魏彥艷　李曉霞

臨床研究

尿蛋白電泳在糖尿病早期腎損傷中的預(yù)測(cè)價(jià)值

魏彥艷1李曉霞2

作者單位：028000通遼市，內(nèi)蒙古通遼市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1，臨床藥學(xué)科2

目的探討十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠（sodium dodecyl sulfate agarose gel electrophoresis，SDS-AGE）尿蛋白電泳檢測(cè)在糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）早期腎損傷中的診斷價(jià)值。方法選擇我院132例2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者，根據(jù)尿蛋白定性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分組，其中尿蛋白定性Pr（-）組65例，Pr（+/-）組32例，Pr（1+）組16例，Pr（2+）組10例，Pr（3+）組9例，選取同期健康體檢者30例作為對(duì)照組。對(duì)受試者進(jìn)行SDS-AGE尿蛋白電泳、24 h尿白蛋白定量 （24 hours-albumin，24 h-Alb）、血清肌酐（serum creatinine，SCr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水平檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果132例T2DM患者中有45例為生理性蛋白尿（45/132，34.1%），15例蛋白尿陰性（15/132，11.4%），72例患者出現(xiàn)病理性蛋白尿（72/132，54.5%），其中混合性蛋白尿29例（29/ 132，22.0%），腎小管性蛋白尿25例（25/132，18.9%），腎小球性蛋白尿18例（18/132，13.6%）。132例T2DM患者中，SCr、BUN、24 h-Alb、SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)的陽性率分別為5.3%（7/132）、24.2% （32/132）、41.7%（55/132）和54.5%（72/132）。在不同尿蛋白定性組中，SCr、BUN、24 h-Alb定量、尿蛋白電泳的檢測(cè)陽性率均隨尿蛋白含量的增加呈上升趨勢(shì)。SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)DM患者腎臟損傷程度的陽性率高于SCr、BUN及尿24 h-Alb定量的陽性率，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P均＜0.05）。結(jié)論SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)可直觀的了解患者尿蛋白的組分，判斷腎臟損傷的部位及程度，對(duì)DM患者早期腎損傷有預(yù)測(cè)價(jià)值。

糖尿??；腎損傷；尿蛋白電泳；肌酐；血尿素氮；預(yù)測(cè)

doi：10.3969/j.issn.1674-7151.2015.01.002

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）的并發(fā)癥很多，包括感染性并發(fā)癥、嚴(yán)重的急性代謝紊亂及各種慢性并發(fā)癥，慢性并發(fā)癥包括微血管病變、大血管病變、糖尿病足及神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥等，其中糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是常見的微血管并發(fā)癥，也是DM中比較嚴(yán)重的并發(fā)癥［1］。約20%～53%的DM患者會(huì)并發(fā)DN，如不積極干預(yù)，最終會(huì)發(fā)展為終末期腎衰竭［2］。根據(jù)DM Mogensen分期，I～I(xiàn)II期為DN早期，患者多無明顯臨床癥狀和體征，尿蛋白定性多為陰性，24 h尿白蛋白 （24 hours-albumin，24 h-Alb）定量在30～300 mg/24 h之間，腎小球?yàn)V過率正常。而傳統(tǒng)的腎損傷指標(biāo)如血肌酐（serum creatinine，SCr）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）靈敏度和特異性均不是很高，而且二者出現(xiàn)異常時(shí)患者腎損傷往往已經(jīng)比較嚴(yán)重了，因此糖尿病腎損傷的早期診斷對(duì)DM患者有較重要的臨床意義。本文研究對(duì)DM患者進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠（sodium dodecyl sulfate agarose gel electrophoresis，SDS-AGE）尿蛋白電泳檢測(cè)，探討其在早期DN中的預(yù)測(cè)價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1．1臨床資料選取2014年6月至2014年12月我院內(nèi)分泌科收治的132例2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者，男性75例，女性57例，年齡36～75歲，DM病程2-20年，所有病例均符合WHO關(guān)于T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)尿蛋白定性結(jié)果將患者組分為Pr（-）組65例，Pr（+/-）組32例，Pr （1+）組16例，Pr（2+）組10例，Pr（3+）組9例。選取同期健康體檢者30例作為對(duì)照組，各組在性別、年齡等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），具有可比性。

1．2病例納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床確診為T2DM的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：近一月內(nèi)發(fā)生冠心病、腦卒中者，近期使用過腎毒性藥物者，合并高血壓且控制不理想者，合并嚴(yán)重心、肝、腎臟、結(jié)締組織及血液病者，泌尿系感染及妊娠者。

