雷洪恩許永德關(guān)瑞禮楊璧鋮李 猛惠 宇高喆珠辛鐘成**

1.北京大學(xué)第一醫(yī)院男科中心（北京 100034）;

2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院泌尿外科; 3. 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科

·論 著·

旋磁在人前列腺增生BPH-1細(xì)胞增殖和凋亡中的作用與機制探討*

雷洪恩1許永德1關(guān)瑞禮1楊璧鋮1李 猛2惠 宇3高喆珠1辛鐘成1**

1.北京大學(xué)第一醫(yī)院男科中心（北京 100034）;

2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院泌尿外科; 3. 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科

目的 研究旋轉(zhuǎn)磁場在人前列腺增生BPH-1細(xì)胞增殖和凋亡中的作用，并就其影響機制作相關(guān)探討。方法 設(shè)置空白對照（NC）組和旋轉(zhuǎn)磁場處理（MF）組，不同時間劑量MF組使用CKJ-II（QLX-II）型高場強旋磁治療儀分別處理1 min、5 min、10 min和20 min。然后利用CCK-8實驗、細(xì)胞劃痕及免疫熒光染色檢測其對細(xì)胞增殖遷移影響，利用Annexin V-PE/ 7-AAD雙染流式細(xì)胞術(shù)法檢測其對細(xì)胞凋亡影響，利用蛋白印跡實驗和免疫熒光檢測其對細(xì)胞凋亡相關(guān)信號通路蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 與NC組相比，MF組BPH-1細(xì)胞經(jīng)旋轉(zhuǎn)磁場處理后，細(xì)胞增殖計數(shù)和細(xì)胞遷移距離明顯降低，細(xì)胞增殖核抗原Ki67表達(dá)明顯降低，細(xì)胞凋亡比例明顯增加，并且與細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化水平明顯增加及Caspase-3活化蛋白明顯增加有關(guān)。結(jié)論 旋轉(zhuǎn)磁場可使BPH-1細(xì)胞發(fā)生增殖遷移減弱和凋亡增加，可能與細(xì)胞中細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原Ki67表達(dá)減少和細(xì)胞凋亡相關(guān)的p38 MAPK/Caspase-3凋亡分子信號通路激活有關(guān)。

前列腺增生; 旋轉(zhuǎn)磁場; 細(xì)胞增殖; 細(xì)胞凋亡

良性前列腺增生癥（benign prostatic hyperplasia, BPH）為泌尿外科常見疾病，其患病率隨著年齡的增加而增加，該疾病在40～49歲男性中患病率為25%，而在70～79歲男性中患病率高達(dá)80%，臨床上主要表現(xiàn)為下尿路刺激癥狀，嚴(yán)重危害中老年人的生活質(zhì)量[1,2]。目前BPH的治療方法主要有改變生活習(xí)慣和選擇性α-受體阻滯劑、5α-還原酶抑制劑等口服藥物治療，口服藥物治療效果不佳的重度BPH患者、反復(fù)泌尿系感染合并結(jié)石癥、尿潴留、輸尿管擴張腎盂積水和腎功能損傷患者需要手術(shù)治療[1]。但已有的上述BPH治療方法還存在癥狀改善不徹底、藥物副作用、手術(shù)耐受性和術(shù)后并發(fā)癥等問題。

旋轉(zhuǎn)磁場（gyromagnetic field）屬于物理療法的一種，可通過磁場與人體的相互作用而達(dá)到治療疾病和調(diào)節(jié)生理病理狀態(tài)的作用。研究表明，旋轉(zhuǎn)磁場可以通過洛倫茲力、磁力、渦電流和熱效應(yīng)等作用于生物體，達(dá)到改善細(xì)胞代謝、增加細(xì)胞膜的通透性等效果[3]。有研究報道，磁療具有緩解肌肉痙攣和降低血壓以及抑制某些癌的生長與轉(zhuǎn)移等功能[4,5]，近年來磁療這一非侵入治療方式已經(jīng)應(yīng)用至眼科、神經(jīng)疾病、口腔、心臟病和骨關(guān)節(jié)炎等疾病中[6]，并且臨床研究及動物模型研究中也已經(jīng)有磁療用于治療BPH的相關(guān)報道[7,8]。我們前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)CKJ-Ⅱ（QLX-Ⅱ）型高場強旋磁治療儀可顯著改善BPH患者的下尿路刺激癥狀，但是其作用機制目前還不清楚。

本研究采用體外培養(yǎng)的人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞，觀察其經(jīng)旋轉(zhuǎn)磁場處理后細(xì)胞增殖遷移和凋亡及相關(guān)分子信號通路的變化，探討旋轉(zhuǎn)磁場治療BPH的可能性及其相關(guān)作用機制。

