錢麗梅

(張家港市大新鎮(zhèn)動物防疫站,江蘇張家港 215600)

一例雞傳染性喉氣管炎病毒的分離鑒定

錢麗梅

(張家港市大新鎮(zhèn)動物防疫站,江蘇張家港 215600)

本實驗從張家港某養(yǎng)雞場采集臨床疑似傳染性候氣管炎的病雞喉頭氣管、肺臟等病料,接種雞胚絨毛尿囊膜進行痘斑檢查和瓊脂擴散試驗。結(jié)合臨床、剖檢和實驗所得的結(jié)果可確認該病原為傳染性喉氣管炎病毒,并提出相應防治措施。

雞傳染性喉氣管炎病毒;分離;鑒定

1 送檢病雞

2014年1月江蘇金壇某農(nóng)戶送至動物醫(yī)院發(fā)病死亡雞，通過問診，可知雞場飼養(yǎng)近900只雞，死亡40只，有出現(xiàn)張口呼吸，發(fā)病率不高，每日均可見10～20只雞出現(xiàn)張口呼吸，咳嗽。

2 臨床癥狀和剖檢癥狀

發(fā)病雞主要表現(xiàn)為精神沉郁、食欲不振、伸頸張口呼吸、咳嗽，產(chǎn)蛋下降。剖檢雞只可見喉頭氣管黏膜腫脹、充血，氣管滲出多量黏液。根據(jù)流行病學特點、臨床癥狀和病理變化可初步診斷為雞傳染性喉氣管炎。采集病變組織通過實驗室診斷方法進一步確診病因[1]。

3 實驗室檢測

3.1 病料的采集與處理

疑似病料來源于江蘇張家港某雞場，采集病禽的喉頭、氣管和肺臟等病變組織，并將樣品放入樣品袋中，并做好標記，保存于-20℃冰箱中。實驗前取出病料，在超凈臺中將采集的病料組織用剪刀剪碎、研磨，在剪碎的病料中按1：5加入含抗生素的PBS磨勻，移入數(shù)個指形管中，標記。將指形管放入液氮罐中冷凍，數(shù)十分鐘后取出融化，反復凍融三次。將凍融過的指形管8000 r/min離心10 min，取上清液作為接種雞胚的病毒材料。

3.2 雞胚接種及痘斑檢查

取上述病毒材料經(jīng)絨毛尿囊膜接種10日齡SPF雞胚，每胚接種0.2ml，石蠟封口，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育。每天觀察雞胚兩次，連續(xù)檢查7d，棄去24h內(nèi)死亡的雞胚，5d內(nèi)死亡的雞胚，放4℃冷卻后，觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無形成痘斑；7d后仍未死亡的雞胚，置于4℃冰箱冷卻，觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無形成痘斑。

雞胚接種病料后120h觀察雞胚，雞胚出現(xiàn)死亡。剖檢死亡雞胚，絨毛尿囊膜上出現(xiàn)大小不等、數(shù)量不一的白色不透明樣斑塊，胚體表面充血，發(fā)育受阻。觀察結(jié)果如圖1所示：

3.3 瓊脂擴散試驗

使用梅花形打孔器打孔，挑出孔內(nèi)瓊脂，在火焰上封底。用移液器進行加樣，中心孔加滴陽性血清，在周邊相鄰兩孔內(nèi)滴加待檢抗原及試驗用抗原對照，加樣均以加滿不溢出為度。加樣后，靜置，將平皿置37℃溫箱中反應，經(jīng)24～48 h觀察結(jié)果。

待檢抗原、對照用標準抗原與中心孔ILTV陽性血清之間，均出現(xiàn)明顯的白色沉淀線。如圖2所示：

圖2 ILTV瓊脂擴散試驗1.ILTV陽性血清 2.標準抗原 3.待檢抗原

4 小結(jié)與討論

本實驗從江蘇張家港某養(yǎng)雞場采集臨床疑似ILT的病雞喉頭氣管、肺臟等病料，通過接種雞胚絨毛尿囊膜進行痘斑檢查，結(jié)果表明該病毒在絨毛尿囊膜上可形成明顯痘斑；通過瓊脂擴散試驗表明待檢病毒與標準陽性血清之間可見明顯的沉淀線。臨床感染雞表現(xiàn)出呼吸困難、咳出含血滲出物等特征病變。經(jīng)痘斑檢查、瓊脂擴散試驗及臨床癥狀初步確定病原為傳染性喉氣管炎病毒。

由于目前對 ILT 尚無特效藥物治療，所以臨床上常用對癥綜合治療，以緩解癥狀，減少并發(fā)癥的發(fā)生。如投服清熱解毒、止咳鎮(zhèn)痛、消炎為主的中成藥以減少死亡。在飲水中添加紅霉素、強力霉素或氨茶堿等藥物防止繼發(fā)感染，促進康復。用復合多維、加倍量飲水以及適當增加飼料中的蛋白質(zhì)含量等增加機體抵抗力[2]。

[1] 卡爾尼克BW，高福等（譯）.禽病學（第9版）[M].北京：北京農(nóng)業(yè)出版社，1991：419- 426.

[2] 朱道中，辛朝安.傳染性喉氣管炎[J].養(yǎng)禽與禽病防治，1999，（3）：36-38.

圖1 經(jīng)CAM途徑接種雞胚后在CAM上形成的痘斑樣病變（箭頭指示）