胡珊 王永清
川崎病外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性分析
胡珊 王永清
目的 探討川崎病(KD)患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性,為川崎病免疫學機制研究提供參考。方法 47例KD患兒及對照組51例支氣管肺炎患兒,入院后同時采集外周血檢測淋巴細胞計數(shù)、比例,以及T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比。分別對各項結果進行相關性分析。結果 川崎病組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關(r=-0.42,P<0.05;r=-0.39,P<0.05);川崎病組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+及CD 4+呈正相關(r=0.38,P<0.01,r=0.28,P<0.05;r=0.51,P<0.01,r=0.33,P<0.05)。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群(CD 8+及CD 4+/CD 8+)均無相關性。結論 外周血淋巴細胞與T細胞亞群的相關性結果提示T淋巴細胞參與川崎病急性期的免疫反應機制,對川崎病發(fā)病機制研究可能有輔助意義。
川崎病;淋巴細胞;T細胞亞群
川崎?。╧awasaki disease,KD)是一種病因未明的好發(fā)于5歲以下兒童以全身血管炎為主要病變的急性發(fā)熱出疹性疾病,以免疫系統(tǒng)激活和血管內(nèi)皮系統(tǒng)廣泛損害為特征,已成為兒童后天性心臟病的重要因素之一[1]。由T細胞介導的免疫應答機制,尤其表現(xiàn)在T淋巴細胞引起的特異性免疫紊亂現(xiàn)象,在KD發(fā)病機制研究中引起一定的關注。本研究對KD住院患兒外周血淋巴細胞與T細胞亞群的檢測結果進行相關性分析總結,以觀察KD患兒急性期免疫功能狀況。
1.1 一般資料 選取常州市第一人民醫(yī)院兒科于2004年1月~2012年12月確診KD的47例住院患兒臨床資料作為KD組,所有病例均符合美國心臟病協(xié)會2004年川崎病臨床診斷指南修訂的KD診斷標準[2]。其中男27例,女20例,男女比例為1.35∶1;年齡6個月~12歲,平均年齡(33.3±28.1)個月;住院時間9~21 d,平均(14.3±3.7)d。入院時冠狀動脈病變(coronary artery lesion,CALs)發(fā)生率為15%(7/47)。選取同期51例支氣管肺炎住院患兒(排除支原體肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎等)作為對照組,其中男27例,女24例,男女比例為1.17∶1;年齡2個月~7歲,平均年齡(30.4±21.3)個月;住院時間5~15 d,平均(7.4±2.3)d。2組患兒一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義,具有可比性。
1.2 檢測方法 2組患兒入院后同時抽取外周血檢測淋巴細胞及T細胞亞群。采用流式與激光技術檢測外周血淋巴細胞計數(shù)及百分比,儀器來源于日本Sysmex XE-2100型號檢測儀。采用流式細胞儀檢測T細胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比,儀器來源于美國BD FACSCalibur型號檢測儀。
1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料用“x±s”表示,組間比較采用獨立樣本t檢驗。數(shù)據(jù)采用雙變量線性相關分析,分析結果以Pearson相關系數(shù)r表示,-1<r<0表示負相關,0<r<1表示正相關。線性趨勢采用散點圖表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較,差異無統(tǒng)計學意義。見表1。KD組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關(r=-0.42,P<0.05;r=-0.39,P<0.05),線性趨勢散點圖呈近似負相關。KD組及對照組淋巴細胞比例與CD 3+(r=0.38,P<0.01;r=0.28,P<0.05)及CD 4+(r=0.51,P<0.01;r=0.33,P<0.05)呈正相關,線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群(CD 8+及CD 4+/CD 8+)均無相關性。見表2、表3。線性趨勢見散點圖(圖1~6)。
