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        金釵石斛干鮮品的質量比較研究*

        2015-08-25 06:54:54朱南南孫志蓉楊春寧程麗麗
        天津中醫(yī)藥 2015年11期
        關鍵詞:干品金釵鮮品

        朱南南,孫志蓉,楊春寧,程麗麗,周 楊,楊 薇

        金釵石斛干鮮品的質量比較研究*

        朱南南,孫志蓉,楊春寧,程麗麗,周楊,楊薇

        (北京中醫(yī)藥大學中藥學院,北京100102)

        [目的]對金釵石斛干鮮品的化學成分及抗氧化活性進行比較研究,了解兩者的差別,為金釵石斛干鮮品的區(qū)別應用提供依據(jù)。[方法]采用氣相色譜法和紫外-可見分光光度法進行成分含量測定比較。采用比色法及試劑盒測定干鮮品對羥自由基的清除作用及抗氧化能力。利用傅利葉變換紅外光譜法對干鮮品粉末樣品的全息化學特征譜進行比較。[結果]金釵石斛鮮品的總生物堿和多糖含量及其對羥自由基的清除率和抗氧化能力均顯著高于干品。金釵石斛干品與鮮品的紅外譜圖相似,在1 630 cm-1、1 506 cm-1、1 243 cm-1處,貴州赤水的官渡、長期與紅花3個基地的金釵石斛鮮品峰強均大于干品,各個產(chǎn)地金釵石斛鮮品的圖譜與多糖對照品圖譜的相關系數(shù)均大于干品。[結論]金釵石斛干品與鮮品在化學成分及抗氧化活性方面存在著一定的差異。

        金釵石斛;干鮮品;化學成分;抗氧化活性

        DOI:10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.13

        中藥在臨床應用上常有生品、熟品及鮮品之分,現(xiàn)代研究表明,多種中藥的干品和鮮品在化學成分和藥理作用上存在差異[1-4],其用途也不同。金釵石斛為蘭科石斛屬植物金釵石斛(Dendrobium nobile Lindl.)的新鮮或干燥莖,為歷版藥典收載的石斛主要品種。鮮石斛性寒,對熱證的療效優(yōu)于石斛干品[5]。隨著石斛資源量的恢復及人們保健意識的增強,越來越多的人開始使用石斛鮮品進行治療與保健,石斛鮮條、鮮榨汁、凍干粉受到青睞,但目前尚未見石斛干鮮品質量比較方面的研究報道。冷凍干燥方法對物料原有結構、形狀和成分的破壞程度最小,能較好地保持鮮品的品質[6],是目前中藥鮮品處理和保存中常采用的方法。文章采用烘干法和冷凍干燥法處理金釵石斛新鮮莖條獲得干品和鮮品,對兩者的化學成分含量進行測定比較,同時對兩者的抗氧化能力及紅外譜圖進行比較分析,從多個層面揭示金釵石斛干品與鮮品之間存在的差異,為金釵石斛干鮮品的區(qū)別應用提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1實驗材料

        1.1.1樣品來源金釵石斛的2年生新鮮莖條于2013年3月采自道地產(chǎn)區(qū)貴州赤水鴨嶺、官渡、長期、紅花4個規(guī)范化生產(chǎn)基地,經(jīng)北京中醫(yī)藥大學孫志蓉副教授鑒定為金釵石斛(Dendrobium nobile Lindl.)。鮮品為新采摘鮮莖經(jīng)冷凍干燥(-60℃、1 pa下預凍7 h,干燥10 h)后粉碎處理得到。干品為同批采摘的鮮莖經(jīng)55℃鼓風烘干,分別粉碎,過60目篩,裝入塑料封口袋,置于干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.1.2儀器與試劑LGJ-12冷凍干燥機(松源華興公司);METTLER-AE240型1/100000電子分析天平(瑞士梅特勒公司);U-3010紫外-可見分光光度計(日本);安捷倫7890A型氣相色譜儀,安捷倫7683B自動進樣器(美國安捷倫公司);Spectrum GX FTIR紅外光譜儀(美國Perkin Elmer),DTGS檢測器;Epoch酶標儀(美國BioTek)。總抗氧化(TAC)試劑盒(Bioassay,DTAC-048),溴化鉀(KBr)純度為99.9%;無水葡萄糖(批號110833-201205)、石斛堿(批號111876-201102)購自中國藥品生物制品檢定所;乙醇、苯酚、濃硫酸均為分析純(北京化工廠)。金釵石斛粗多糖對照品為實驗室自制(熱回流提取,濾液烘干打粉)。

