汪晶華等

[摘要] 目的 探討腹膜透析和血液透析對終末期腎病患者自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）和T細(xì)胞亞群的影響。 方法 選取2012年2月～2014年2月解放軍白求恩國際和平醫(yī)院腎內(nèi)科收治的終末期腎病患者88例，根據(jù)透析方式分為腹透組（44例，采用非臥床持續(xù)性腹膜透析治療）和血透組（44例，采用常規(guī)血液透析治療）。于透析前及透析6個(gè)月后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測兩組患者血液中CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）比例以及NK細(xì)胞比例，NK細(xì)胞活性采用MTT比色法檢測。 結(jié)果 腹透組和血透組治療前CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、Treg細(xì)胞比例、NK細(xì)胞比例和活性分別為（30.05±3.96）%、（25.13±3.14）%、（1.42±0.25）、（5.96±1.95）%、（11.5±1.6）%、（80.6±5.6）%和（30.86±3.54）%、（24.25±3.40）%、（1.39±0.29）、（5.82±2.06）%，（11.8±1.7）%、（78.6±5.3）%，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。治療6個(gè)月后兩組CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、Treg細(xì)胞比例以及NK細(xì)胞比例、活性分別為（25.32±2.41）%、（26.42±3.78）%、（1.25±0.16）、（4.33±1.45）%、（8.6±1.1）%、（56.7±4.4）%和（19.88±2.68）%、（26.16±3.74）%、（1.05±0.25）、（3.15±1.05）%、（6.4±0.8）%、（44.5±3.8）%，兩組較治療前均有顯著改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；且血透組較腹透組改善更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 腹膜透析和血液透析均可一定程度上調(diào)節(jié)終末期腎病患者NK細(xì)胞和T細(xì)胞亞群比例，改善細(xì)胞免疫功能，腹膜透析效果更顯著。

[關(guān)鍵詞] 終末期腎??；腹膜透析；血液透析；NK細(xì)胞；T細(xì)胞

[中圖分類號] R459.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2015）06（c）-0047-04

終末期腎病（end-stage renal disease）是慢性腎臟病發(fā)展的最終表現(xiàn)，其危害性僅次于心血管疾病以及惡性腫瘤[1]。終末期腎病患者可出現(xiàn)免疫功能紊亂，包括免疫器官、細(xì)胞、細(xì)胞因子和基因表達(dá)等多方面問題，其中細(xì)胞免疫受損尤為嚴(yán)重。腎移植是治療終末期腎病的有效措施，但受到器官來源、費(fèi)用等多方面的影響，大部分患者無法接受治療。目前中終末期腎臟病的主要治療方法為腹膜透析以及血液透析[2]。為了探討腹膜透析以及血液透析對患者免疫功能的影響，為臨床上治療終末期腎臟病提供理論依據(jù)，本研究對88例患者進(jìn)行了對比研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年2月～2014年2月解放軍白求恩國際和平醫(yī)院腎內(nèi)科收治的終末期腎病患者88例作為研究對象。入選標(biāo)準(zhǔn)：符合美國腎臟病基金會關(guān)于終末期腎臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，腎小球?yàn)V過率<15 mL/min；一般情況良好，無腹膜炎、心力衰竭、消化道出血、感染等情況；治療依從性好，可按醫(yī)囑進(jìn)行治療以及服用藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝功能損害；近1年內(nèi)有過大型手術(shù)史；近3個(gè)月內(nèi)應(yīng)用過影響免疫系統(tǒng)的藥物或激素；合并免疫系統(tǒng)疾病；精神病患者或妊娠期婦女。88例患者按照治療方式分為腹透組和血透組，每組各44例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理研究委員會批準(zhǔn)通過，所有患者和/或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 治療方法

