肪細(xì)胞。大量研究結(jié)果支持，在移植脂肪組織的重塑過程中，移植物內(nèi)的脂肪來源干細(xì)胞或前體細(xì)胞在缺氧條件下被激活，出現(xiàn)增殖、向脂肪細(xì)胞分化，并旁分泌多種細(xì)胞因子，如內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）等，促進(jìn)血管新生，與其他組織細(xì)胞共同參與組織的修復(fù)與重塑，因此，脂肪來源干細(xì)胞對移植脂肪的遠(yuǎn)期存活具有重要影響［7］。

在以上實(shí)驗(yàn)研究中，筆者發(fā)現(xiàn)供體年齡影響移植脂肪組織的存活率，年輕即4周齡大鼠的脂肪組織在移植后，在早期存活率、組織重塑及脂肪組織遠(yuǎn)期存活率方面均優(yōu)于中年（10月齡）或老年組（18月齡），而中、老年組間無明顯差異，且遠(yuǎn)期存活率不佳。其可能機(jī)制有：①4周齡大鼠的脂肪組織中，成熟脂肪細(xì)胞耐缺氧的能力較強(qiáng)；②4周齡大鼠脂肪移植物血管重建、血流灌注恢復(fù)的速度較快；③4周齡大鼠脂肪組織內(nèi)新生的脂肪細(xì)胞較多，參與到移植后組織的再生修復(fù)，能加快組織的重塑。有研究報(bào)道了年齡對人脂肪來源干細(xì)胞的影響［8］，對比研究了嬰兒、成年及老年供體來源的人脂肪來源干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的分離提取率，生長特征，及成骨分化能力，結(jié)果顯示嬰兒來源的人脂肪來源干細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)與其他組不同，端粒較長，增殖較快，旁分泌功能較強(qiáng)。也有實(shí)驗(yàn)研究表明［9-10］，年齡對脂肪來源干細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、增殖、成脂分化、旁分泌能力的存在影響，老年供體的細(xì)胞活性降低。因此，對于臨床上出現(xiàn)的、在標(biāo)準(zhǔn)的手術(shù)操作下仍出現(xiàn)移植脂肪存活不佳的中老年病例中，究其原因可能與脂肪組織供體的年齡相關(guān)。

對如何提高移植脂肪存活率，解決臨床應(yīng)用中存在的問題，目前的研究的熱點(diǎn)是通過添加生長因子堿性成纖維細(xì)胞因子（bFGF）［12］、如內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）［12-13］、富血小板血漿（PRP）［4］等促進(jìn)移植物早期血供，或通過脂肪來源干細(xì)胞或脂肪來源基質(zhì)血管成分輔助脂肪移植［7］，增加移植物內(nèi)脂肪來源干細(xì)胞的數(shù)量，促進(jìn)移植脂肪的再生，提高遠(yuǎn)期存活率。在明確年齡對移植脂肪組織存活率的影響后，可通過對年輕的脂肪組織或脂肪來源干細(xì)胞凍存，在中年后需要時(shí)進(jìn)行移植，或者對老年患者的脂肪組織或脂肪來源干細(xì)胞“活化”，以改善移植脂肪組織的存活情況。

本實(shí)驗(yàn)采用多普勒彩色診斷儀對移植后脂肪組織進(jìn)行評估，通過對移植物的性質(zhì)分析，可以監(jiān)測有無壞死、囊性變，鈣化等并發(fā)癥發(fā)生；通過超聲造影動(dòng)態(tài)顯示移植物血流灌注恢復(fù)的過程，對超聲造影圖像的量化分析，量化評估了移植后脂肪組織的血流灌注恢復(fù)情況；還可以通過超聲檢查測量移植物的體積。雖然因移植物形態(tài)不規(guī)則、多隧道分布，檢查者對移植物界限的判斷主觀性，探頭的角度、下壓的力度等都會(huì)影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。但在控制檢查條件的情況下，超聲檢查仍是臨床上對移植脂肪組織存活率評價(jià)的一種簡單、有效、可行的測量方法。

［1］Coleman SR.Structural fat grafting［J］.Aesthet Surg J，1998，18（5）：386-388.

