代　琦，魏　芳，梅雄娥，周福仙，蘇鴻雁

（大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南 大理 671003）

蒼山三條溪中捕食線蟲真菌資源調(diào)查研究*

代琦，魏芳，梅雄娥，周福仙，蘇鴻雁

（大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南 大理 671003）

摘要：對蒼山三條溪沉水腐木中捕食線蟲真菌進行調(diào)查，并對中游和下游中的分布情況進行比較。方法：從蒼山黑龍溪、靈泉溪、萬花溪三條溪的中游、下游各采集腐木50份，總計腐木300份，進行捕食線蟲真菌的分離與鑒定。結(jié)果：共分離出4屬17種。其中腐木中的優(yōu)勢種是Arthrobotrys longiphorum和Dactylellina ellipsosporum。結(jié)論：蒼山溪水腐木中有著豐富的捕食線蟲真菌資源；溪水中游的捕食線蟲真菌的多樣性要遠大于下游，下游受人為因素影響較大，溪水比中游渾濁且有生活垃圾及生活污水，可能是導(dǎo)致捕食線蟲真菌分布量下降的主要原因。

關(guān)鍵詞：蒼山；沉水腐木；捕食線蟲真菌；資源；污染

捕食線蟲真菌是一類以營養(yǎng)菌絲特化形成三維菌網(wǎng)、粘性球、收縮環(huán)、非收縮環(huán)、粘性分枝、粘性菌絲等捕食器官來捕食線蟲的真菌，在動植物及食用菌線蟲生物防治中起重要的作用［1］。捕食線蟲真菌可以生活在土壤、糞便、腐木、腐葉、植物殘渣、地衣等多種基質(zhì)上［2］，目前對捕食線蟲真菌的研究多限于陸地環(huán)境中的捕食線蟲真菌，對水體中捕食線蟲真菌的研究相對較少。由于特殊水生環(huán)境的影響，水生真菌可能會在進化過程中產(chǎn)生出不同的代謝方式、調(diào)控機制及基因等，所以研究水生真菌比普通真菌有更高的應(yīng)用價值［3-4］。就國內(nèi)而言，對于生活在淡水環(huán)境中的捕食線蟲真菌有了一定的研究，特別是在底泥方面［5-9］，但對水中其他基質(zhì)上的捕食線蟲真菌的研究較少［10］。本實驗對蒼山三條溪水中沉水腐木上的捕食線蟲真菌進行資源調(diào)查，并比較中游和下游溪水中捕食線蟲真菌的分布情況，這對于進一步研究捕食線蟲真菌適應(yīng)環(huán)境的能力及在不同基質(zhì)上的分布情況具有一定的指導(dǎo)意義，同時還可以發(fā)掘更多的生防資源菌株。

1.材料與方法

1.1樣品采集地點 蒼山位于云南大理 （99°55′～100°12′E，25°34′～26°00′N），南北長950km，東西寬19km，總面積950km2。海拔1980-4122m，年降雨量1846.4mm，年均溫差8.4℃。植被按不同的海拔梯度主要有云南松林及灌叢草坡帶、華山林人工帶、常綠櫟類、杜鵑箭竹灌叢林、蒼山冷杉林帶、高山杜鵑灌叢草甸。蒼山有十九峰，每兩峰之間有一條溪，即蒼山十八溪，溪水流入洱海［11］。黑龍溪、萬花溪、靈泉溪中游無人類居住，受人為因素影響較少，水較清澈；下游居住人群較多，受人為因素影響大，水體略渾濁且水中有生活垃圾及家庭排放的廢水。

1.2樣品采集2014年5月分別從蒼山黑龍溪、靈泉溪、萬花溪三條溪的中游、下游各采集腐木50份，總計腐木300份，隨機采樣，樣品放于封口袋中，帶回實驗室處理。

1.3培養(yǎng)300份腐木采用塑封盒培養(yǎng)法。在塑封盒底鋪上一層吸水紙，撒上無菌水保持紙濕潤并飽和，在吸水紙上放上2～3根吸管，將腐木放在吸管上，蓋上蓋子，常溫下保濕培養(yǎng)一周。