1．3診斷標(biāo)準(zhǔn)DN診斷標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)尿蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate，UAER）持續(xù)＞200 μg/min或尿蛋白定量＞0.5 g/24 h，定義為DN。當(dāng)DM患者24 h-Alb處于30～300 mg/24 h范圍內(nèi)，未超過參考值上限（300 mg/24 h）時(shí)，為早期DN的主要特點(diǎn)［3］。

1．4標(biāo)本采集留取受試者新鮮晨尿及24 h尿，用于尿蛋白電泳及24 h-Alb定量檢測(cè)，清晨采集受試者空腹靜脈血3 ml用于SCr、BUN的檢測(cè)。

1．5方法采用法國Sebia公司HYDRASYS全自動(dòng)電泳儀及其配套試劑進(jìn)行SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)；采用德國SIEMENS全自動(dòng)特種蛋白分析儀分析受試者尿蛋白質(zhì)的種類；采用羅氏C501全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑檢測(cè)受試者24 h-Alb定量及SCr、BUN水平。

1．6正常參考值SCr參考值：42.0～120.0 μmol/L，BUN參考值：3.2～7.1 mmol/L，24 h-Alb定量參考值：0～130 mg/24 h，各檢查項(xiàng)目高于上述指標(biāo)上限定義為陽性。

1．7SDS-AGE圖譜尿蛋白電泳分型根據(jù)Sedbia公司提供的marker條帶及電泳區(qū)帶，以相對(duì)分子質(zhì)量約70×103的白蛋白為界限，將蛋白尿分為5種，各型蛋白尿條帶特征見表1。

表1　SDS-AGE尿蛋白電泳分型

1．8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的陽性率比較采用Fisher確切概率法檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2．1SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果30例健康對(duì)照者中有4例（4/30，13.3%）出現(xiàn)生理性蛋白尿，其余26例（26/30，86.7%）蛋白尿均陰性；132例T2DM患者中有45例（45/30，34.1%）為生理性蛋白尿，15例（15/30，11.4%）蛋白尿陰性，72例患者出現(xiàn)病理性蛋白尿，陽性率為54.5%（72/132），其中混合性蛋白尿29例，陽性率為22.0%（29/132），腎小管性蛋白尿25例，陽性率為18.9%（25/132），腎小球性蛋白尿18例，陽性率為13.6%（18/132），見表2。

2．2DM患者不同尿蛋白定性組各檢測(cè)指標(biāo)陽性率結(jié)果132例DM患者中，SCr陽性率為5.3%（7/ 132），BUN陽性率為24.2%（32/132），24 h-Alb定量陽性率為41.7%（55/132），SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)陽性率為54.5%（72/132）。在不同尿蛋白定性組中，SCr、BUN、24 h-Alb定量、尿蛋白電泳的檢測(cè)陽性率均隨尿蛋白含量的增加呈上升趨勢(shì)，見表3。

2．3尿蛋白電泳檢測(cè)陽性率與其他指標(biāo)陽性率檢測(cè)結(jié)果比較經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)，SDS-AGE尿蛋白電泳（54.5%）檢測(cè)DM患者腎臟損傷程度的陽性率高于SCr（5.3%）、BUN（24.2%）及尿24 h-Alb定量（41.7%）陽性率，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.016，P=0.001，P=0.033）。

表2　對(duì)照組及DM患者不同尿蛋白定性組尿蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果［n（%）］

3　討論

DN是DM最常見也是比較嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，在DM早期，患者腎損傷尚處于可逆階段，當(dāng)病情進(jìn)入蛋白尿期，腎臟病變將不可逆，直至發(fā)展為腎功能衰竭［4］，因此DN的早期診斷與治療對(duì)DM患者的生存及生活質(zhì)量的提高意義重大。

臨床一般將傳統(tǒng)的腎功能指標(biāo)如SCr、BUN及尿常規(guī)檢測(cè)結(jié)果作為腎臟損傷情況的判斷指標(biāo)，但上述指標(biāo)特異性、靈敏度均不高，且檢測(cè)結(jié)果常受機(jī)體病理、生理變化影響而出現(xiàn)大范圍波動(dòng)［5］。而且上述指標(biāo)只有腎臟出現(xiàn)中重度損傷時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)持續(xù)性的異常變化，不利于DN患者的早期診斷與治療。