        1.2實驗方法

        1.2.1石斛堿含量測定按照《中國藥典》2010年版一部石斛項下的金釵石斛含量測定方法進行,每份樣品重復測定3次。

        1.2.2總生物堿、多糖含量測定總生物堿、多糖的含量測定參照文獻[7]方法進行,多糖含量為相對粗多糖含量,每份樣品重復測定3次。

        1.2.3抗氧化活性測定1)樣品制備:精密稱取1 g金釵石斛(干品與鮮品)粉末,加50 mL水,浸泡30 min。加熱回流提取1 h,抽濾?;厥辗勰?,加30 mL水進行2次回流提取30 min,抽濾。合并兩次濾液,定容至25 mL容量瓶內(nèi)(生藥濃度為40 mg/mL),置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?)對羥自由基清除率的測定:參考郭紅英[8]的方法,稍作改變。硫酸亞鐵與雙氧水混合產(chǎn)生羥基自由基,它能夠氧化水楊酸,得到的產(chǎn)物在510 nm處會有吸光度,吸光度越大,證明羥基自由基越多,樣品抗氧化能力越強,則產(chǎn)生的羥基自由基越少,吸光度則越少。在離心管中依次加入2 mL的6 mmol/L的硫酸亞鐵溶液,2 mL的2.4 mmol/L的雙氧水(H2O2)溶液,不同濃度的樣品溶液2 mL(將上述制備好的樣品溶液稀釋至生藥濃度為30 mg/mL),混勻,靜置10 min,再加入2 mL的6 mmol/L水楊酸溶液,混合均勻,37℃水浴0.5 h,離心后取上清液在510 nm下測定。空白組用蒸餾水代替樣品溶液,對照組用蒸餾水代替水楊酸。清除率(%)計算公式:羥基清除率(%)=[A空白-(A樣品-A對照)]/A空白×100%。3)TAC的測定:將上述制備好的樣品溶液稀釋至生藥濃度為20 mg/mL,采用總抗氧化試劑盒(DTAC-048)測定。

        1.2.4紅外光譜測定采用溴化鉀壓片法,對壓片進行掃描,獲得樣品的紅外譜圖。掃描條件:光譜測量范圍(400~4 000)cm-1,光譜分辨率為4 cm-1,掃描次數(shù)為16次,鄰苯二胺(OPD)速度為0.2/(cm·s),掃描時實時扣除水和二氧化碳(CO2)的干擾。采用Perkin-Elmer公司的SpectrumV6.3.5操作軟件,對樣品進行數(shù)據(jù)采集和圖譜預處理,預處理過程包括基線校正和比對。

        1.2.5統(tǒng)計學處理采用SPSS 20.0進行統(tǒng)計學分析,計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,組間比較采用方差分析,相關性分析采用Pearson相關系數(shù),P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        表1 不同基地金釵石斛干鮮品中石斛堿、總生物堿、多糖含量比較(x±s)Tab.1  Comparison of the contents of dendrobine,total alkaloids and polysaccharide of fresh and driedDendrobium nobileLindl.(x±s)%

        2 結果與分析

        2.1化學成分含量比較由表1可見,4個基地金釵石斛干品與鮮品的多糖含量之間的差異有顯著性(P<0.01),鮮品的多糖含量(7.31%)高于干品(5.773%),其中官渡的金釵石斛多糖含量較高。金釵石斛干品與鮮品的總生物堿含量差異有顯著性(P<0.05),而石斛堿含量差異無顯著性(P>0.05)。