材料與方法

一、材料

（一）細(xì)胞

人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞，購買自國家實驗細(xì)胞資源共享平臺。

（二）試劑

RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、磷酸鹽緩沖液（PBS）、0.25%胰酶消化液購買自美國Hyclone公司，CCK-8細(xì)胞計數(shù)試劑盒購買自DOJINDO東仁化學(xué)科技（上海）有限公司，Annexin V-PE/ 7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒和蛋白提取試劑盒購買自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，Anti-Ki67抗體購買自美國Abcam公司，Anti-P-p38 MAPK抗體、Anti-p38 MAPK抗體和Anti-Cleaved Caspase-3抗體購買自美國Cell Signaling Technology（CST）公司。

（三）儀器

CKJ-Ⅱ（QLX-Ⅱ）型高場強旋磁治療儀購買自北京旋磁醫(yī)療設(shè)備有限公司，Mutiskan MK3型酶標(biāo)儀購買自美國Thermo公司，DMI 6000 B型熒光顯微鏡購買自德國Leica公司，F(xiàn)ACSCalibur型流式細(xì)胞儀購買自美國BD公司，C-DiGit?型掃膜儀購買自英國LICOR公司。

二、方法

（一）細(xì)胞培養(yǎng)

BPH-1細(xì)胞培養(yǎng)條件為37℃和5% CO2的飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，使用含10%胎牛血清和1%L-谷氨酰胺的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞匯合率達(dá)80%時，使用0.25%胰酶消化傳代，每周傳代3次，傳代比例為1:3，直至細(xì)胞數(shù)量達(dá)到實驗要求。細(xì)胞凍存時使用含10%二甲基亞砜（DMSO）、20%胎牛血清和70% RPMI-1640培養(yǎng)基的凍存液，慢速逐級降溫至液氮中保存。

（二）旋轉(zhuǎn)磁場處理細(xì)胞方法

CKJ-Ⅱ（QLX-Ⅱ）型高場強旋磁治療儀處于工作狀態(tài)時，旋轉(zhuǎn)時上磁極表面的磁場強度為280 mT（2800 Gs），下磁極的表面的磁場強度為150 mT（1500 Gs），上下磁極的間距為32 cm；其實驗器皿放置處磁場強度隨時間變化而變化，且磁場強度按正弦函數(shù)分布，最大值為300 mT（3000 Gs），頻率為6 Hz。根據(jù)旋磁治療儀使用說明書，旋轉(zhuǎn)磁場處理細(xì)胞時，人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞培養(yǎng)皿置于CKJ-II（QLX-II）型高場強旋磁治療儀的上述實驗器皿放置處。

（三）細(xì)胞增殖計數(shù)實驗

BPH-1細(xì)胞匯合率達(dá)80%時，使用0.25%胰酶消化后計數(shù)，接種至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL培養(yǎng)基，設(shè)3個平行復(fù)孔。實驗設(shè)置空白對照（NC）組和旋轉(zhuǎn)磁場處理（MF）組。等待細(xì)胞貼壁后，將實驗組96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于CKJ-Ⅱ（QLX-Ⅱ）型高場強旋磁治療儀中分別處理1 min、5 min、10 min和20 min，處理方法如上述所述，每天1次，連續(xù)處理2d；當(dāng)比較NC組和MF 10 min組生長曲線時，處理方法如上述所述，每天1次，連續(xù)處理4d。細(xì)胞計數(shù)時，向96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每孔中加入10 μL的CCK-8溶液，將培養(yǎng)板在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1 h，用Mutiskan MK3型酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度，樣品中活細(xì)胞數(shù)量與其吸光度大小成正比。

（四）細(xì)胞劃痕實驗

將BPH-1細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞貼壁后，將實驗組細(xì)胞置于CKJ-Ⅱ（QLX-Ⅱ）型高場強旋磁治療儀中按上述方法進(jìn)行處理，每天1次，連續(xù)處理2d。待細(xì)胞匯合率達(dá)90%時，使用滅菌的200 μL移液器槍頭垂直于孔背面的橫線標(biāo)記劃線，每組3個平行復(fù)孔。劃線后使用PBS清洗3次以去除細(xì)胞殘骸和碎片，后換用不含胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。于劃線0 h和24h分別將細(xì)胞行0.2%結(jié)晶紫染色，經(jīng)DMI 6000 B型熒光顯微鏡行明場觀察并拍片后，使用美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）研發(fā)的ImageJ 1.47u軟件統(tǒng)計并分析細(xì)胞遷移距離。