尿液中出現(xiàn)蛋白質(zhì)是腎臟損傷的標(biāo)志之一，了解尿液中蛋白質(zhì)的含量及組成可間接判斷腎臟損傷的程度與部位［6］。在正常生理情況下，由于腎小球毛細(xì)血管濾過膜的電荷屏障及孔徑屏障作用，血漿中的蛋白質(zhì)分子不會(huì)通過，只有相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)如β2微球蛋白、α1微球蛋白等可通過腎小球?yàn)V過膜，但95%會(huì)經(jīng)近曲小管重吸收，因此健康成年人尿液中蛋白質(zhì)含量?jī)H僅為30～130 mg/24 h，尿蛋白定性試驗(yàn)呈陰性［7］。腎臟在病理狀態(tài)下，腎小球?yàn)V過膜通透性增加，腎小管重吸收能力減弱時(shí)，可出現(xiàn)蛋白尿，及時(shí)發(fā)現(xiàn)尿液中蛋白質(zhì)的組分及含量變化可間接判斷DN患者腎臟損傷的程度。

表3　DM患者不同尿蛋白定性組各檢測(cè)指標(biāo)陽性率結(jié)果［n（%）］

對(duì)于蛋白尿定性檢測(cè)，臨床主要應(yīng)用尿液干化學(xué)分析儀，采用尿液干化學(xué)試帶法，根據(jù)指示劑顏色變化判斷蛋白質(zhì)的相對(duì)含量，此法操作簡(jiǎn)便、快速，但靈敏度較低［8］。而且臨床常規(guī)應(yīng)用的干化學(xué)試紙條主要對(duì)白蛋白靈敏，對(duì)球蛋白靈敏度不高，容易出現(xiàn)漏檢情況，不適用于腎臟疾病的療效觀察及預(yù)后判斷。尿蛋白的定量方法，臨床常用的是比濁法、比色法、免疫測(cè)定法等，比濁法是臨床常用的蛋白定量方法，但結(jié)果易受濁度大小的影響，而且不能對(duì)尿蛋白具體組分進(jìn)行分析，對(duì)腎損傷部位不能準(zhǔn)確判斷。24 h-Alb定量檢測(cè)可早期反映DN患者腎臟損傷情況，但也只能單純檢測(cè)尿中白蛋白的含量，仍不能確定蛋白組分，因此也不能反映腎臟損傷的部位，而且標(biāo)本采集比較困難，如尿液保存不當(dāng)，還會(huì)造成濁度改變，影響檢測(cè)結(jié)果的可靠性。免疫測(cè)定法具有特異性強(qiáng)、均一性好、純度高的優(yōu)點(diǎn)，利用單克隆抗體技術(shù)，可測(cè)定尿液中白蛋白及各種球蛋白，也能判斷腎臟損傷部位，但此法只能檢測(cè)一種蛋白質(zhì)，不能全面反映尿液蛋白質(zhì)的種類［9］，當(dāng)尿液中某一蛋白質(zhì)含量異常增高時(shí)，檢測(cè)結(jié)果并不理想。

本文研究采用的SDS-AGE法，是根據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量大小來對(duì)尿液中蛋白質(zhì)組分進(jìn)行區(qū)分，從而進(jìn)一步對(duì)腎損傷的程度及部位進(jìn)行判斷。十二烷基磺酸鈉（sodium lauryl sulfate，SDS）是一種陰離子表面活性劑，當(dāng)其濃度超過蛋白質(zhì)濃度5～10倍時(shí)，可使蛋白質(zhì)內(nèi)部的二硫鍵及氫鍵斷裂，解離的多肽鏈與SDS結(jié)合形成帶有大量負(fù)電荷的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，消除了不同蛋白質(zhì)組分之間的原電荷差異，使蛋白質(zhì)在瓊脂凝膠中的電泳遷移速率不會(huì)受到電荷量的影響，而只與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)，這樣蛋白質(zhì)將按分子量大小進(jìn)行分離，在不同位置產(chǎn)生蛋白質(zhì)條帶，以此判斷蛋白質(zhì)分子的大小，進(jìn)而判斷腎臟損傷的部位，并根據(jù)蛋白質(zhì)條帶顏色的深淺，大致判斷腎臟損傷的程度。

