蔡洪玲 陳福

·調(diào)查研究·

澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量測定

蔡洪玲 陳福

目的 調(diào)查國內(nèi)6個廠家的澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量。方法 采用高效液相色譜法測定，選用SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)色譜柱，流動相以乙腈-水等梯度洗脫，流速：1.0 mL/min，檢測波長為208 nm，柱溫：30 ℃。結(jié)果 6個廠家的23-乙酰澤瀉醇B分別為：0.175 6、2.074 9、0.220 1、0.438 6、0.112 5、0.190 7 mg/g。結(jié)論 6個廠家的澤瀉配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B的含量差異顯著。

澤瀉；配方顆粒；高效液相色譜法；23-乙酰澤瀉醇B；含量

中藥配方顆粒是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，運(yùn)用現(xiàn)代生產(chǎn)技術(shù)手段，取傳統(tǒng)中藥飲片為原料，依據(jù)多方研究形成的生產(chǎn)工藝制成供臨床調(diào)劑使用的粉狀或顆粒狀產(chǎn)品。配方顆粒是中藥飲片改革的一種新形式，具有服用、攜帶、貯藏、組方方便等特點(diǎn)[1]，在臨床上得到越來越多人的認(rèn)可。澤瀉為澤瀉科穿心蓮屬植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖，為《中國藥典》所收載品種[2]，福建省地道中藥材，具有利水滲濕，泄熱通淋之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究，澤瀉還具有降低血清總膽固醇及三酰甘油含量，減緩動脈粥樣硬化形成等現(xiàn)代運(yùn)用。23-乙酰澤瀉醇B(C32H50O5)是從中藥澤瀉中分離出的主要有效成分，也是澤瀉的專屬性物質(zhì)之一[3]。在道地藥材中含量較高，可作為其提取工藝及相關(guān)制劑的主要質(zhì)控指標(biāo)。目前，國內(nèi)已有6家企業(yè)生產(chǎn)澤瀉配方顆粒，但對6個廠家生產(chǎn)的澤瀉配方顆粒質(zhì)量評價的研究尚未見諸公開文獻(xiàn)，為促進(jìn)澤瀉配方顆粒的評價質(zhì)量體系建立，收集了6個廠家澤瀉配方顆粒，并對配方顆粒中23-乙酰澤瀉醇B含量進(jìn)行了測定。

1 儀器、材料與試劑

1.1 儀器 e2695型高效液相色譜分析儀，美國Waters公司；2998型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 材料與試劑 23-乙酰澤瀉醇B對照品(中國食品藥品研究院，批號111846-201203)；乙腈(色譜純Merck)，甲醇(色譜純國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；水為純凈水。澤瀉配方顆粒分別購自北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號13000881；江陰天江藥業(yè)有限公司，批號1304054；華潤三九醫(yī)藥股份有限公司，批號1310001S；廣東一方制藥有限公司，批號1306044；培力香港集團(tuán)附屬培力(南寧)藥業(yè)有限公司，批號A1300596-02；四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，批號12012297。

2 方法與結(jié)果

2.1 高效液相色譜條件 色譜柱：SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：208 nm。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取置五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的對照品適量，用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，得到濃度為238 μg/mL的對照品溶液，冷藏，避光備用。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取各廠家澤瀉配方顆粒0.20 g，用少許甲醇研磨并超聲20 min完全轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶內(nèi)，甲醇定容后，－20℃冷凍20 min，4 000 r/min離心15 min，除去不溶物，上清液用0.22 μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液0.1、0.5、1、4、8、10、12、20 μL進(jìn)樣。以色譜峰面積(Y)對進(jìn)樣量μg(X)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)?；貧w方程為y＝943 278.9x－21 644.3，R2＝0.999 7。結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.023 8～4.76 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.2 系統(tǒng)適用性試驗 在上述色譜條件下分別進(jìn)樣23-乙酰澤瀉醇B對照品溶液以及供試品溶液。色譜圖(圖2～3)。結(jié)果顯示23-乙酰澤瀉醇B分離度、峰型較好，專屬性強(qiáng)。

2.4.3 精密度考察 精密吸取同一對照品溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，并計算峰面積RSD。結(jié)果23-乙酰澤瀉醇B的峰面積RSD為0.96%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 重現(xiàn)性考察 取同一批藥材制備的提取物，按照“供試品溶液制備方法”平行制備5份供試品液，在上述色譜條件下分析測定，計算23-乙酰澤瀉醇B含量，含量RSD為1.09%，表明本法重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率考察 采用加樣回收率方法，取已知含量的澤瀉配方顆粒0.20 g，精密稱定9份，平均分成3組，分別加入低、中、高3個濃度的對照品溶液，相當(dāng)于含量的80%、100%、120%，按“供試品溶液制備方法”制備，在上述色譜條件下測定，各成分回收率在99.92%～102.69%，RSD為1.42%。結(jié)果(表1)。