［2］Illouz YG.Study of subcutaneous fat［J］.Aesthetic Plast Surg，1990，14（3）：165-177.

［3］Quinn R.Comparing rat's to human's age：how old is my rat in people years［J］，Nutrition，2005，21（6）：775-777.

［4］Nakamura S，Ishihara M，Takikawa M，et al.Platelet-rich plasma（PRP）promotes survival of fat-grafts in rats［J］.Ann Plast Surg，2010，65（1）：101-106.

［6］Kato H，Mineda K，Eto H，et al.Degeneration，regeneration，and cicatrization after fat grafting：dynamic total tissue remodeling during the first 3 months［J］.Plast Reconstr Surg，2014，133（3）：303e-313e.

［7］Yoshimura K，Sato K，Aoi N，et al.Cell-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation：supportive use of adiposederived stem/stromal cells［J］.Aesthetic Plast Surg，2008，32（1）：48-55.

［8］Wu W，Niklason L，Steinbacher D M.The effect of age on human adipose-derived stem cells［J］.Plast Reconstr Surg，2013，131（1）：27-37.

［9］Scruggs BA，Semon JA，Zhang X，et al.Age of the donor reduces the ability of human adipose-derived stem cells to alleviatesymptomsintheexperimentalautoimmune encephalomyelitis mouse model［J］.Stem Cells Transl Med，2013，2（10）：797-807.

［10］Efimenko A，StarostinaE，KalininaN，etal.Angiogenic properties of aged adipose derived mesenchymal stem cells after hypoxic conditioning［J］.J Transl Med，2011，9：10.

［11］易成剛.自體脂肪移植的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國美容醫(yī)學(xué)，2003，12（4）：429-432.

［12］彭智，賈振華，劉曉韜.微滲透泵持續(xù)恒量灌注血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子對大鼠脂肪移植體成活率的影響［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13（31）：6063-6066.

［13］梁杰，趙坤，羅少軍.重組人VEGF和前列腺素E1對移植脂肪早期血管生成的作用［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，4（11）：7-9.

編輯/張惠娟

The comparison study on the retention rates of adipose tissuses from different ages rats

YU Jing，MA Xiao-dong，XI Min，WU Yi-ping
（Department of Plastic Surgery，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，Hubei，China）Abstract：Objective To expore the effect of donor age on the retention of fat grafting in rat modle，so

age；fat grafting；retention；tissue remodeling；contrast-enhanced ultrasound（CEUS）

R622 R332

A

1008-6455（2015）18-0034-07as to supply evidence in clinical cases.MethodsFat grafts were obtained from young，middle-aged and aged（4 weeks，10 months，and 18 months old）female SD rats，and then injected into the back of a 10-week-old female SD rat.Ultrasonography and Contrast-enhanced ultrasound exam were taken on each fat grafts at 24h，48h，72h，96h，5d，1st week，2nd week，4th week and 8th week after operation，to record tissuse reperfusion dynamically，then samples were harvested and analyzed histologically for adipocyte viability，adipocyte regeneration，and fat grafting retention in different groups.Results Fat grafts from all ages underwent dynamic tissue remodeling after grafting，ischemic degeneration at early stage，then regeneration，approaching to normal adipose tissue finally.Fat grafts from 4-week-old SD rats showed signifiantly more vital adipocytes in 72h，larger survival zones at 1st week，and larger engraftment scores at 8th week，more new adipoctyes at 4th week，and more rapid reperfusion rate，respectively，than 10-month-old or 18-month-old SD rats（P＜0.05）.The discrepancy between 10-month-old and 18-month-old SD rats was not significant（P＞0.05）.Conclusion Fat grafts from young rats showed better adipocyte survival，regeneration，and final retention，than middle-aged and aged rats.Final fat grafting retention were similarly low in middle-aged and aged rats.

吳毅平，男，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師；E-mail：us_ypwu@hotmail.com

［5］Kato H，Araki J，K，et al.Normobaric hyperoxygenation enhances initial survival，regeneration，and final retention in fat grafting［J］.Plast Reconstr Surg，2014，134（5）：951-959.

2015-07-28

2015-09-09