        2.2抗氧化活性比較由表2可見,4個基地金釵石斛干品與鮮品對羥基清除率及抗氧化能力之間均具有顯著性差異(P<0.05),而各基地鮮品對羥基的清除率及抗氧化能力均明顯高于干品。

        表2 金釵石斛干品與鮮品的抗氧化能力Tab.2 Antioxidative activities of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

        2.3紅外譜圖比較分析貴州赤水4個基地金釵石斛干品與鮮品的一維紅外疊加譜圖如下圖所示(圖1~5)。由圖1可見,3 400 cm-1為O-H伸縮振動吸收峰,2 927 cm-1為亞甲基C-H反對稱伸縮振動吸收峰;1 739 cm-1處為酯羰基C=O伸縮振動吸收峰;1 630 cm-1處可能同時包含芳香環(huán)骨架伸縮振動吸收以及共軛羰基C=O伸縮振動吸收峰;1 506 cm-1為芳香環(huán)骨架伸縮振動吸收峰;1 461 cm-1附近的吸收峰可能包括多種成分,如芳香環(huán)骨架伸縮振動和CH彎曲振動;1 373 cm-1是C-H彎曲振動吸收峰;1 243、1 155、1 077、1 036 cm-1處為各類C-O的伸縮振動峰;在950 cm-1以下,為糖環(huán)骨架振動吸收等多個指紋特征峰[9]。以上各種振動吸收峰也與已有金釵石斛中所含的主要成分為生物堿、多糖、酚類、聯(lián)芐類、菲類、芴酮類等研究結果相一致[10-11]。

        各產(chǎn)地金釵石斛干品與鮮品的一維紅外譜圖在整體上比較相似(圖2~5灰線為鮮品,黑線為干品),但在一些細節(jié)處還是存在差異的。在1 630 cm-1附近,長期和官渡的金釵石斛鮮品峰強均大于干品,而紅花和鴨嶺則相反;在(1 500~1 300)cm-1范圍內(nèi),長期的金釵石斛鮮品峰強均大于干品,而官渡則相反,紅花和鴨嶺的干鮮品差異較??;在1 154 cm-1處,長期、紅花與鴨嶺3個基地的金釵石斛鮮品峰強均大于干品。

        圖1 長期基地金釵石斛干品的一維紅外譜圖Fig.11D-IR of dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

        圖2 長期基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.2Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

        圖3 官渡基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.3Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Guandu plantation base

        圖4 紅花基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.4Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Honghua plantation base

        圖5 鴨嶺基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.5Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Yaling plantation

        表3 金釵石斛干鮮品與金釵石斛多糖對照品紅外光譜相似度分析Tab.3 Infrared spectrum similarity analysis of polysaccharide reference spectrum and fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

        對于純化合物來說,只有結構一樣的分子才可能具有相同的紅外光譜;結構越相似的分子,其紅外光譜也越相似。相關系數(shù)可反映樣品所含成分的相對含量高低[12],采用紅外相關系數(shù)法對不同產(chǎn)地金釵石斛干鮮品與粗多糖的紅外光譜進行相關系數(shù)比對,結果與特征峰強度呈正相關,結果見表3。鮮品中相關系數(shù)均大于干品相關系數(shù),表明金釵石斛鮮品比干品多糖含量高。