近年來KD發(fā)病率呈逐年增長趨勢,但其發(fā)病機制尚未完全明確[3],大多數(shù)學者認為T淋巴細胞和B淋巴細胞介導的免疫應答及炎性細胞因子的級聯(lián)放大效應引起全身血管炎性損傷,導致急性期、恢復期甚至更久血管內(nèi)皮細胞損傷及功能障礙,是引起KD免疫機制的重要因素;常常由一種或多種廣泛分布的感染源侵犯易感人群而引起[4]。
本研究對47例KD患兒及51例肺炎患兒數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果顯示,2組淋巴細胞計數(shù)、比例以及T細胞亞群數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計學意義。且肺炎組已排除相關免疫因素參與的病原菌病例,提示在KD急性期,相較于紅細胞沉降率、CRP等炎性指標的異常,T細胞亞群在發(fā)病早期的變化尚不明顯;說明在KD急性期或發(fā)病早期,其免疫紊亂狀態(tài)體現(xiàn)的并不顯著。也有學者通過分析KD早期T細胞亞群等在ROC曲線下特征,發(fā)現(xiàn)其各指標的診斷特異度及敏感度均偏低,故認為T細胞亞群尚不能作為KD的早期診斷指標[5]。
表1 2組患兒淋巴細胞及T細胞亞群比較(x±s)
表2 川崎病組淋巴細胞計數(shù)及比例與T細胞亞群相關性分析結果
表3 對照組淋巴細胞計數(shù)及比例與T細胞亞群相關性分析結果
圖1 川崎病組
圖4 川崎病組
圖2 川崎病組
圖5 對照組
圖3 川崎病組
圖6 對照組
3.1 淋巴細胞與CD 56+CD 16+本研究結果顯示,KD組外周血淋巴細胞計數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負相關(r= -0.42,P<0.05;r=-0.39,P<0.05),線性趨勢散點圖呈近似負相關;肺炎組統(tǒng)計結果顯示均無相關性。CD 56+CD 16+主要表達于NK細胞表面,這種負相關性提示KD急性期外周血淋巴細胞越高,NK細胞表達水平反而降低,與部分文獻報道結果相一
致[6-7]。
KD急性期NK細胞水平的變化與其參與急性期免疫機制有關。Charles等[8]發(fā)現(xiàn)KD急性期,在損傷動脈壁可見大量NK細胞和單核/吞噬細胞的聚集和浸潤,可進一步推斷外周血NK細胞表達水平的降低與其參與KD急性期免疫反應的消耗增加有關。另一方面,有研究顯示[9],KD急性期外周血CD 16+NK細胞絕對計數(shù)明顯降低,但NK細胞在外周血中的變化是否為KD發(fā)病機制中的主要因素尚未明確。
3.2 淋巴細胞與CD 3+及CD 4+本研究結果顯示,KD組及肺炎組淋巴細胞比例與CD 3+(r=0.38,P<0.01;r=0.28,P<0.05)及CD 4+(r=0.51,P<0.01;r=0.33,P<0.05)呈正相關,線性趨勢散點圖呈近似正相關。2組淋巴細胞計數(shù)及比例與其他T細胞亞群(CD 8+及CD 4+/CD 8+)均無相關性。
一方面,提示可從KD患兒外周血淋巴細胞比例粗略推斷T細胞亞群CD 3+及CD 4+的變化趨勢。這種正相關性現(xiàn)象說明,外周血淋巴細胞比例越高,KD急性期由CD 4+T細胞分化而來的Th 1/Th 2細胞及相關細胞因子的表達水平亦相應升高[10]。故從T淋巴細胞比例的失調(diào)及表達功能的異常,可間接反映出KD急性期存在細胞免疫功能的紊亂。本組病例未進行T淋巴細胞活化的相關檢測,但在KD急性期T淋巴細胞所體現(xiàn)的正相關性,以及細胞因子的級聯(lián)放大效應,提示KD患兒在免疫紊亂過程中,可能同時伴有部分炎性介質(zhì)的參與。
另一方面,淋巴細胞比例的高低與其他細胞系統(tǒng)變化有關,本研究結果顯示僅有淋巴細胞比例存在一定正相關性,其他細胞系統(tǒng)的失調(diào)可能同時參與KD免疫系統(tǒng)紊亂過程,尤其是單核/巨噬細胞系統(tǒng)[11-12]及中性粒細胞[13]的改變。