2.4.6 樣品含量測定 按“供試品溶液制備方法”各制備供試品3批，在上述色譜條件下測定，記錄色譜峰面積，按照外標(biāo)法計算23-乙酰澤瀉醇B的含量。結(jié)果(表2)。

圖1 23-乙酰澤瀉醇B標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 對照品溶液23-乙酰澤瀉醇B色譜圖

圖3 供試品溶液中23-乙酰澤瀉醇B色譜圖

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n＝3)

表2 樣品測定結(jié)果(n＝3)

3 討論

由于6個廠家的每克配方顆粒相當(dāng)于原藥材飲片的當(dāng)量不盡相同，因此在對6個廠家的澤瀉配方顆粒中的23-乙酰澤瀉醇B的含量進(jìn)行比較時，對每克原藥材飲片所提取的23-乙酰澤瀉醇B的含量進(jìn)行了換算，結(jié)果表明：6個廠家樣品的23-乙酰澤瀉醇含量差異顯著，含量最低與含量最高的差異可達(dá)10多倍(表2)，這可能與6個廠家的澤瀉原藥材飲片選取有關(guān)，23-乙酰澤瀉醇B的含量可能也受到了澤瀉種子、產(chǎn)地、采收季節(jié)、儲存時間等方面的影響[4]，建議相關(guān)廠家對原材料應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量把關(guān)，選取優(yōu)質(zhì)藥材原料從而保證配方顆粒的優(yōu)質(zhì)。

《中國藥典》2010版規(guī)定澤瀉飲片含23-乙酰澤瀉醇B(C32H50O5)不得少于0.040%。從本研究的結(jié)果看，6個廠家澤瀉配方顆粒中的23-乙酰澤瀉醇B轉(zhuǎn)移率均不高；觀察6個廠家的澤瀉配方顆粒的性狀，也有差異，提示不同廠家的生產(chǎn)工藝可能有所不同，這是導(dǎo)致23-乙酰澤瀉醇B含量差異的重要原因。傳統(tǒng)中藥以水煎為主，配方顆粒是一種新型劑型，不同的生產(chǎn)工藝對成分的溶出率也不同，澤瀉除了含有以23-乙酰澤瀉醇B為主的三萜類化合物，還含有澤瀉醇和環(huán)氧澤瀉烯等倍半萜、二萜類化合物及其他有效成分[5]，中藥的功效是綜合功效，隨著澤瀉臨床應(yīng)用的新發(fā)展，配方顆料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該考慮哪些成分，如何規(guī)范生產(chǎn)工藝，保證臨床用藥的均一性，是廣大中藥工作者研究的一個方向。

[1]蔡樂，劉萍，郭桂明，等.不同廠家茜草配方顆粒中大葉茜草素含量的比較[J].北京中醫(yī)藥，2011，30(11)：856-858.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：212-213.

[3]肖飛艷，馮育林，楊世林，等.澤瀉化學(xué)成分的研究進(jìn)展[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(5)：491-495.

[4]郭改革，李長偉，黃振軍，等.種子與生態(tài)環(huán)境對澤瀉塊莖23-乙酰澤瀉醇B含量的影響[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2009，7(12)：63-64.

[5]邱美榕，馬少丹，阮時寶.澤瀉湯組成藥物化學(xué)成分的研究現(xiàn)狀[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2013，11(22)：119-120.

Objective To investigate the content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers.Methods High performance liquid chromatography(HPLC)was adopted to determine the content；Chromatographic column was SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)；The mobile phase was gradiently eluted by acetonitrile and water with a flow rate of 1.0 mL/min；The detection wavelength was 208 nm and the column temperature was 30℃.Results The content of Alisol B 23-acetate from six domestic manufacturers was respectively 0.175 6，2.074 9，0.220 1，0.438 6，0.112 5，and 0.190 7 mg/g.Conclusion The content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers was significantly different.

Rhizoma Alismatis；Formula Granule；HPLC；Alisol B 23-acetate；Content

2014-09-05)

1005-619X(2015)02-0183-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.02.035

350011福建省金雞山溫泉療養(yǎng)院(蔡洪玲)；350003 福建省中醫(yī)藥研究院門診部藥房(陳福)

蔡洪玲