白艷麗

沈陽市第一人民醫(yī)院檢驗科,遼寧沈陽 110041

世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，我國已經(jīng)成為乙型肝炎的高流行區(qū)，接近10%的人群攜帶率已經(jīng)成為嚴(yán)重的公共社會問題[1]。針對乙型肝炎的測定，目前臨床上方法較多，如酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、膠體金免疫法、微粒子酶聯(lián)免疫法（MEIA）以及時間分辨熒光分析法等（TRFIA）等[2]。目前我國針對乙型肝炎血清標(biāo)志物的測定大多使用酶聯(lián)免疫吸附法，此種方法雖能對乙肝血清學(xué)病毒標(biāo)志物進(jìn)行定性分析，但其敏感度較差，且針對前帶現(xiàn)象不能較好的分析，容易導(dǎo)致鉤狀效應(yīng)的發(fā)生[3]，同時在標(biāo)本保持、運送以及檢測過程中容易受到交叉污染而影響檢查結(jié)果[4]。關(guān)鍵是該方法不能有效的對乙肝病毒標(biāo)志物行動態(tài)分析，而對于較低水平乙肝病毒感染后的標(biāo)志物亦存在漏檢可能[5]。故本研究主要探討MEIA在乙肝五項測定中的應(yīng)用價值，并與常規(guī)ELISA進(jìn)行比較，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1月～2014年6月確診乙型病毒性肝炎在我院復(fù)查進(jìn)行乙肝兩對半測定復(fù)查患者200例，按照隨機(jī)數(shù)字法分為兩組，各100例，其中觀察組：男56例，女44例，年齡18～50歲，平均（32.1±5.6）歲，病程1～ 20年，平均（5.5±0.6）年；對照組：男55例，女45例，年齡18～51歲，平均（32.3±5.4）歲，病程 1～ 20年，平均（5.4±0.6）年，兩組性別、年齡及病程等差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與方法

1.2.1 儀器與試劑 酶標(biāo)儀使用BIOTEXELX-800型，洗板機(jī)使用anthosfluid型；化學(xué)發(fā)光全自動化分析儀使用美國AXSYMABBoTT型；ELISA法使用乙肝兩對半試劑盒由廈門新創(chuàng)公司提供（10910148）。EIA法使用美國AXSYM原裝配套試劑。

1.2.2 EIA法原理及操作步驟 將包被抗體置入塑料微珠試劑內(nèi)，加入標(biāo)本液，37℃溫箱培育并加入堿性磷酸酶標(biāo)記抗體，之后將其轉(zhuǎn)移至玻璃纖維柱內(nèi)，洗滌，洗脫后，加入熒光底物—4-甲基傘型酮磷酸鹽，365nm偏光照射產(chǎn)生熒光，采用速率法檢測熒光強(qiáng)度，并通過處理軟件轉(zhuǎn)換計量資料。其中HBsAg、HBsAb和HBeAg測定分別采用雙抗夾心法，并以樣本熒光速率值與cut-off熒光速率比值轉(zhuǎn)換值表示，而HBcAb與HBeAb測定則使用競爭法，以樣本熒光速率值轉(zhuǎn)換值表示，單位均為mIU/mL。

1.2.3 ELISA法 所有操作均嚴(yán)格說明書進(jìn)行，采用試劑盒所示陰性對照為吸光度值（A），將其2.1倍設(shè)定為臨界值（CO），提高樣品吸光度值與臨界值比值，判斷陰性與陽性結(jié)果。

1.2.4 研究方法 所有患者入組后均簽署知情同意書，并申報醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，其中觀察組采用MEIA法測定，對照組則使用ELISA法測定，比較兩組患者測定陽性率，并統(tǒng)計兩組操作時間，得出結(jié)果時間。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行,計量資料以（x±s）表示 ,兩組間均數(shù)的比較使用t檢驗，組間率的比較采用x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組測定陽性率比較

觀察組測定HBsAg、HBcAb和HBeAb的陽性率顯著高于對照組（P＜0.05）,兩組測定HBsAb和HBeAg的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組測定陽性率比較[n（%）]

2.2 兩組操作時間，得出結(jié)果時間比較

觀察組操作時間和得出結(jié)果時間均顯著短于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組操作時間得出結(jié)果時間比較（± s，min）

表2 兩組操作時間得出結(jié)果時間比較（± s，min）

組別 操作時間 得出結(jié)果時間觀察組 6.5±3.2 60.5±2.8對照組 8.9±3.6 120.5±10.5 t 4.983 55.213 P 0.000 0.000

