張　華　刁玉荃　邢　卿

ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性探析

張華①刁玉荃①邢卿①

目的：分析探究2型糖尿病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性。方法：選擇2012年9月-2014年9月在本院接受治療的50例2型糖尿病患者作為試驗(yàn)組，并選取同期50例接受健康體檢的正常人作為對照組，分別檢測兩組ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態(tài)性，對比分析兩組C-482T、T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況及T-455C與C-482T各基因型間ApoC-Ⅲ的濃度情況。結(jié)果：兩組C-482T、T-455C等位基因C含量與T含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。試驗(yàn)組T-455C與C-482T各基因型的ApoC-Ⅲ濃度與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：2型糖尿病的發(fā)病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T和T-455C單核苷酸多態(tài)性之間并不存在相關(guān)性，但健康人體內(nèi)的C-482T多態(tài)性與其血清ApoC-Ⅲ水平的變化之間存在一定的聯(lián)系。

ApoC-Ⅲ啟動子C-482T； T-455C單核苷酸多態(tài)性； 2型糖尿病

First-author's address：Qingdao Municipal Hospital，Qingdao 266011，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.27.002

糖尿病近年來嚴(yán)重影響著患者的健康水平，作為臨床上一種常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，給患者的身體和心理都帶來很大的影響。其中，2型糖尿病屬于后天獲得性糖尿病，與先天性糖尿病有根本差異［1-2］。胰島素的分泌異常是2型糖尿病主要的發(fā)病機(jī)制，最終造成血糖調(diào)節(jié)過程中的異常，該病患者發(fā)病特點(diǎn)可分為兩種，一是胰島素抵抗，具體表現(xiàn)為胰島素利用率降低；二是胰島素分泌不足。根據(jù)不同發(fā)病特點(diǎn)，選擇不同的治療方法，以恢復(fù)患者健康［3］。糖尿病若得不到有效治療，很可能發(fā)展惡化，最終導(dǎo)致腎功能衰竭，嚴(yán)重影響糖尿病患者的生活質(zhì)量和身心健康。因此，本院為進(jìn)一步對2型糖尿病與ApoC-Ⅲ啟動子C-482T 及T-455C單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性進(jìn)行研究與分析，特選取50例患有該病患者的資料，研究后做出如下報(bào)告。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年9月-2014年9月在本院接受治療的50例2型糖尿病患者作為試驗(yàn)組，并選取在此期間接受常規(guī)體檢者50例作為對照組。試驗(yàn)組中男23例，女27例，年齡36～65歲，平均（44±2.5）歲，病程5～7年，平均（6±0.5）年，BMI19.3～28.4kg/m2，平均（22.3±2.6）kg/m2，其中伴有高脂血癥6例，合并高血壓病9例，存在視網(wǎng)膜病變10例，糖尿病周圍神經(jīng)病變5例，脂肪肝10例，雙側(cè)頸動脈輕度硬化5例，糖尿病合并其他病癥5例；對照組中男25例，女25例，年齡34～68歲，平均（45±1.9）歲，BMI 19.1～27.6 kg/m2，平均（22.1±1.9）kg/m2，體檢正常，排除糖尿病等疾患。糖尿病患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：符合糖尿病的西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；符合糖尿病周圍神經(jīng)病變的中醫(yī)證型診斷標(biāo)準(zhǔn)，且符合1999年世界衛(wèi)生組織WHO關(guān)于糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，在研究期間不離開醫(yī)院且精神狀況良好，能夠配合研究且獨(dú)立完成各項(xiàng)檢查［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合上述的兩種標(biāo)準(zhǔn)；患者的相關(guān)病歷資料不夠齊全；排除由其他病癥引發(fā)的周圍神經(jīng)病變而發(fā)生的血淤癥；本研究的相關(guān)人員認(rèn)為患者有不符合入組的情況，在治療期間可能外出或離家，精神狀態(tài)出現(xiàn)異常，在半年內(nèi)進(jìn)行化學(xué)藥物治療［5］。兩組患者均簽署研究知情同意書，兩組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2方法 對兩組患者體內(nèi)的ApoC-Ⅲ啟動子C-482T及T-455C單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行檢測的方法主要是通過多態(tài)性分析，其主要為：（1）將DNA從患者的基因組中提取出來，采集患者的外周靜脈血液標(biāo)本并進(jìn)行抗凝處理，將有核細(xì)胞從血標(biāo)本中提取后，用相應(yīng)蛋白酶溶解后得到基因組DNA，將其溶解到一定量的TE緩沖液中，且將DNA的濃度調(diào)整到50 ng/μL，保存后以作備用。（2）對核酸中的序列進(jìn)行擴(kuò)增，將DNA序列由上海生物工程有限公司進(jìn)行純化或合成。（3）對DNA進(jìn)行酶切與電泳分離，用限制酶在所需基因的位點(diǎn)處進(jìn)行分離與切割，并使用電泳的方式將所需的基因碎片進(jìn)行分離，得到確切的基因部分。

