程慶兵　徐小梅

GC法測定丹皮酚軟膏中丁香酚和丹皮酚的含量

程慶兵1徐小梅2

【摘要】目的：目的：為丹皮酚軟膏建立含量測定方法。方法：采用GC法，DB-WAX色譜柱，長30m，內徑0.32mm，涂布厚度5μm，N2為載氣。結果：丹皮酚A=5.9078C-79.452，相關系數(shù)r=0.995；丁香酚A=6.2926C-1.3176，相關系數(shù)r=0.998，平均回收率為98.2%和98.5%（RSD=0.29%和0.28%，n=9）。結論：該方法準確可靠，重現(xiàn)性好。可作為該制劑質量控制的方法。

【關鍵詞】丁香酚丹皮酚氣相色譜法含量測定

丹皮酚軟膏由丹皮酚和丁香油兩種原料加入適宜的基質制備而成的中藥外用制劑，具有消炎止癢作用，主要用于濕疹、皮炎、皮膚瘙癢、蚊臭蟲叮咬、紅腫等皮膚疾患，對過敏性鼻炎和防治感冒也有一定效果。本品質量標準現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第十冊［1］，在上述標準中缺少對主成分的含量測定方法，不利于制劑的質量控制。本文建立氣相色譜（GC）法測定制劑中丹皮酚的含量，該方法操作簡便、準確可靠，可用于控制該制劑質量。

1　儀器與試藥

1.1儀器AgiLent 7890A氣相色譜儀FID檢測器；xp-205電子分析天平。

1.2試藥及試劑丹皮酚對照品（中國藥品生物制品檢定所；批號：100708-200506；含量為99.9%：）；丁香酚對照品（中國藥品生物制品檢定所；批號：110725-201112；含量為99.2%：）；丹皮酚軟膏（批號：20140506、20140602、20140604，合肥立方制藥有限公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法

2.1色譜條件［2～4］色譜柱DB-WAX（30m×0.32mm× 0.50μm），柱溫：175℃，進樣口溫度：200℃，檢測其溫度250℃，載氣為氮氣，進樣量為1μl，分流比2∶1；檢測器：氫火焰離子化檢測器；理論板數(shù)不低于10000。見圖1。高效液相色譜圖見圖2。

圖1

圖2　高效液相色譜圖

2.2樣品溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對照品（中檢院，含量為99.9%）25.09mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丹皮酚對照品儲備液（2506μg/ml）；丁香酚對照品（中檢院，含量為99.2%）0.4298g置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2.5ml置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為丁香酚對照品儲備液（213.18μg/ml）。分別精密量取兩種儲備液各10ml置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品使用液（501.2μg/ml、42.635μg/ml）。

2.2.2供試品溶液的制備取本品內容物，精密稱取0.25g置燒杯中，加甲醇溶解轉移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3線性關系考察取對照品使用液，精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別吸取1μl、2μl、4μl、5μl、6μl、7μl注入氣相色譜儀，進行檢測，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。并求得線形回歸方程：丹皮酚A=5.9078C -79.452，相關系數(shù)r=0.995；丁香酚A=6.2926C-1.3176，相關系數(shù)r=0.998。結果表明丹皮酚濃度在50.12～350.84μg/ml與峰面積積分值呈良好線性關系；丁香酚濃度在4.2635～29.845μg/ml范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。見表1。

2.4重復性試驗取兩種對照品貯備液，分別精密量取4ml置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按2.1色譜條件連續(xù)進樣6次，測定丹皮酚和丁香酚峰面積A。重復性試驗結果見表2。表明重復性良好。

2.5精密度試驗取批號20140506的樣品，精密稱取0.25g，分別置6個置燒杯中，加甲醇溶解并轉移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按樣品測定項下方法測定，結果：丹皮酚的RSD值為0.10%，丁香酚的RSD值為0.26%，表明精密度良好，見表3。

