魏冬梅 陳宏 尹鋼 仲麗 周忠光

關(guān)鍵詞：蝙蝠葛酚性堿；Glil；胰腺癌中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007 - 2349（ 2015） 03 - 0064 - 02

PAMD為多種脂溶性生物堿的混合物，是從中藥北豆根（防己科植物蝙蝠葛根莖）中所提取。為了證實(shí)PAMD抗胰腺癌的相關(guān)作用機(jī)理是否與通過(guò)抑制Hedgehog信號(hào)通路的激活所發(fā)揮的作用有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)主要采用了RT - PCR檢測(cè)PAMD對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株BxPC -3裸鼠移植瘤Hedgehog信號(hào)通路中關(guān)鍵分子GlilmRNA表達(dá)的影響，探討PAMD的抗腫瘤作用以及Hedgehog信號(hào)通路在胰腺癌中的作用機(jī)制，為臨床上抗腫瘤新藥的研發(fā)提供了新的方向和思路。1 實(shí)驗(yàn)材料

PAMD購(gòu)自于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；5-氟尿嘧啶（5 - Fu）購(gòu)自sigma公司；人源性胰腺癌BxPC -3細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院（上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自上海斯萊克動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司；胰蛋白酶（GIBCO分裝伯安生命技術(shù)有限公司）；DU800核酸蛋白分析儀購(gòu)自Beckman公司；SYBR Premix Ex Taq試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司：Prime -Script RT試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司；ABI 7500實(shí)時(shí)熒光PCR儀購(gòu)自Applied Biosystems公司。2實(shí)驗(yàn)方法2.1 動(dòng)物分組50只裸鼠，雌性，（4 -6）W齡。造模24 h后，隨機(jī)將其分成5組，分別為模型對(duì)照組、空白組、5 - FU組、PAMD低劑量組、PAMD高劑量組，每組10只。2.2給藥途徑及劑量實(shí)驗(yàn)分組和給藥劑量：模型組及空白組：每天給予同等容積的生理鹽水（0. 9% NaCl），但空白組不需要接種瘤株；5 - FU組：按20 mg/kg腹腔注射給藥PAMD；低劑量組：按10 mg/kg腹腔注射給藥；PAMD高劑量組：按20 mg/kg腹腔注射給藥。各實(shí)驗(yàn)用藥治療組均連續(xù)給藥21 d。2.3造模及取材取凍存胰腺癌細(xì)胞株BXPC -3，投入37℃水中，1min內(nèi)融化，離心去除凍存液，用約10倍冷RPMI1640完全培養(yǎng)液洗1次，接種于培養(yǎng)瓶中，置于37C、飽和濕度、5% C02培養(yǎng)箱中，隔日換液，細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，用0.25%胰酶、EDTA消化、傳代，并以倒置顯微鏡監(jiān)控。待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，收集細(xì)胞并用RPMI1640調(diào)整濃度為5×l06個(gè)·mL-1的細(xì)胞懸液，接種于40只裸鼠右腋窩皮下，每只鼠0.2 mL。21天后處死動(dòng)物，取瘤組織1.0g，Trizol法進(jìn)行提取總RNA，Trizol法提取總RNA，總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，相對(duì)定量數(shù)據(jù)處理（2-△△CT法）。引物由上海生工生物工程公司合成。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)經(jīng)檢測(cè)均符合正態(tài)分布和方差齊分析，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0數(shù)據(jù)處理分析，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，而多組間的差異性比較主要采用單因素的方差分析（ one way ANOVA）。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 p - action擴(kuò)增曲線及溶解曲線 B- action mRNAReal - time PCR擴(kuò)增曲線及Ct值見圖1，溶解曲線見圖2。3.2 Glil mRNA Real - time PCR擴(kuò)增曲線及溶解曲線 GlilmRNA Real - time PCR擴(kuò)增曲線及Ct值見圖3，溶解曲線見圖4。3.3

PA MD對(duì)Glil mRNA表達(dá)影響 PAMD對(duì)Glil mRNA表達(dá)的影響見表l。

從表l結(jié)果表明，PAMD治療組Glil mRNA的表達(dá)與模型對(duì)照組比較，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。4討論

研究顯示，Hedgehog信號(hào)通路的調(diào)節(jié)失衡或異常激活與胰腺癌的產(chǎn)生以及其惡性的生物學(xué)特性是密切相關(guān)的，但在正常的胰腺組織中卻不表達(dá)或僅有輕度的表達(dá)[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Gli - 1蛋白在模型組中呈高表達(dá)、強(qiáng)陽(yáng)性。而PAMD治療組與模型對(duì)照組比較表達(dá)水平均有所降低，有差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果提示：在胰腺癌的腫瘤組織中Hedgehog信號(hào)通路的活性被重新激活，其主要成員表達(dá)異常增高，這與其他惡性腫瘤中該通路的表達(dá)情況是一致的[2-4].同時(shí)說(shuō)明PAMD具有抑制此信號(hào)通路主要蛋白表達(dá)的功能，從而起到抗腫瘤的作用。參考文獻(xiàn)：[1] Kayed H，Kleeff J，Esposito I，et al.Localization of the human hedgehog-interacting protein（ Hip） in the normal and diseased pancreas[J].Mol Carcinog，2005 ，42 （4）：183-192.[2] Oro A E，Higgins K M，Hu Z，et al.Basal cell carcinomas in mice over—expressing sonic hedgehog[J].Science ，1997 ，276（ 5313）：817 -821[3] Thayer S P，di Magliano M P，Heiser P W，et al.Hedgehog is an earlyand late mediator of pancreatic canCer tumorigenesis[J].Nature ，2003，425（ 6960）：851-856.[4] Lauth M，Toftg1/4rd R.Non - Canonical Activation of GLI TranscriptionFactors[J].Cell Cycle ，2007，6（20）：2458-2462.

（收稿日期：2014-12-09）^_^臭參的降血脂抗疲勞及抗缺氧作用研究

董麗丹.錢子剛，楊兆祥，程永現(xiàn)（1.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，云南昆明650500；2.中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源 持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650201；3昆明制藥集團(tuán)股份有限公司，云南昆明650100） 摘要：目的探討臭參的降血脂、抗疲勞及抗缺氧作用功效。方法該研究分別采用混合型高脂血癥大鼠模型，小鼠負(fù)重游泳和常壓缺氧模型，選用血脂四項(xiàng)指標(biāo)（總膽固醇（ TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（ HDL - C），低密度脂蛋白膽固醇（ LDL - C》，負(fù)重游泳時(shí)間，常壓耐缺氧時(shí)間作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果 與高脂模型組相比較給藥組大鼠血清Tg，TC和LDL -C含量均顯著性降低（P<0.05）；臭參能明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.05）；但不能明顯提高小鼠常壓耐缺氧時(shí)間。結(jié)論 臭參具有較好的降血脂和抗疲勞作用，但無(wú)抗缺氧作用，提示臭參可作為高血脂患者的食材。