1.3觀察指標(biāo) 記錄分析兩組患者的C-482T及T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況及兩組患者的T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ的濃度情況。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x-±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組C-482T基因型與等位基因之間的頻率情況比較 兩組等位基因C含量與T含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2兩組T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況比較 兩組等位基因C含量與T含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2　兩組患者T-455C基因型與等位基因之間的頻率情況比較　　　　　　　　　例（%）

2.3兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度情況比較 兩組T-455C各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。試驗(yàn)組T-455C 與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ的濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表1　兩組C-482T基因型與等位基因之間的頻率情況比較 例（%）

表3　兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較（±s） 　　mg/dL

表3　兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較（±s） 　　mg/dL

C-482T組別T-455C -455TT-455TC-455CC-482CT-482TT-482CC對照組（n=50）10.23±2.399.37±3.1210.01±4.118.42±3.1910.48±4.219.45±2.13試驗(yàn)組（n=50）10.59±6.4310.89±5.7910.23±6.019.23±7.8210.37±4.329.56±1.94

3　討論

2型糖尿病是一種后天糖尿病類型，胰島素的分泌異常是其主要的發(fā)病機(jī)制，最終造成血糖調(diào)節(jié)過程中的異常，近年來，有資料顯示2型糖尿病患者內(nèi)臟型肥胖與胰島素抵抗存在一定的相關(guān)性［6-7］。2型糖尿病原名是成人發(fā)病性糖尿病，患者體內(nèi)產(chǎn)生胰島素的功能完全喪失。該疾病是以高血糖為主要特征的代謝性疾病，多飲、多食、多尿、消瘦等是其主要臨床表現(xiàn)［8-11］。近幾年來，2型糖尿病的發(fā)病率逐年攀升，已經(jīng)成為危害人們健康的首要疾病，這與人口老齡化的發(fā)展趨勢和人們不良的飲食生活習(xí)慣有極大的關(guān)系［12-13］。該病嚴(yán)重影響患者的健康水平，是臨床上一種常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，以中老年人群居多，給患者的身體和心理帶來很大的影響。大多數(shù)患者由于對疾病缺少正確的認(rèn)知，心里有恐慌、張緊等不良情緒，會出現(xiàn)情緒低落或自暴自棄的情況，對治療不抱有希望，因此，全面認(rèn)識2型糖尿病的臨床相關(guān)評估對早期診斷并治療有重要意義。

該研究結(jié)果中表明，2型糖尿病患者體內(nèi)的ApoC-Ⅲ啟動子C-482T與T-455C等位基因C、T與正常人之間并沒有較為明顯的差異，即兩種物質(zhì)的基因的含量并不能夠證明其與2型糖尿病發(fā)病之間的關(guān)系。臨床上對于ApoC-Ⅲ對2型糖尿病患者的影響已經(jīng)存在較多的研究，并且經(jīng)過多個(gè)試驗(yàn)與研究表明，血清的高密度脂蛋白中含有ApoC-Ⅲ物質(zhì)，該物質(zhì)是關(guān)于機(jī)體代謝疾病綜合癥的一種相對較為獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，并且該物質(zhì)與2型糖尿病患者的發(fā)病之間存在著密切的聯(lián)系。經(jīng)過相應(yīng)報(bào)道證實(shí)，ApoC-Ⅲ在患者的血清中含量增加時(shí)，能夠促進(jìn)患者胰島細(xì)胞的快速凋亡，故而，降低患者體內(nèi)的ApoC-Ⅲ含量，不僅能夠改善患者胰島細(xì)胞的部分功能，還可以預(yù)防2型糖尿病的發(fā)生［14］。但臨床上對于ApoC-Ⅲ如何引起胰島細(xì)胞的快速凋亡并沒有明確的解釋，因此，本研究中對ApoC-Ⅲ中的兩種主要物質(zhì)T-455C單核苷酸多態(tài)性及Ⅲ啟動子C-482T的含量與2型糖尿病的發(fā)病之間的關(guān)系進(jìn)行研究，以便于確定ApoC-Ⅲ中主要影響2型糖尿病發(fā)生的因素，并針對該物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的準(zhǔn)確監(jiān)測與疾病的預(yù)防，但本研究中的結(jié)果顯示，T-455C單核苷酸多態(tài)性、Ⅲ啟動子C-482T兩種物質(zhì)與2型糖尿病之間沒有確切的聯(lián)系，故而臨床上需對發(fā)病的因素進(jìn)行進(jìn)一步的研究［15］。