表1　線性關系考察結果

表2　重復性試驗結果

表3　精密度試驗結果

2.6穩(wěn)定性試驗取混合對照品使用液，于室溫下放置0、1、2、4、8小時后進樣測定，按2.1色譜條件測定丹皮酚和丁香酚峰面積A，結果表明丹皮酚和丁香酚對照品溶液在8小時內較穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗取批號20140506的樣品，研細，稱取9份，分別置9個燒杯中，加甲醇溶解并轉移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照含量測定項下方法測定上述9份供試品溶液的丹皮酚和丁香酚含量，考察加樣的回收率。結果：丹皮酚平均回收率為98.2%，RSD為0.29%（n=9），丁香酚平均回收率為98.5%，RSD為0.28%（n=9），表明本法測定丹皮酚和丁香酚的含量準確性較高，結果見表4、5。

表4　回收率試驗結果（丹皮酚）

表5　回收率試驗結果（丁香酚）

2.8樣品中丹皮酚和丁香酚的含量測定取本品內容物，精密稱取0.25g置燒杯中，加甲醇溶解并轉移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按2.1色譜條件測定丹皮酚和丁香酚的峰面積A，計算樣品中丹皮酚和丁香酚的含量，結果見表6。

表6　樣品含量測定結果

3　討論

通過試驗，確定了丹皮酚軟膏的含量測定方法，測定結果可靠，方法簡便，為丹皮酚軟膏的質量控制提供了依據(jù)。比較了甲醇、乙醇、正己烷溶解的效果，結果乙醇溶解較差，正己烷提取不充分，選擇甲醇作為溶劑。采用GC法測定丹皮酚軟膏的含量與UV標準曲線法比較，操作方法簡便、準確、重現(xiàn)性好［5］。不同批號的丹皮酚軟膏的含量測定結果表明，丹皮酚和丁香酚的含量，精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率都較好，所以，GC法可作為藥品質量分析檢驗方法用來有效控制丹皮酚軟膏的質量。

本研究建立了GC法測定丹皮酚軟膏含量的方法，通過大量試驗得出最優(yōu)的色譜條件。本法具有樣品處理簡單、分析周期短、重現(xiàn)性好等優(yōu)點?？勺鳛樵撝苿┵|量控制的方法之一。

參考文獻

1衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十冊 ［S］.Z10～30.

2王海英.氣相色譜法測定丁香油中丁香酚含量［J］.哈爾濱醫(yī)藥，2009，29（4）：20～21.

3劉向紅.氣相色譜法測定丹皮酚原料及片劑的含量［J］.廣西醫(yī)科大學學報，2010，27（5）：760～762.

4茅海瓊，陳仲益，毛亞珠.毛細管氣相色譜法測定丁硼乳膏中丁香酚的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2007，l11（7）：602～603.

5昝瓊.高效液相色譜法測定丹皮酚軟膏中丹皮酚的含量研究［J］.中國藥物經(jīng)濟學，2012（2）：169～170.

（/編審：劉文華）

2015-03-21收稿，2015-05-26修回

【中圖分類號】R286

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-8054（2015）03-0073-03

作者單位：1.合肥市食品藥品檢驗中心合肥238000 2.安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院合肥230031

Content determination of Ozagrel Sodium for injection by HPLC method

1.Hefei food and Drug Inspection Center，Hefei 238000，Anhui 2.Anhui Provincial Hospital of traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui
CHENG Qing-bing1，XU Xiao-mei2

Abstract：Objective：To establish a method for content determination of paeonol ointment.Methods：Using the method of GC，DB-idea for chromatographic column，30 m long，the inner diameter of 0.32 mm，the thickness of the coating 5 microns，N2 as carrier gas.Results：A=5.9078 C were-79.452，correlation coefficient r=0.995；Eugenol A=6.2926-1.3176 C，correlation coefficient r=0.998.the average recovery rate was 98.2%and 98.5%（RSD=0.29% and 0.28%，n=9）.Conclusion：the method is accurate and reliable，reproducible，which can be used as one of the methods for quality control of this preparation.

Key Words：Eugenol；Dan phenol；Gas chromatography；Content determination