3 討論

ELISA法作為目前臨床最常用的一種測定HBV血清標(biāo)志物的方法，已經(jīng)得到臨床廣泛應(yīng)用，但因生產(chǎn)該試劑尤其是包被基因片段的廠家不一[6]，各有差異，同時其無統(tǒng)一操作流程可循，加之該方法不容忽視的漏診率以及操作繁瑣性、無法避免的污染因素等而限制其臨床應(yīng)用。同時傳統(tǒng)的ELISA法測定乙型肝炎血清病毒標(biāo)志物僅能達(dá)到定性目的，即可對陰性與陽性結(jié)果做出判斷，但未能實現(xiàn)患者體內(nèi)乙型肝炎病毒標(biāo)志物血清濃度，對臨床治療的指導(dǎo)意義有限[7]。MEIA法其臨床檢測時間顯著縮短，并且能針對單個標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定，操作系統(tǒng)封閉性強(qiáng)，有效減少了操作過程中引起的交叉污染[8]。

本研究觀察組測定HBsAg、HBcAb和HBeAb的陽性率顯著高于對照組。觀察組采用的MEIA法，作為一種定量測定方法，其能較為準(zhǔn)確的反映患者血清內(nèi)病毒標(biāo)志物的水平，從而間接的反映機(jī)體乙肝病毒DNA復(fù)制情況及活躍度，更好的指導(dǎo)臨床治療[9]。其主要通過過氧化物酶標(biāo)記抗原為底物，采用塑料小孔管載體，通過魯米諾為發(fā)光劑聯(lián)合發(fā)光增強(qiáng)劑增敏和穩(wěn)定作用的一種化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫法[10]。其作為發(fā)光酶聯(lián)免疫技術(shù)，具有極強(qiáng)的生物素親力以及通過強(qiáng)化發(fā)光技術(shù)而提高臨床測定陽性率[11]，而且所使用的固相載體，其顆粒小，表面積大，分布廣泛，有效的增加了反應(yīng)面積[12]，故本研究對照組的陽性診斷率升高。同時本組臨床測定時間顯著短于對照組，可以進(jìn)行獨立標(biāo)本測定，其原因可能與MEIA法所用儀器自動化程度較高，提取后可將檢測自動完成有關(guān)，故MEIA法從而更好的提高了臨床實用性。MEIA法已經(jīng)成為目前臨床測定乙肝病毒標(biāo)志物的“金指標(biāo)”，但其價格昂貴，尤其是針對經(jīng)濟(jì)條件較差地區(qū)以及基層醫(yī)院，不易普及。故通過本組研究建議，MEIA法測定乙肝兩對半能在定量指標(biāo)上診斷，其診斷率高，建議在經(jīng)濟(jì)條件允許前提下，推廣使用。

[1]朱平，金兆清.乙肝血清5項指標(biāo)特殊組合模式分析[J].西北國防醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（2）：145-146.

[2]肖春紅，喻海忠.乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物3種測定方法的比較[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20（33）：4185-4187.

[3]王照青.慢性乙型肝炎患者化學(xué)發(fā)光法數(shù)據(jù)的變化規(guī)律分析 [J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2012，16（19）：2526-2528．

[4]王曉玲，王志剛.乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物不同檢測方法的結(jié)果分析 [J].中國中醫(yī)藥，2011，9（3）：192-193.

[5]鄧衛(wèi)武.商品化試劑盒檢測乙肝表面抗體檢測結(jié)果差異性分析 [J].現(xiàn)代醫(yī)院，2012，12（4）：38-41.

[6]吳子安，徐寧，邱智詠，等.乙肝表面抗原ELISA試劑盒檢測灰區(qū)的探討[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（10）：1679-1682.

[7]王彬.微粒子酶聯(lián)免疫分析技術(shù)檢測乙肝兩對半的表現(xiàn)模式分析 [J].現(xiàn)代醫(yī)院，2014，14（3）：60-62.

[8]林梅雙，吳曉蔓.磁珠濃縮法在低濃度HBsAg檢測中的應(yīng)用 [J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2012，28（2）：307-309．

[9]楊笑瓊，何海洪，楊秀珠，等.ELSIA法和MEAI法測定乙肝病毒血清標(biāo)志物的比較研究[J].北方藥學(xué)，2014，11（2）：16-17.

[10]馮剛，陳寰.兩種方法檢測乙肝表面標(biāo)志物的結(jié)果比較研究[J].中國初級衛(wèi)生保健，2012，26（4）：115-116.

[11]溫洪周，黃震，束振華.乙肝“兩對半”檢驗?zāi)Ｊ阶冞w分析[J].分子診斷與治療雜志，2010，2（4）：263-265.

[12]吳阿陽，陳忠進(jìn).酶聯(lián)免疫吸附法和時間分辨熒光免疫法在檢測乙型病毒性肝炎中的效果比較[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（13）：34-35.