本文研究利用SDS-AGE電泳對(duì)30例健康者和132例DM患者的尿液標(biāo)本進(jìn)行分析，結(jié)果顯示健康者均未出現(xiàn)病理性蛋白質(zhì)條帶，132例DM患者中有72例（54.5%）患者出現(xiàn)病理性蛋白質(zhì)條帶，65例蛋白定性陰性的DM患者中有4例出現(xiàn)混合性蛋白尿，16例出現(xiàn)腎小管性蛋白尿，1例出現(xiàn)腎小球性蛋白尿，15例未出現(xiàn)任何蛋白質(zhì)條帶，29例為生理性蛋白尿，提示DN早期腎小管損傷早于腎小球損傷，與Fu等［10］的研究結(jié)果一致。本文研究結(jié)果顯示，SCr、BUN、24 h-Alb定量及尿蛋白電泳的檢測(cè)陽性率隨尿蛋白定性嚴(yán)重程度的升高而升高，提示各指標(biāo)的陽性率與尿蛋白定性的趨勢(shì)具有一致性。本文研究還發(fā)現(xiàn)，在65例尿蛋白定性為陰性的患者中，出現(xiàn)了腎小球性蛋白尿1例，腎小管性蛋白尿16例，混合性蛋白尿4例，而尿蛋白定性為Pr（3+）的患者中，也同時(shí)出現(xiàn)了腎小球性蛋白尿4例，腎小管性蛋白尿1例，混合性蛋白尿4例，提示即使尿蛋白定性結(jié)果為陰性，也不能排除患者存在腎臟損傷情況，同時(shí)也提示腎臟損傷的嚴(yán)重程度并不隨尿蛋白含量的增加而增加。因此，建議臨床對(duì)明確診斷的DM患者定期隨訪時(shí)進(jìn)行SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)腎臟的早期損傷并及早采取預(yù)防措施。

本文研究結(jié)果顯示，SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)DM患者腎臟損傷程度的陽性率（54.5%）高于SCr、BUN及尿24 h-Alb定量的陽性率，分別為5.3%、24.2%、41.7%，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。由此可見，SDS-AGE尿蛋白電泳檢測(cè)對(duì)于判斷DM患者的腎臟損傷不僅且有較高的靈敏度，且無創(chuàng)、簡(jiǎn)便、省時(shí)，可以直觀的反映DM患者尿蛋白的組分，從而進(jìn)一步判斷腎臟損傷的部位及程度，為DM患者腎損傷的早期診斷、早期治療提供依據(jù)。

綜上所述，尿蛋白電泳檢測(cè)對(duì)DM患者早期腎損傷有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，建議在DM患者定期復(fù)查中，常規(guī)加做尿蛋白電泳檢測(cè)，以早期發(fā)現(xiàn)尿蛋白定性陰性患者的腎臟損傷情況，及早進(jìn)行干預(yù)治療，提高患者生活質(zhì)量。

1吳宇芳，關(guān)曉東.腎臟病患者尿蛋白電泳測(cè)定及其病理活檢對(duì)比分析.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34：873-874.

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（本文編輯：陳淑蓮）

The predictive value of urine protein electrophoresis in early renal damage of patients with diabetes mellitus

WEI Yan-yan1，LI Xiao-xia2.
1Department of Clinical Laboratory，the Second Hospital of Tongliao City in Inner Mongolia，Tongliao 028000，China2Department of Pharmacy，the Second Hospital of Tongliao City in Inner Mongolia，Tongliao 028000，China

ObjectiveTo study the diagnostic value of urine protein sodium dodecyl sulfate agarose gel electrophoresis（SDS-AGE）detection in the early renal damage of patients with diabetes mellitus（DM）. Methods132 cases type 2 diabetes mellitus（T2DM）patients in our hospital were collected and were divided into Pr（-）group 65 cases，Pr（+/-）group 32 cases，Pr（1+）group 16 cases，Pr（2+）group 10 cases，Pr（3+）group 9 cases according to the qualitation results of urine protein.30 cases healthy people were collected as the control group.The SDS-AGE urine protein electrophoresis，24 h urine albumin（24 h-Alb）quantitative，serum creatinine（SCr）and blood urea nitrogen（BUN）of all the subjects were detected，and the results were analyzed statistically.ResultsIn 132 cases T2DM patients，there were 15 cases（15/132，11.4%）proteinuria negative，45 cases（45/132，34.1%）physiologic proteinuria，and 72 cases（72/132，54.5%）pothological proteinuria which including 29 cases（29/132，22.0%）miscellaneous proteinuriam，25 cases （25/132，18.9%）tubular proteinuria and 18 cases（18/132，13.6%）glomerular proteinuria.The positive rate of SCr，BUN，24 h-Alb and SDS-AGE urine protein electrophoresis in 132 cases T2DM patients were 5.3% （7/132），24.2%（32/132），41.7%（55/132）and 54.5%（72/132），respectively.The positive rate of SCr，BUN，24 h-Alb and SDS-AGE urine protein electrophoresis showed a increasing trend along with the urine protein quantity.The positive rate of SDS-AGE urine protein electrophoresis was higher than that of SCr，BUN，24 h-Alb，and the differences all had statistical significance（Pall＜0.05）.ConclusionSDS-AGE urine protein electrophoresis can reflect urinary protein components of DM patients intuitively，and judge the position and degree of kidney damage，which has early prediction value for the early renal damage in the patients with DM.

Diabetes mellitus；Renaldamage；Proteinuria electrophoresis；Creatinine；Blood urea nitrogen；Prediction

（2015-01-28）