胡珊 王永清

川崎病外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性分析

胡珊 王永清

目的 探討川崎病（KD）患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性，為川崎病免疫學機制研究提供參考。方法 47例KD患兒及對照組51例支氣管肺炎患兒，入院后同時采集外周血檢測淋巴細胞計數(shù)、比例，以及T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比。分別對各項結果進行相關性分析。結果 川崎病組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05）；川崎病組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+及CD 4+呈正相關（r=0.38，P＜0.01，r=0.28，P＜0.05；r=0.51，P＜0.01，r=0.33，P＜0.05）。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。結論 外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性結果提示T淋巴細胞參與川崎病急性期的免疫反應機制，對川崎病發(fā)病機制研究可能有輔助意義。

川崎病；淋巴細胞；T細胞亞群

川崎?。╧awasaki disease，KD）是一種病因未明的好發(fā)于5歲以下兒童以全身血管炎為主要病變的急性發(fā)熱出疹性疾病，以免疫系統(tǒng)激活和血管內(nèi)皮系統(tǒng)廣泛損害為特征，已成為兒童后天性心臟病的重要因素之一[1]。由T細胞介導的免疫應答機制，尤其表現(xiàn)在T淋巴細胞引起的特異性免疫紊亂現(xiàn)象，在KD發(fā)病機制研究中引起一定的關注。本研究對KD住院患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的檢測結果進行相關性分析總結，以觀察KD患兒急性期免疫功能狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取常州市第一人民醫(yī)院兒科于2004年1月～2012年12月確診KD的47例住院患兒臨床資料作為KD組，所有病例均符合美國心臟病協(xié)會2004年川崎病臨床診斷指南修訂的KD診斷標準[2]。其中男27例，女20例，男女比例為1.35∶1；年齡6個月～12歲，平均年齡（33.3±28.1）個月；住院時間9～21 d，平均（14.3±3.7）d。入院時冠狀動脈病變（coronary artery lesion，CALs）發(fā)生率為15%（7/47）。選取同期51例支氣管肺炎住院患兒（排除支原體肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎等）作為對照組，其中男27例，女24例，男女比例為1.17∶1；年齡2個月～7歲，平均年齡（30.4±21.3）個月；住院時間5～15 d，平均（7.4±2.3）d。2組患兒一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 檢測方法 2組患兒入院后同時抽取外周血檢測淋巴細胞及T細胞亞群。采用流式與激光技術檢測外周血淋巴細胞計數(shù)及百分比，儀器來源于日本Sysmex XE-2100型號檢測儀。采用流式細胞儀檢測T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比，儀器來源于美國BD FACSCalibur型號檢測儀。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料用“x±s”表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。數(shù)據(jù)采用雙變量線性相關分析，分析結果以Pearson相關系數(shù)r表示，-1＜r＜0表示負相關，0＜r＜1表示正相關。線性趨勢采用散點圖表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較，差異無統(tǒng)計學意義。見表1。KD組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢散點圖呈近似負相關。KD組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關，線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。見表2、表3。線性趨勢見散點圖（圖1～6）。

3 討論

近年來KD發(fā)病率呈逐年增長趨勢，但其發(fā)病機制尚未完全明確[3]，大多數(shù)學者認為T淋巴細胞和B淋巴細胞介導的免疫應答及炎性細胞因子的級聯(lián)放大效應引起全身血管炎性損傷，導致急性期、恢復期甚至更久血管內(nèi)皮細胞損傷及功能障礙，是引起KD免疫機制的重要因素；常常由一種或多種廣泛分布的感染源侵犯易感人群而引起[4]。

本研究對47例KD患兒及51例肺炎患兒數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果顯示，2組淋巴細胞計數(shù)、比例以及T細胞亞群數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計學意義。且肺炎組已排除相關免疫因素參與的病原菌病例，提示在KD急性期，相較于紅細胞沉降率、CRP等炎性指標的異常，T細胞亞群在發(fā)病早期的變化尚不明顯；說明在KD急性期或發(fā)病早期，其免疫紊亂狀態(tài)體現(xiàn)的并不顯著。也有學者通過分析KD早期T細胞亞群等在ROC曲線下特征，發(fā)現(xiàn)其各指標的診斷特異度及敏感度均偏低，故認為T細胞亞群尚不能作為KD的早期診斷指標[5]。

表1 2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較（x±s）

表2 川崎病組淋巴細胞計數(shù)及比例與T細胞亞群相關性分析結果

表3 對照組淋巴細胞計數(shù)及比例與T細胞亞群相關性分析結果

圖1 川崎病組

圖4 川崎病組

圖2 川崎病組

圖5 對照組

圖3 川崎病組

圖6 對照組

3.1 淋巴細胞與CD 56+CD 16+本研究結果顯示，KD組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關（r= -0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢散點圖呈近似負相關；肺炎組統(tǒng)計結果顯示均無相關性。CD 56+CD 16+主要表達于NK細胞表面，這種負相關性提示KD急性期外周血淋巴細胞越高，NK細胞表達水平反而降低，與部分文獻報道結果相一