研究結果顯示,KD急性期中性粒細胞的的變化與IVIG對KD的療效以及并發(fā)CALs密切相關[14-15]。并且,作為預測IVIG無反應性及并發(fā)CALs高危因素的重要評分系統(tǒng)之一——小林評分[16],其中即包含一項:中性粒細胞比例≥0.80(2分),說明中性粒細胞比例越高,可能更易發(fā)生IVIG無反應性及CALs。結合本文相關性分析結果,若淋巴細胞比例越高,中性粒細胞比例越低,則NK細胞表達水平越低,且CD 3+及CD 4+表達越高。故可以推斷,從KD急性期外周血淋巴細胞比例可粗略估計患兒免疫功能紊亂程度,為KD急性期治療提供部分參考(如IVIG使用劑量或是否加用激素等),但尚不能憑單一指標來制定合適方案。
3.3 T細胞亞群與KD免疫機制分析 T細胞亞群作為反映機體細胞免疫功能的一項重要指標,在KD患兒免疫機制的研究較為廣泛,本研究結果顯示,外周淋巴細胞與T細胞亞群CD 56+CD 16+以及CD 3+、CD 4+存在一定的相關性分析,從而可粗略估計KD患兒免疫功能紊亂狀態(tài),為臨床實踐提供部分參考。有學者[17]認為KD患兒急性期外周血CD 3+及CD 8+百分比明顯下降,CD 4+百分比、CD 4+/CD 8+、血清IL-2及sIL-2 R水平明顯升高,提示川崎病患兒急性期存在細胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能紊亂。Hirabayashi等[18]發(fā)現(xiàn),且缺乏CD 4+CD 25+FOXP 3+調(diào)節(jié)性T細胞的KD患兒更易發(fā)展為IVIG-無反應型,提示調(diào)節(jié)性T細胞在KD免疫機制及預后轉(zhuǎn)歸中仍有重要作用。故作為KD免疫機制的重要環(huán)節(jié),由T淋巴細胞引起的免疫調(diào)節(jié)功能損傷仍需更為廣泛的研究成果以完善補充。
[1] Gupta-Malhotra M,Gruber D,Abraham SS,et al.Atherosclerosis in Survivors of Kawasaki Disease[J].J Pediatr,2009,155(4):572-577.
[2] Newburger JW,Takahashi M,Gerber MA,et al.Diagnosis,treatment,and long-term management of Kawasaki disease:a statement for health professionals from the Committee on Rheumatic Fever,Endocarditis and Kawasaki Disease,Council on Cardiovascular Disease in the Young,American Heart Association[J].Circulation,2004,110(17):2747-2771.
[3] Kuo HC,Yang KD,Chang WC,et al.Kawasaki disease:an update on diagnosis and treatment[J].Pediatr Neonatol,2012,53(1):4-11.
[4] Burgner D,Harnden A.Kawasaki disease:What is the epidemiology telling us about the etiology? [J].Int J Infect Dis,2005,9(4):185-194.
[5] 黃家禹,宋秀宇,洪強,等.ROC曲線評價T細胞亞群、PLT、ESR和CRP在川崎病早期診斷中的應用[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2009,6(21):1813-1815.
[6] 周萬平,嚴文華,呂海濤,等.23例川崎病患兒免疫功能分析[J].蘇州大學學報(醫(yī)學版),2007,27(4):617-618.
[7] Shingadia D,O'Gorman M,Rowley AH,et al.Surface and cytoplasmic immunoglobulin expression in circulating B-lymphocytes in acute Kawasaki disease[J].Pediatr Res,2001,50(4):538-543.
