何秀娟 黃慶愿(武警青?？傟犪t(yī)院內(nèi)科，青海 西寧 80000)

非小細(xì)胞肺癌是與小細(xì)胞肺癌有明顯形態(tài)和基因表達(dá)差別。病變進(jìn)展中多種基因和蛋白表達(dá)失調(diào)〔1〕。絲氨酸蛋白激酶抑制劑KazalⅠ型(SPINK1)又稱為腫瘤相關(guān)性的胰蛋白酶抑制劑，在惡性進(jìn)展腫瘤中高表達(dá)，被認(rèn)為與病變進(jìn)程和預(yù)后相關(guān)〔2〕。白細(xì)胞分化抗原(CD)147作為免疫球蛋白家族的重要成員，可以在細(xì)胞表面表達(dá)，并發(fā)揮促進(jìn)腫瘤生長的生物學(xué)作用〔3，4〕。上皮型黏附蛋白(E-cadherin)是參與細(xì)胞間連接和黏附的蛋白，在腫瘤中常表達(dá)下降或丟失〔5，6〕。本實驗檢測非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后組織SPINK1、CD147和E-cadherin的表達(dá)，分析其關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2013年12月我院確診并手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌患者作為觀察組，留取患者的臨床資料及術(shù)后腫瘤組織的蠟塊，共103例，均符合WHO中關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理科主治醫(yī)師再次閱片確診。其中男53例，女50例;年齡57～87歲，平均(67.8±6.9)歲。收集距腫瘤邊緣＞3 cm的正常支氣管黏膜組織76例作為對照組，其中男40例，女36例;年齡58～86歲，平均(66.7±6.1)歲。兩組在一般臨床資料的比較中差別無顯著性。

1.2 SPINK1、CD147和E-cadherin蛋白的檢測方法 試驗用SPINK1、CD147和 E-cadherin試劑均為濃縮液。在正式實驗前，SPINK1、CD147和E-cadherin均按不同比例稀釋后預(yù)實驗，選擇最理想的配比濃度正式實驗。SPINK1、CD147和E-cadherin蛋白檢測應(yīng)用免疫組化二步法，DAB染色。實驗嚴(yán)格按說明書操作，并由病理科主管技師完成，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 SPINK1、CD147和 E-cadherin結(jié)果的判讀 SPINK1、CD147的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)，E-cadherin的陽性部位為細(xì)胞膜。選取5個高倍(400倍)視野，計算上皮細(xì)胞的總數(shù)和陽性細(xì)胞總數(shù)，計算陽性率。SPINK1、CD147和 E-cadherin均以陽性率≥5%計為陽性，以陽性率＜5%計為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中SPINK1、CD147和E-cadherin的表達(dá)比較 與對照組比較，觀察組中SPINK1〔48.54%(50/103)vs 2.63%(2/76)〕、CD147〔68.93%(71/103)vs 13.16%(10/76)〕高表達(dá)、E-cadherin〔33.01%(34/103)vs 92.11%(70/76)〕低表達(dá)(均P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組SPINK1、CD147和E-cadherin在不同臨床特征中的表達(dá)差別 觀察組中SPINK1、CD147和E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死、胸膜累犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管浸潤相關(guān)。見表1。