致[6-7]。

KD急性期NK細胞水平的變化與其參與急性期免疫機制有關。Charles等[8]發(fā)現(xiàn)KD急性期，在損傷動脈壁可見大量NK細胞和單核/吞噬細胞的聚集和浸潤，可進一步推斷外周血NK細胞表達水平的降低與其參與KD急性期免疫反應的消耗增加有關。另一方面，有研究顯示[9]，KD急性期外周血CD 16+NK細胞絕對計數(shù)明顯降低，但NK細胞在外周血中的變化是否為KD發(fā)病機制中的主要因素尚未明確。

3.2 淋巴細胞與CD 3+及CD 4+本研究結果顯示，KD組及肺炎組淋巴細胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關，線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無相關性。

一方面，提示可從KD患兒外周血淋巴細胞比例粗略推斷T細胞亞群CD 3+及CD 4+的變化趨勢。這種正相關性現(xiàn)象說明，外周血淋巴細胞比例越高，KD急性期由CD 4+T細胞分化而來的Th 1/Th 2細胞及相關細胞因子的表達水平亦相應升高[10]。故從T淋巴細胞比例的失調(diào)及表達功能的異常，可間接反映出KD急性期存在細胞免疫功能的紊亂。本組病例未進行T淋巴細胞活化的相關檢測，但在KD急性期T淋巴細胞所體現(xiàn)的正相關性，以及細胞因子的級聯(lián)放大效應，提示KD患兒在免疫紊亂過程中，可能同時伴有部分炎性介質(zhì)的參與。

另一方面，淋巴細胞比例的高低與其他細胞系統(tǒng)變化有關，本研究結果顯示僅有淋巴細胞比例存在一定正相關性，其他細胞系統(tǒng)的失調(diào)可能同時參與KD免疫系統(tǒng)紊亂過程，尤其是單核/巨噬細胞系統(tǒng)[11-12]及中性粒細胞[13]的改變。

研究結果顯示，KD急性期中性粒細胞的的變化與IVIG對KD的療效以及并發(fā)CALs密切相關[14-15]。并且，作為預測IVIG無反應性及并發(fā)CALs高危因素的重要評分系統(tǒng)之一——小林評分[16]，其中即包含一項：中性粒細胞比例≥0.80（2分），說明中性粒細胞比例越高，可能更易發(fā)生IVIG無反應性及CALs。結合本文相關性分析結果，若淋巴細胞比例越高，中性粒細胞比例越低，則NK細胞表達水平越低，且CD 3+及CD 4+表達越高。故可以推斷，從KD急性期外周血淋巴細胞比例可粗略估計患兒免疫功能紊亂程度，為KD急性期治療提供部分參考（如IVIG使用劑量或是否加用激素等），但尚不能憑單一指標來制定合適方案。

3.3 T細胞亞群與KD免疫機制分析 T細胞亞群作為反映機體細胞免疫功能的一項重要指標，在KD患兒免疫機制的研究較為廣泛，本研究結果顯示，外周淋巴細胞與T細胞亞群CD 56+CD 16+以及CD 3+、CD 4+存在一定的相關性分析，從而可粗略估計KD患兒免疫功能紊亂狀態(tài)，為臨床實踐提供部分參考。有學者[17]認為KD患兒急性期外周血CD 3+及CD 8+百分比明顯下降，CD 4+百分比、CD 4+/CD 8+、血清IL-2及sIL-2 R水平明顯升高，提示川崎病患兒急性期存在細胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能紊亂。Hirabayashi等[18]發(fā)現(xiàn)，且缺乏CD 4+CD 25+FOXP 3+調(diào)節(jié)性T細胞的KD患兒更易發(fā)展為IVIG-無反應型，提示調(diào)節(jié)性T細胞在KD免疫機制及預后轉(zhuǎn)歸中仍有重要作用。故作為KD免疫機制的重要環(huán)節(jié)，由T淋巴細胞引起的免疫調(diào)節(jié)功能損傷仍需更為廣泛的研究成果以完善補充。

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Objective To investigate the correlations between lymphocytes and T-cell subsets in blood for Kawasaki disease (KD) in children, providing some references for immunological mechanisms of KD. Methods A total of 47 children with KD and 51 children of bronchopneumonia as the control group were observed with lymphocytes and T-cell subsets of blood at the same time, which including CD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 4+/ CD 8+and CD 56+CD 16+. All the results were tested by correlation analysis respectively. Results We found the negative correlation between the count and the ration of lymphocyte and CD 56+CD 16+(r=-0.369, P＜0.05；r=-0.316, P＜0.05) in KD group. There was positive correlation between the ration of lymphocyte in both the two groups and CD 3+(r=0.384, P＜0.01；r=0.283, P＜0.05) and CD 4+(r=0.511, P＜0.01；r=0.326, P＜0.05). There was no significant difference in other test dates in correlation analysis between two groups. Conclusion The results of correlation analysis between lymphocytes and T-cell subsets in blood, indicated that T lymphocytes participant in the immunological mechanisms in acute KD, which maybe helpful for the pathogenesis research of Kawasaki disease in children.

Kawasaki disease；Lymphocytes；T-cell subsets

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.29.001

江蘇 213000 蘇州大學附屬第三醫(yī)院常州市第一人民醫(yī)院兒科（胡珊 王永清）

胡珊 E-mail:hushan 2011@163.com