[8] Charles Jennette,Janiece Sciarrotta,Kei Takahashi,et al.Predominance of monocytes and macrophages in the inflammatory infiltrates of acute Kawasaki disease arteritis[J].Pediatrics Research,2003,53(1):173.
[9] Furukawa S,Matsubara T,Tsuji K,et al.Comparison of Kawasaki disease and infectious mononucleosis in terms of natural killer cell and CD 8+T cell subsets [J].J Infect Dis,1991,163(2):416-417.
[10] Wang Y,Wang W,Gong F,et al.Evaluation of intravenous immunoglobulin resistance and coronary artery lesions in relation to Th 1/Th 2 cytokine profiles in patients with Kawasaki disease [J].Arthritis & Rheumatism,2013,65(3):805-814.
[11] Matsubma T,Ichiyama T,Furukawa S.Immunological profile of peripheral blood lymphocytes and monocytes/macrophages in Kawasaki disease[J].Clin Exper Immunol,2005,141(3):381-387.
[12] Katayama K,Matsubara T,Fujiwara M,et al.CD 14+CD 16+monocyte subpopulation in Kawasaki disease[J].Clin Exp Immunol,2000,121(3):566-570.
[13] Tsujimoto H,Takeshita S,Nakatani K,et al.Intravenous immunoglobulin therapy induces neutrophil apoptosis in Kawasaki disease[J].Clin Immunol,2002,103(2):161-168.
[14] Onouchi Z,Hamaoka K,Ozawa S,et al.Neutropenia in the acute phase of Kawasaki disease and prevention of coronary artery aneurysm[J].Pediatr Int,2009,51(4):448-452.
[15] Takahashi K,Oharaseki T,Naoe S,et al.Neutrophilic involvement in the damage to coronary arteries in acute stage of Kawasaki disease[J]. Pediatr Int, 2005,47(3):305-310.
[16] Kobayashi T,Inoue Y,Takeuchi K,et al.Prediction of intravenous immunoglobulin unresponsiveness in patients with Kawasaki disease[J].Circu lation,2006,113(22):2606-2612.
[17] 鄭淑梅,劉文彬,王太森,等.細胞免疫功能在川崎病發(fā)病機制中的作用[J].實用兒科臨床雜志,2005,20(7):641-642.
[18] Hirabayashi Y,Takahashi Y,Xu Y,et al.Lack of CD 4+CD 25+FOXP 3+regulatory T cells is associated with resistance to intravenous immunoglobulin therapy in patients with Kawasaki disease[J].Eur J Pediatr,2013,172(6):833-837.
Objective To investigate the correlations between lymphocytes and T-cell subsets in blood for Kawasaki disease (KD) in children, providing some references for immunological mechanisms of KD. Methods A total of 47 children with KD and 51 children of bronchopneumonia as the control group were observed with lymphocytes and T-cell subsets of blood at the same time, which including CD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 4+/ CD 8+and CD 56+CD 16+. All the results were tested by correlation analysis respectively. Results We found the negative correlation between the count and the ration of lymphocyte and CD 56+CD 16+(r=-0.369, P<0.05;r=-0.316, P<0.05) in KD group. There was positive correlation between the ration of lymphocyte in both the two groups and CD 3+(r=0.384, P<0.01;r=0.283, P<0.05) and CD 4+(r=0.511, P<0.01;r=0.326, P<0.05). There was no significant difference in other test dates in correlation analysis between two groups. Conclusion The results of correlation analysis between lymphocytes and T-cell subsets in blood, indicated that T lymphocytes participant in the immunological mechanisms in acute KD, which maybe helpful for the pathogenesis research of Kawasaki disease in children.
Kawasaki disease;Lymphocytes;T-cell subsets
10.3969/j.issn.1009-4393.2015.29.001
江蘇 213000 蘇州大學附屬第三醫(yī)院常州市第一人民醫(yī)院兒科(胡珊 王永清)
胡珊 E-mail:hushan 2011@163.com