        3 討論

        金釵石斛干品與鮮品的粉末色澤存在差異,干品呈黃色,鮮品呈青綠色。這與物料干燥的溫度有關,干燥溫度越高,樣品的褐變情況就越嚴重。對道地產(chǎn)區(qū)貴州赤水4個基地的金釵石斛干品和鮮品的石斛堿、總生物堿、多糖含量進行比較,發(fā)現(xiàn)不同基地金釵石斛干品與鮮品的石斛堿含量各有高低,但經(jīng)過配對t檢驗處理,發(fā)現(xiàn)整體上差異不顯著,而錢桂敏等[13]采用冷凍干燥法將金釵石斛新鮮莖脫水后,與采用烘干法獲得的樣品做比較,所得鮮品石斛堿含量比干品高0.022%。鑒于測定的樣品量有限,筆者認為這方面還需進一步研究確定。另外,本實驗中測得的總生物堿含量數(shù)值普遍低于石斛堿含量,分析原因可能是由于石斛堿含量由氣相色譜法測得,精確性高,而測定總生物堿含量的溴甲酚綠酸性染料比色法雖然為目前常用的方法[14-15],但其操作步驟繁瑣,實驗誤差較大,因此今后還需尋找更精確的金釵石斛總生物堿含量測定方法。紅外譜圖研究結果表明,金釵石斛鮮品中所含的芳香類物質較干品多,這些物質可能是一些揮發(fā)油成分或者是芳香類生物堿化合物、黃酮類、酚類等成分,產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是金釵石斛鮮莖在烘干過程中由于受熱,芳香類物質不穩(wěn)定而分解損失;相關系數(shù)結果表明不同產(chǎn)地金釵石斛鮮品的多糖含量均大于干品??寡趸钚苑矫?,金釵石斛鮮品對羥基自由基的清除率和總抗氧化能力均高于干品。由文獻[16-17]得知,植物色素多為黃酮類及酚類成分,具有很好的抗氧化作用,金釵石斛干品與鮮品具有明顯的色澤差異,推測可能鮮品較好地保存了色素,起到了一定的抗氧化作用。

        石斛在古代常會使用鮮藥,清熱療效頗佳。然而由于儲存、攜帶不便,現(xiàn)代鮮藥應用較少,且目前對中藥鮮藥也缺少深入系統(tǒng)的研究。但科學技術的發(fā)展以及中藥材大規(guī)模的人工種植,都為鮮藥開發(fā)奠定了基礎。鮮藥的優(yōu)質性不僅僅是某些活性成分含量的變化,而是同加工、炮制一樣,可能改變藥性,最終影響療效。文章研究結果表明,金釵石斛干鮮品的化學成分及抗氧化能力方面均存在差異,今后還應對金釵石斛干鮮品的藥效進行深入研究,為金釵石斛干鮮品的正確使用提供理論依據(jù)。

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        (本文編輯:高杉,滕曉東)

        Study on the quality of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

        ZHU Nan-nan,SUN Zhi-rong,YANG Chun-ning,CHENG Li-li,YANG Wei
        (Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100102,China)

        [Objective]To compare the component of chemical components and antioxidative activities of fresh and dried Denelrobium nobile Lindl.,understand the difference of them,and provide reference for reasonable application of Denelrobium nobile Lindl.[Methods]GC-MS and UV spectrophotometry was carried out for chemical components analysis;the salicylic acid colorimetry and kit assay were used for determination of the scavenging effects on hydroxyl radical and TAC,respectively;the Fingerprint Features of Denelrobium nobile Lindl.were studied by Fourier Transform Infrared Spectroscopy(FT-IR).[Results]We found the content of total alkaloids,polysaccharide and hydroxyl radical and total antioxidant capacity in fresh Denelrobium nobile Lindl were significantly higher than dried one. There were some similarity infrared spectrum features for both Denelrobium nobile Lindl.At1 630 cm-1,1 506 cm-1,and 1 243 cm-1,the peak height of fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried Denelrobium nobile Lindl.in Guandu,Changqi,Honghua plantation base of Guizhou province.The infrared correlation coefficient with polysaccharide reference spectrum of the fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried one in all origins.[Conclusion]There is a certain difference in the component of chemical components and antioxidative activities in fresh Denelrobium nobile Lindl.and dried one.

        Denelrobium nobile Lindl.;dried and fresh herb;chemical component;antioxidative activity

        R223.11

        A

        1672-1519(2015)11-0689-04

        貴州赤水石斛產(chǎn)業(yè)科技合作項目[赤中藥科合(2013)號];北京中醫(yī)藥大學大學生科研課題(201210026060)。

        朱南南(1989-),女,碩士研究生,主要從事中藥質量與開發(fā)研究。

        孫志蓉,E-mail:zrs67@126.com。

        (2015-07-20)

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