表1 觀察組SPINK1、CD147和E-cadherin在不同臨床特征中的陽性表達(dá)差別〔n(%)〕

2.3 觀察組中SPINK1、CD147和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性觀察組中 SPINK1和 E-cadherin(r= －0.52，P=0.013 2)、CD147和E-cadherin(r=－0.45，P=0.038 6)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是肺癌中最多見的類型，包括鱗癌、腺癌等。其危險因素較多，其中吸煙和職業(yè)暴露是重要的危險因素。近年相關(guān)研究認(rèn)為復(fù)雜的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)行為表達(dá)失調(diào)是重要的促進(jìn)因素〔7〕。SPINK1最初作為一種胰蛋白酶抑制劑在胰腺組織和胰腺相關(guān)疾病中檢測到高表達(dá)，隨后學(xué)者在其他腫瘤中出發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)〔8〕。由于SPINK1蛋白的結(jié)構(gòu)和表皮生長因子有50%的同源性，因此其功能可能與表皮生長因子相似〔9〕。也有學(xué)者認(rèn)為SPINK1可能具有生長因子和蛋白酶抑制的雙重作用特點(diǎn)，促進(jìn)腫瘤的增殖及侵襲〔10，11〕。CD147作為細(xì)胞的黏附蛋白，不僅可以調(diào)節(jié)單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性，還對免疫應(yīng)答、生殖等生理過程有一定影響〔12〕。CD147特異性的功能是在腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)的嵌合上。當(dāng)CD147在腫瘤的表達(dá)升高時，使脫離原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)和脈管的黏附作用增強(qiáng)，易于播散〔13，14〕。Wu 等〔15〕認(rèn)為 CD147 可以通過轉(zhuǎn)化因子通路途徑促進(jìn)上皮和間質(zhì)的轉(zhuǎn)化，使腫瘤細(xì)胞更易于侵入間質(zhì)，轉(zhuǎn)移潛能升高。與CD147一樣，E-cadherin也是機(jī)體的黏附蛋白，但是E-cadherin主要是分布于正常上皮細(xì)胞間，不僅在組織構(gòu)成、細(xì)胞連接有重要作用，還對細(xì)胞間信息交換起重要作用〔16〕。腫瘤進(jìn)展中E-cadherin表達(dá)下調(diào)，腫瘤細(xì)胞之間的黏附力下降、連接松動，為腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶創(chuàng)造了重要條件，此時轉(zhuǎn)移潛能增加〔17，18〕。

本研究結(jié)果提示SPINK1、CD147和E-cadherin異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生過程。SPINK1和CD147均與E-cadherin的表達(dá)具有協(xié)同作用。SPINK1在腫瘤中高表達(dá)，可能是作為一種致病因子或一種修飾因子，降低了腫瘤發(fā)病的閾值或與其他的基因蛋白一起促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生〔19〕。也有學(xué)者認(rèn)為是細(xì)胞癌變導(dǎo)致SPINK1蛋白部位及強(qiáng)度表達(dá)發(fā)生變化出現(xiàn)了這一結(jié)果〔20，21〕。本實驗結(jié)果提示SPINK1促進(jìn)腫瘤進(jìn)展時可能對E-cadherin進(jìn)行一定的調(diào)節(jié)，使腫瘤上皮細(xì)胞間松動，細(xì)胞連接不穩(wěn)固，易于播散。CD147與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，研究認(rèn)為CD147可通過增加透明質(zhì)烷的分泌量來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增長，通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子的產(chǎn)生來促進(jìn)間質(zhì)的血管新生〔22〕，也可能通過調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的連接使腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)構(gòu)成及功能發(fā)生變化〔23〕。本研究結(jié)果提示SPINK1、CD147和E-cadherin三種蛋白異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長、胸膜脈管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腫瘤性壞死、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤常提示腫瘤預(yù)后不良，因此SPINK1、CD147和E-cadherin的表達(dá)在一定程度可以提示患者的生物學(xué)行為和預(yù)后，即SPINK1和CD147高表達(dá)、E-cadherin低表達(dá)非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后差。

綜上，非小細(xì)胞肺癌術(shù)后組織SPINK1和CD147高表達(dá)，E-cadherin低表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，SPINK1和CD147在發(fā)揮作用過程中可能與對E-cadherin的調(diào)節(jié)有關(guān)。

1 Kolesnik AP，Shevchenko AI，Tumanskii VA，et al.Effect of the intercellular adhesion molecule E-cadherin on the prognosis of non-small cell lung cancer〔J〕.Arkh Patol，2013;75(5):30-3.

2 李海深，曹 云，錢朝南.SPINK家族與人類疾病〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2010;30(5):550-3.

3 Gao J，Hu Z，Liu J，et al.Expression of CD147 and Lewis y antigen in ovarian cancer and their relationship to drug resistance〔J〕.Med Oncol，2014;31(5):920.

4 王曉澍，游 潮，孫曉川.MCT1、CD147在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)、相性及其與預(yù)后的關(guān)系〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010;32(9):985-7.