（五）細(xì)胞爬片免疫熒光實驗

將已消毒的24 mm×24 mm蓋玻片置于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，按2×104/mL的細(xì)胞密度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，設(shè)置NC組和MF 10 min組。細(xì)胞貼壁后經(jīng)旋轉(zhuǎn)磁場處理，方法如上述所述，每天1次，連續(xù)處理2d。行免疫熒光時，細(xì)胞爬片經(jīng)PBS清洗、甲醛固定、0.5% Triton X-100通透液孵育、5%正常二抗血清封閉和一抗孵育4℃過夜，經(jīng)熒光二抗和DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）染色后，至DMI 6000 B型熒光顯微鏡下觀察并拍片。

（六）細(xì)胞凋亡流式檢測

將細(xì)胞按2×104/mL的密度將細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，設(shè)置NC組和MF不同劑量組。等待細(xì)胞貼壁后，將實驗組6孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于旋轉(zhuǎn)磁場中分別處理1 min、5 min、10 min和20 min，處理方法如上述所述，1次/d，連續(xù)處理2d。細(xì)胞凋亡流式檢測使用南京凱基生物科技發(fā)展有限公司的Annexin V-PE/ 7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，按其操作說明書收集細(xì)胞孵育染液后，行FACSCalibur型流式細(xì)胞儀上機檢測。

（七）蛋白印跡實驗

使用蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞蛋白后，經(jīng)變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳（SDS-PAGE）后，將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，后經(jīng)5%脫脂奶粉溶液封閉和一抗孵育4℃過夜，后經(jīng)HRP標(biāo)記的二抗孵育后，使用膜化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果，曝光經(jīng)C-DiGit?型掃膜儀掃描。目的蛋白條帶及內(nèi)參蛋白條帶的灰度值使用NIH研發(fā)的ImageJ 1.47u軟件統(tǒng)計并分析。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

所有資料均采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。各組間比較采用單因素方差分析，其中方差齊者用LSD法，方差不齊者用Dunnett's檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、旋轉(zhuǎn)磁場可抑制人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞的增殖和遷移

與空白對照（NC）組相比，旋轉(zhuǎn)磁場處理（MF）組人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞行CCK-8細(xì)胞計數(shù)實驗時細(xì)胞數(shù)目降低。其中MF 5 min組、MF 10 min組和MF 20 min組BPH-1細(xì)胞增殖較NC組細(xì)胞增殖明顯降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖1A），并且MF 10 min組增殖抑制效果最好，故后續(xù)生長曲線觀察和細(xì)胞免疫熒光等實驗中選取MF 10 min組作為實驗處理組。此外，BPH-1細(xì)胞經(jīng)上述旋轉(zhuǎn)磁場處理，連續(xù)4d行生長曲線觀察，發(fā)現(xiàn)MF 10 min組BPH-1細(xì)胞增殖較NC組細(xì)胞增殖在第2、3和4天明顯降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖1B）。

細(xì)胞劃痕檢測細(xì)胞遷移試驗結(jié)果顯示，MF 10 min組BPH-1細(xì)胞經(jīng)上述旋轉(zhuǎn)磁場處理后，細(xì)胞遷移能力較NC組明顯降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖1C和圖1D）。

圖1 旋轉(zhuǎn)磁場對人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞增殖遷移的影響

二、旋轉(zhuǎn)磁場可抑制人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞核抗原Ki67的表達(dá)

旋轉(zhuǎn)磁場MF 10 min組BPH-1細(xì)胞經(jīng)上述方法處理后，行細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原Ki67免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)MF 10 min組細(xì)胞較NC組細(xì)胞Ki67陽性率明顯降低且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖2），以上結(jié)果證明了BPH-1細(xì)胞經(jīng)旋轉(zhuǎn)磁場處理后增殖明顯減弱，與細(xì)胞Ki67表達(dá)受抑制有關(guān)。

三、旋轉(zhuǎn)磁場可促進(jìn)人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞的凋亡

與NC組相比，BPH-1細(xì)胞經(jīng)上述方法處理后，MF 10 min組和MF 20 min組BPH-1細(xì)胞總凋亡率明顯增加且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖3），其中細(xì)胞凋亡率增加以晚期細(xì)胞凋亡率增加為主。

圖2 旋轉(zhuǎn)磁場對人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞Ki67陽性率的影響

圖3 旋轉(zhuǎn)磁場對人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞凋亡的影響

四、旋轉(zhuǎn)磁場促進(jìn)人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞凋亡的作用與p38 MAPK/Caspase-3細(xì)胞凋亡信號通路的激活有關(guān)