1.4 CMA的配制稱取玉米粉28g，瓊脂條16g，加水1000mL，煮沸至30min，用四層紗布過濾，取濾液加水至1000mL后混勻，自然pH，分裝至500mL錐形瓶，121℃高溫高壓滅菌30min。

1.5菌種分離與鑒定用體視鏡對腐木樣品進行鏡檢，將鏡檢到的菌種轉(zhuǎn)接至CMA培養(yǎng)基中，并在培養(yǎng)基中間挖一個1x1cm2的小室，在25℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)5～7d，待長出較多孢子時，在小室內(nèi)加入誘餌線蟲，培養(yǎng)12～24h后進行鏡檢，觀察捕器的產(chǎn)生情況［12］。根據(jù)孢子著生方式、孢子梗形態(tài)、孢子形態(tài)及捕器等特征采用Li Yan等［13］分類系統(tǒng)對捕食線蟲真菌進行形態(tài)學(xué)鑒定，對于形態(tài)學(xué)無法鑒定的菌種使用CTAB法［14］提取DNA，PCR擴增，測序，BLAST序列比對，采用分子學(xué)手段進行鑒定。

1.6捕食線蟲真菌檢出率及統(tǒng)計檢出率 （0F） =含有某一菌種的樣品數(shù)/總樣品數(shù)×100%

2.結(jié)果

對蒼山三條溪水中捕食線蟲真菌資源的調(diào)查結(jié)果如表1所示，由表可知，從沉水腐木中共分離出捕食線蟲真菌4屬17種，其中A.longiphorum和Dac.ellipsosporum為優(yōu)勢種，A.longiphorum在中游和下游的檢出率分別為25.33%和10.67%，Dac.ellipsosporum在中游和下游的檢出率分別為10.67%和8.67%。由表1可以看出蒼山溪流沉水腐木上有著豐富的捕食線蟲真菌且中游捕食線蟲真菌的檢出率遠高于下游的檢出率。

表1　蒼山三條溪流沉水腐木上捕食線蟲真菌資源的調(diào)查結(jié)果

3.討論

中游的捕食線蟲真菌檢出率明顯高于下游的檢出率，可能是由于下游受人為因素的影響，從而導(dǎo)致捕食線蟲真菌的多樣性下降。張仕穎等［6］研究發(fā)現(xiàn)水環(huán)境的污染狀況對淡水生捕食線蟲真菌的分布有顯著影響，這一研究結(jié)果與本實驗的研究結(jié)果相似。此外，A.oligospora在土壤中是優(yōu)勢種［15-16］，而本實驗在腐木上未分離出這個種，腐木上的優(yōu)勢種為 A.longiphorum 和A.ellipsosporum，說明不同基質(zhì)中捕食線蟲真菌的分布存在著差異。對于腐木上捕食線蟲真菌的生理生化特性是否與土壤中的相同，腐木上捕食線蟲真菌的種類是否隨著季節(jié)有明顯的變化等方面，還有待研究。此外，羅晶等［17］研究發(fā)現(xiàn)淡水中的真菌在環(huán)境指數(shù)、污染處理、新功能結(jié)構(gòu)化合物以及生物防治等方面具有重要作用，淡水中腐木上的捕食線蟲真菌作為淡水水生真菌的一員，是否兼具這些功能還有待研究。

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（責(zé)任編輯徐成東）

中圖分類號：Q949.320.1

文章標(biāo)識碼：A

文章編號：1671-7406（2015）03-0054-03

*基金項目：國家基金 （31060019；31460015）；云南省中青年學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人后備人才培養(yǎng)計劃資助項目 （2012HB-042）。

收稿日期：2015-01-14

作者簡介：代琦 （1991—），女，在讀本科生，研究方向：微生物及疾病。

通信作者：蘇鴻雁 （1967-），女，教授，主要從事菌物學(xué)研究。

Investigation on the Nematode-trapping Fungi from Three Streams of the Cangshan Mountain

DAI Qi，WEI Fang，MEI Xionge，ZHOU Fuxian&SU Hongyan
（College of Agriculture and Biology Science，Dali University，Dali，671003，Yunnan Province）

Abstract：Objective：To survey the resource of nematode-trapping fungi on submerged rotten wood from three streams of Cangshan and compare the distribution of nematode-trapping fungi between midstream and downstream.Methods：We collected 50 rotten wood from each part of creeks'middle and lower reaches of Cangshan—Black dragon creek，Lingquan creek and Wanhua creek，a total of rotten wood is 300，then to prey on separation and identification of nematode-trapping fungi.Results：A total of 4 genera 17 species were isolated.The dominant species of rotten wood are Arthrobotrys longiphorum and Dactylellina ellipsosporum.Conclusion：Freshwater rotten wood has a wealth resources of nematode-trapping fungi；the diversity of the nematode-trapping fungi in middle of brook is greater than the downstream's，downstream are greatly influenced by human factors，whose streams is turbider than middle's.What's more，there are household garbage and sewage in the downstream，which maybe the main reason causing distribution's decrease of nematode-trapping fungi.

Key words：Cangshan；submerged rotten wood；nematode-trapping fungi；resources；pollution