5 Du J，Wu Y，Liu Y，et al.E-cadherin is critical for SC1-induced colony growth of F9 embryonic carcinoma cells〔J〕.Cell Physiol Biochem，2014;33(2):501-12.

6 Ahmed RA，Shawky Ael-A，Hamed RH，et al.Prognostic significance of cyclin D1 and E-cadherin expression in laryngeal squamous cell carcinoma〔J〕.Pathol Oncol Res，2014;20(3):625-33.

7 Stewart DJ.Wnt signaling pathway in non-small cell lung cancer〔J〕.J Natl Cancer Inst，2014;106(1):356.

8 Marshall A，Lukk M，Kutter C，et al.Global gene expression profiling reveals SPINK1 as a potential hepatocellular carcinoma marker〔J〕.PLoS One，2013;8(3):e59459.

9 Raty S，Sand J，Laukkarinen J，et al.Cyst fluid SPINK1 may help to differentiate benign and potentially malignant cystic pancreatic lesions〔J〕.Pancreatology，2013;13(5):530-3.

10 Bhalla R，Kunju LP，Tomlins SA，et al.Novel dual-color immunohistochemical methods for detecting ERG-PTEN and ERG-SPINK1 status in prostate carcinoma〔J〕.Mod Pathol，2013;26(6):835-48.

11 Matsubayashi H，F(xiàn)ukushima N，Sato N，et al.Polymorphisms of SPINK1 N34S and CFTR in patients with sporadic and familial pancreatic cancer〔J〕.Cancer Biol Ther，2003;2(6):652-5.

12 Zhou S，Zhou H，Walian PJ，et al.The discovery and role of CD147 as a subunit of gamma-secretase complex〔J〕.Drug News Perspect，2006;19(3):133-8.

13 Fan X，Wu W，Shi H，et al.RNA interference targeting CD147 inhibits the invasion of human cervical squamous carcinoma cells by downregulating MMP-9〔J〕.Cell Biol Int，2013;37(7):737-41.

14 Grupp K，Hohne TS，Prien K，et al.Reduced CD147 expression is linked to ERG fusion-positive prostate cancers but lacks substantial impact on PSA recurrence in patients treated by radical prostatectomy〔J〕.Exp Mol Pathol，2013;95(2):227-34.

15 Wu J，Ru NY，Zhang Y，et al.HAb18G/CD147 promotes epithelial-mesenchymal transition through TGF-β signaling and is transcriptionally regulated by Slug〔J〕.Oncogene，2011，30(43):4410-27.

16 Breier G，Grosser M，Rezaei M.Endothelial cadherins in cancer〔J〕.Cell Tissue Res，2014;355(3):523-7.

17 Kim JH，Choi KY，Lee DJ，et al.Loss of heterozygosities in five tumor suppressor genes(FHIT Gene，p16，pRb，E-Cadherin and p53)in thyroid tumors〔J〕.Clin Exp Otorhinolaryngol，2014;7(1):53-8.

18 Luo SL，Xie YG，Li Z，et al.E-cadherin expression and prognosis of oral cancer:a meta-analysis〔J〕.Tumour Biol，2014;35(6):5533-7.

19 Pelaez-Luna M，Robles-Diaz G，Canizales-Quinteros S，et al.PRSS1 and SPINK1 mutations in idiopathic chronic and recurrent acute pancreatitis〔J〕.World J Gastroenterol，2014;20(33):11788-92.

20 張 敏，王銀萍，倪勁松，等.CFTR及SPINK1蛋白在慢性胰腺炎及胰腺癌中的表達(dá)及其意義〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2011;15(10):1625-7.

21 Sinha A，Cotsalas D，Akshintala VS，et al.Pedigree of a kindred with transheterozygous PRSS1 R122C and SPINK1 N34S mutations〔J〕.Pancreas，2014;43(6):974-6.

22 Lee CL，Lam MP，Lam KK，et al.Identification of CD147(basigin)as a mediator of trophoblast functions〔J〕.Hum Reprod，2013;28(11):2920-9.

23 Yang H，Chen B.CD147 in ovarian and other cancers〔J〕.Int J Gynecol Cancer，2013;23(1):2-8.