將細(xì)胞蛋白提取行蛋白印跡實驗時，發(fā)現(xiàn)MF 5 min、MF 10 min組和MF 20 min組BPH-1細(xì)胞蛋白中p38 MAPK磷酸化水平較NC組明顯升高具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖4A和圖4B）；另外，MF 10 min組BPH-1細(xì)胞經(jīng)上述方法處理后，行凋亡相關(guān)抗原Cleaved caspase-3免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)MF 10 min組細(xì)胞較NC組細(xì)胞Cleaved caspase-3陽性率明顯增加且具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖4C和圖4D）。以上結(jié)果提示BPH-1細(xì)胞經(jīng)旋轉(zhuǎn)磁場處理后凋亡增加與細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK/Caspase-3細(xì)胞凋亡信號通路激活有關(guān)。

圖4 旋轉(zhuǎn)磁場對人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞中p38 MAPK/Caspase-3細(xì)胞凋亡相關(guān)信號通路的影響

討 論

BPH發(fā)生的具體病理生理學(xué)機制仍有待于進(jìn)一步的研究，目前已知其發(fā)生與體內(nèi)睪酮和雙氫睪酮存在有關(guān)，其它危險致病因素有體內(nèi)高水平的脫氫表雄酮和雌二醇、胰島素樣生長因子和C反應(yīng)蛋白等[9,10]。此外，BPH的發(fā)生還與種族、肥胖、糖尿病、飲酒和缺乏鍛煉有關(guān)[11,12]。前列腺發(fā)生BPH病理改變時，其腺體移行區(qū)平滑肌細(xì)胞和上皮細(xì)胞發(fā)生增生，進(jìn)而引起下尿路刺激癥狀等臨床表現(xiàn)。人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞來源于BPH病人前列腺上皮細(xì)胞，其細(xì)胞增殖能力與BPH的發(fā)生有密切的病理生理學(xué)基礎(chǔ)關(guān)聯(lián)。本研究采用體外培養(yǎng)的人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞作為實驗研究對象，為探討B(tài)PH發(fā)生的分子機制及尋找潛在治療靶點提供了一個良好的病理生理學(xué)模型。

據(jù)文獻(xiàn)研究報道，目前磁療已經(jīng)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)疾病[13]、心臟疾病[14]和骨關(guān)節(jié)疾病[15,16]等，但其具體作用機制還不甚清楚。磁療中應(yīng)用的磁場可分為靜態(tài)磁場和動態(tài)磁場兩種，且不同磁場因應(yīng)用方法或產(chǎn)生方式的不同而具有不同的物理學(xué)參數(shù)，磁療的具體臨床應(yīng)用方法有很多種，如磁針法、磁電法、直流電磁療、旋轉(zhuǎn)磁療法、交變磁療法等[17]。目前，關(guān)于磁療過程中物理能量轉(zhuǎn)化為生物學(xué)效應(yīng)的具體作用機制研究還不是很清楚。有研究認(rèn)為，磁場可以通過產(chǎn)生洛倫茲力、磁力、渦電流和熱效應(yīng)等作用于生物體，從而進(jìn)一步產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)[3]。動態(tài)磁場的生物學(xué)效應(yīng)可分為微電流和熱效應(yīng)，本研究中應(yīng)用的旋轉(zhuǎn)磁場屬于動態(tài)磁場的一種。當(dāng)旋轉(zhuǎn)磁場作用于BPH-1細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)的微電流和熱效應(yīng)的變化可能進(jìn)一步影響相關(guān)信號通路分子表達(dá)的變化。而絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路是細(xì)胞應(yīng)對外界刺激的重要調(diào)節(jié)體，所有的真核細(xì)胞都能表達(dá)MAPK，其調(diào)節(jié)著細(xì)胞生長、分化和凋亡等重要過程[18]。其中，p38 MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞凋亡、炎癥和細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用[19]。含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）是一組存在于細(xì)胞質(zhì)中的蛋白酶，為細(xì)胞凋亡的重要指標(biāo)，其活化后在細(xì)胞凋亡執(zhí)行階段可切割某些蛋白，使細(xì)胞發(fā)生程序性死亡（凋亡）[20]。p38 MAPK磷酸化可介導(dǎo)Caspase-3發(fā)生活化，為細(xì)胞內(nèi)重要凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)信號通路，可使細(xì)胞內(nèi)Caspase發(fā)生層聯(lián)激活，引起細(xì)胞不可逆地發(fā)生凋亡[21]。在本研究中，旋轉(zhuǎn)磁場引起的細(xì)胞內(nèi)微電流和熱效應(yīng)的變化可被認(rèn)作為一種應(yīng)激源，而p38 MAPK作為細(xì)胞中應(yīng)對外界刺激的重要調(diào)節(jié)分子，對此刺激作出應(yīng)有的調(diào)節(jié)反應(yīng)。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，旋轉(zhuǎn)磁場可促進(jìn)BPH-1細(xì)胞中p38 MAPK磷酸化水平增加及Caspase-3發(fā)生活化等變化，證明BPH-1細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)磁場作用下發(fā)生增殖與遷移減弱和凋亡增加等變化與細(xì)胞中p38 MAPK/Caspase-3凋亡分子信號通路激活有關(guān)。簡而言之，人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)磁場作用下，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原Ki67表達(dá)受到抑制，而細(xì)胞凋亡相關(guān)的p38 MAPK/ Caspase-3信號通路激活，且BPH-1細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞增殖與遷移減弱和凋亡增加等現(xiàn)象，證明旋轉(zhuǎn)磁場具有治療BPH的潛在可能性。