患者入院后收集性別、年齡、體重指數(shù)、血生化指標(biāo)等一般資料。腹透組患者采用非臥床持續(xù)性腹膜透析治療，雙滌綸套透析管為Baxter公司生產(chǎn)，手術(shù)置入后行間斷性透析，術(shù)后4 d采用不臥床持續(xù)性腹膜透析，透析液采用1.5%的乳酸鹽雙聯(lián)腹透液，每日4袋。血透組采用常規(guī)血液透析治療，透析機(jī)為德國費(fèi)森尤斯Fresenius 4008s透析機(jī)，透析液為碳酸氫鹽溶液。設(shè)定透析液流量500 mL/min，血流量250 mL/min，透析有效面積1.6 m2。透析過程中給予透析常規(guī)對癥支持治療，包括鈣離子拮抗劑、鐵劑、葉酸、維生素等。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

分別于入院后及透析6個(gè)月后采集清晨空腹靜脈血10 mL，加入紅細(xì)胞裂解液使得紅細(xì)胞全部裂解，在1200 r/min下離心5 min，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗滌2次，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/mL。采用流式細(xì)胞數(shù)分析細(xì)胞亞群變化，上述制備的樣本分為4份，1200 r/min離心5 min后取沉淀，根據(jù)說明書進(jìn)行細(xì)胞亞群分析，計(jì)算T淋巴細(xì)胞亞群比例。自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活性采用MTT比色法檢測，從患者外周血中分離NK 1.1陽性的NK細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×105個(gè)/mL，作為效應(yīng)細(xì)胞。將濃度為1×105個(gè)/mL的K562細(xì)胞作為靶細(xì)胞。隨后將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞各100 μL按照體積比1∶1加入96孔板中，作為實(shí)驗(yàn)孔，同時(shí)設(shè)立效應(yīng)細(xì)胞、靶細(xì)胞對照孔，培養(yǎng)20 h加入10 μL MTT，隨后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h，培養(yǎng)箱內(nèi)二氧化碳濃度為5%，棄上清液加入100 μL二甲基亞砜（DMSO），震蕩混勻后用酶標(biāo)儀檢測光密度（optical density，OD）。每孔重復(fù)檢測3次，計(jì)算NK細(xì)胞活性。NK細(xì)胞活性=[1-（實(shí)驗(yàn)孔OD值-效應(yīng)對照組孔OD值）/靶細(xì)胞對照組孔OD值]×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡、體重指數(shù)、血生化指標(biāo)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 兩組T細(xì)胞亞群變化

兩組治療前CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、Treg細(xì)胞比例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；治療6個(gè)月后CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、Treg細(xì)胞比例均較治療前顯著改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；且血透組較腹透組改善更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 兩組NK細(xì)胞變化情況

兩組治療前NK細(xì)胞比例、活性比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。治療6個(gè)月后，兩組NK細(xì)胞比例、活性均較治療前顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；且血透組較腹透組下降更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表3。

3 討論

終末期腎病患者往往并發(fā)感染，嚴(yán)重者可出現(xiàn)死亡。并發(fā)感染的主要原因就是終末期腎病患者存在嚴(yán)重免疫功能缺陷[4-5]。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)重要的組成部分之一，具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫、調(diào)節(jié)免疫功能的作用，并在適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中起到重要作用。有研究[6]指出，終末期腎病患者存在嚴(yán)重的T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)和功能異常。隨著透析技術(shù)的不斷發(fā)展，慢性腎功能衰竭患者的存活率越來越高，長期透析的患者也越來越多[7]。目前，治療終末期腎病患者的主要方法為腹透透析和血液透析，臨床上已取得了明確的療效，但隨之而來的是免疫力低下等各種遠(yuǎn)期并發(fā)癥[8-9]。本研究著重比較了這兩種方法對于患者NK細(xì)胞和T細(xì)胞亞群的影響。