與此同時(shí)，對兩組研究對象進(jìn)行基因型檢測后，兩組T-455C與C-482T各基因型間的ApoC-Ⅲ濃度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。該結(jié)果證明2型糖尿病患者發(fā)病的主要原因與這兩種物質(zhì)之間沒有聯(lián)系。然而，對照組-482TT基因型的ApoC-Ⅲ的濃度高于其-482CT基因型的ApoC-Ⅲ濃度，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可以根據(jù)兩種基因的序列檢測準(zhǔn)確的監(jiān)視正常人體內(nèi)的ApoC-Ⅲ血清變化情況，確保其能夠在出現(xiàn)異常情況的早期得到及時(shí)且有效的檢測，具有重要的臨床作用。

在ApoC-Ⅲ基因中，其啟動因子的區(qū)域中有胰島素反應(yīng)元件的存在，并且胰島素能夠?qū)poC-Ⅲ基因中的表達(dá)過程進(jìn)行下調(diào)，從而發(fā)揮其控制血糖的作用，并且如果該基因出現(xiàn)突變，則導(dǎo)致胰島素的降糖作用減弱甚至消失，本研究中的T-455C與C-482T兩個(gè)基因的突變位點(diǎn)便位于胰島素反應(yīng)元件當(dāng)中。臨床上，對于糖尿病等代謝綜合征的發(fā)病原因主要是胰島素的功能抵抗，并且，目前在我國，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的不斷發(fā)展，已出現(xiàn)對于T-455C與C-482T兩個(gè)基因位點(diǎn)的研究，但結(jié)果均是兩種物質(zhì)單獨(dú)出現(xiàn)時(shí)與2型糖尿病的發(fā)病之間并沒有突出的關(guān)系，即不存在明顯的作用，故而，臨床上應(yīng)加大對此方面的研究，以便于提高2型糖尿病患者的臨床治療效果，改善患者的生活質(zhì)量，增加患者對臨床治療效果的滿意程度，具有十分重要的臨床意義。

綜上所述，ApoC-Ⅲ啟動子C-482T及T-455C單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病的發(fā)病過程之間沒有較為明顯的相關(guān)性，但健康人ApoC-Ⅲ血清水平與體內(nèi)的C-482T多態(tài)性的變化之間有一定的聯(lián)系。

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Exploration of the Relationship between Single Nucleotide Polymorphisms of ApoC-Ⅲ Promoter C-482T，T-455C and Type 2 Diabetes/

Z HANG Hua，DIAO Y u-quan，XING Qing.//Medical Innovation of China，2015，12（27）：006-009

Objective：To analyze and explore the relationship between single nucleotide polymorphisms of ApoC-Ⅲ promoter C-482T，T-455C and type 2 diabetes.Method：50 patients with type 2 diabetes who accepted treatment in our hospital from September 2012 to September 2014 were selected as the test group，50 health people who accepted health examination at the same time were selected as the control group.The single nucleotide polymorphisms（SNPs） of C-482T and T-455C of the two groups were detected.The frequency of genotype and allele of C-482T and T-455C in the two groups，the concentration of ApoC-Ⅲ in different genotypes of C-482T and T-455C were analyzed and compared. Result：The differences in the content of C，T in C-482T and T-455C of the two groups were not statistically significant （P＞0.05）.The differences in concentrations of ApoC-Ⅲ in different genotypes of C-482T and T-455C of the two groups were not statistically significant（P＞0.05）.In the control group，the concentration of ApoC-Ⅲ in genotype of -482TT was higher than that in genotype of -482CT，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：There is no relationship between single nucleotide polymorphisms of ApoC-Ⅲ promoter C-482T，T-455C and type 2 diabetes.But in the health people，the polymorphism of C-482T has a relationship with the level of serum ApoC-Ⅲ.

ApoC-Ⅲ promoter C-482T； Single nucleotide polymorphism of T-455C； Type 2 diabetes

①山東省青島市市立醫(yī)院 山東 青島 266011

張華

（2015-03-09） （本文編輯：王利）