目前，磁療這一非侵入治療方式已經(jīng)在治療BPH的臨床研究中有所應(yīng)用，但未就其具體分子機制展開討論。2011年，Giannakopoulos等利用脈沖磁場治療年齡在68～78歲間的BPH病人，并同時將其治療效果與服用α-受體阻滯劑藥物治療的病人作了對照[8]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)脈沖磁場連續(xù)治療2周，每周治療5次，每次治療30 min后，10例BPH病人的國際前列腺癥狀評分（IPSS）、超聲測量前列腺體積、尿殘余量和平均尿流率等指標(biāo)均較治療前明顯改善，而服用α-受體阻滯劑藥物治療對照組的10例病人較治療前只有IPSS指標(biāo)有明顯改善。2014年，Leoci等利用前列腺增生的犬作為模型，研究脈沖磁場對BPH的治療作用[7]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)脈沖磁場連續(xù)治療3周，每天治療2次，每次治療5 min后，20只實驗犬的前列腺體積平均降低57%，而且磁場對精子數(shù)量、睪酮水平和性欲沒有不利影響。這些臨床及臨床前研究為磁療將來應(yīng)用于BPH治療提供了證據(jù)支持。

綜上所述，旋轉(zhuǎn)磁場可使人前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1細(xì)胞發(fā)生增殖遷移減弱和凋亡增加等變化，且此變化與細(xì)胞中細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原Ki67表達(dá)減少和細(xì)胞凋亡相關(guān)的p38 MAPK/Caspase-3凋亡分子信號通路激活有關(guān)。旋轉(zhuǎn)磁場治療將來可能成為一種潛在的非侵入式臨床治療BPH的新方法。

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（2015-04-15收稿）

The effects of gyromagnetic feld on cell proliferation and apoptosis in human benign prostatic hyperplasia epithelial cell line BPH-1 and its mechanism＊

Lei Hongen1, Xu Yongde1, Guan Ruili1, Yang Bicheng1, Li Meng2, Hui Yu3, Gao Zhezhu1, Xin Zhongcheng1**
1. Andrology Center, Peking University First Hospital, Peking University, Beijing 100034, China; 2. Department of Urology, General Hospital of Ningxia Medical University; 3. Department of Urology, the First Affliated Hospital of Soochow University Corresponding Author: Xin Zhongcheng, E-mail: xinzc@bjmu.edu.cn

Objective To investigate the effects of gyromagnetic field (MF) on cell proliferation, migration, and apoptosis in human benign prostatic hyperplasia epithelial cell line BPH-1 and explore its related mechanism. Methods Cells in the normal control (NC) group and the MF group were exposed in MF for 1 min, 5 min, 10 min, and 20 min. Cell proliferation was analyzed by cell counting kit-8 and immunofuorescence, cell migration was analyzed by wound healing assay, cell apoptosis was analyzed by FACS double staining with Annexin V-PE/ 7-AAD, and cell apoptosis signaling pathway was analyzed by western blot and immunofuorescence. Results Compared with cells in the NC group, the cells in the MF group showed a signifcant decrease in cell number, migration distance, Ki67 expression, as well as a signifcant increase in apoptosis rate, levels of p38 MAPK phosphorylation and cleaved Caspase-3 expression. Conclusion In exposure to MF, BPH-1 cells' proliferation and migration were attenuated and cell apoptosis was increased, which may related to the down-regulation of Ki67 and activation of p38 MAPK/Caspase-3 signaling pathway.

prostatic hyperplasia; gyromagnetic feld; cell Proliferation; apoptosis

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.06.001

R 697.32

資助: 高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金博導(dǎo)類（編號：20120001110021）**

, E-mail: xinzc@bjmu.edu.cn