有研究[10-12]指出，終末期腎臟病患者往往體液免疫基本正常，但細(xì)胞免疫存在不同的功能障礙。T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫反應(yīng)中較為重要的環(huán)節(jié)之一，主要負(fù)責(zé)特異性細(xì)胞免疫以及免疫功能的調(diào)節(jié)，根據(jù)表型和功能的不同可分為輔助性T細(xì)胞和抑制性/細(xì)胞毒T細(xì)胞兩個(gè)亞群，一般采用抗體檢測相應(yīng)T細(xì)胞的總數(shù)。許多先天性或后天性疾病均可導(dǎo)致輔助性T細(xì)胞下降。在免疫功能異常的患者中CD4 T細(xì)胞可減少，而CD8細(xì)胞可增多，因此CD4/CD8比值可作為評價(jià)患者細(xì)胞免疫功能的主要指標(biāo)[13-15]。不同于T淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞由骨髓造血干細(xì)胞直接分化發(fā)育而來，其在骨髓微環(huán)境中發(fā)育成熟，與胸腺無關(guān)，因此其被稱為第三類淋巴細(xì)胞[16]。NK細(xì)胞具有細(xì)胞體積大的特點(diǎn)，其內(nèi)還含有嗜苯胺顆粒，該顆粒中具有穿孔素，可直接溶解破壞靶細(xì)胞。此外，其還可激活內(nèi)源性內(nèi)切酶系統(tǒng)，通過裂解靶細(xì)胞DNA導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。因此，NK細(xì)胞在細(xì)胞免疫中也發(fā)揮著重要作用，NK細(xì)胞比例、活性在判斷細(xì)胞免疫功能方面具有重要意義。

本研究中發(fā)現(xiàn)，腹膜透析與血液透析均會使患者CD4 T淋巴細(xì)胞、CD8 T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8、Treg細(xì)胞比例，NK細(xì)胞比例、活性顯著改善（P < 0.05），且行血液透析患者改善更為顯著（P < 0.05）。這一結(jié)果提示腹膜透析和血液透析都能有效改善患者病情，而腹膜透析相對于血液透析療效更好。孫續(xù)祿[17]在研究血液透析對尿毒癥患者T細(xì)胞亞群的影響中指出，尿毒癥患者均有不同程度的T細(xì)胞亞群比例異常，相對于未行透析治療的患者，行血液透析患者T細(xì)胞亞群比例更為接近正常水平，提示透析可一定程度上改善患者T細(xì)胞亞群比例，但無法使患者T細(xì)胞功能恢復(fù)至正常水平。通過閱讀相關(guān)文獻(xiàn)[18-20]以及結(jié)合臨床實(shí)際工作，本研究認(rèn)為透析對于患者免疫功能的影響主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①透析治療可有效清除患者血清中的毒素，從而改善甲狀旁腺功能亢進(jìn)狀態(tài)，降低了血清中淋巴細(xì)胞抑制物濃度；②透析可改善患者體內(nèi)鈣磷代謝紊亂狀態(tài)，改善其對于吞噬細(xì)胞的聚集抑制；③透析規(guī)律治療后，患者腎性貧血狀態(tài)可得到有效的改善，紅細(xì)胞數(shù)目可有明顯增加，而紅細(xì)胞也具有一定的免疫功能，同時(shí)也可參與到淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)控中，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。本研究中行血液透析對于改善患者免疫功能的效果不如腹膜透析患者，推測這可能與腹膜透析不間斷持續(xù)性透析有關(guān)[21-22]。腹膜透析可持續(xù)清除終末期腎病患者體內(nèi)毒素，且不存在血液透析過程中慢性失血的問題，更有利于改善貧血狀態(tài)。因此，腹膜透析更有利于患者細(xì)胞免疫功能的恢復(fù)，具體機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究證實(shí)。

綜上所述，腹膜透析和血液透析可一定程度上調(diào)節(jié)終末期腎病患者NK細(xì)胞和T細(xì)胞亞群比例，改善細(xì)胞免疫功能，但無法使患者恢復(fù)至正常水平。

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（收稿日期：2015-03-15 本文編輯：蘇 暢）