夏靜 周淑平 陳富明 謝清云 柏艷萍 楊銘

miR-128在胃癌中的表達及臨床意義的研究

夏靜 周淑平 陳富明 謝清云 柏艷萍 楊銘

目的 研究miR-128在胃癌中的表達及臨床意義。方法 采用原位雜交法檢測112例胃癌組織及癌旁正常組織的表達，統(tǒng)計分析miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 miR-128在胃癌中表達下調(diào)，在胃癌組織中陽性表達35例，陰性表達77例，而在癌旁正常組織中陽性表達89例，陰性表達23例；與患者的TNM分期相關(guān)，TNM I～II期患者中miR-128低表達的42例，高表達28例，TNM III～IV期患者中miR-128低表達的35例，高表達的7例。結(jié)論 miR-128在胃癌組織中表達低于癌旁正常組織，與胃癌患者TNM分期，可作為胃癌分期預測的潛在分子標志物。

胃癌；miR-128；TNM分期

胃癌是一個嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率居全球惡性腫瘤發(fā)病的第4位，死亡率居全球惡性腫瘤導致死亡的第2位[1]。胃癌的5年生存率在過去的10年有較大的提高，但是這個5年生存率的提高僅限于胃癌早期的患者[2]。胃癌晚期或有遠處轉(zhuǎn)移患者的5年生存率低于5%，中位總生存時間低于1年[3]。

miRNA是，約18～23 nt長的微小非編碼RNA，在腫瘤中表達失調(diào)，可發(fā)揮抑瘤基因或瘤基因的功能，并通過調(diào)控多個信號通路影響腫瘤細胞的功能。miRNA通過轉(zhuǎn)錄后抑制，調(diào)控靶基因的表達。成熟的miRNA通過識別靶基因3’非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR），與3’UTR結(jié)合，降解mRNA或抑制mRNA翻譯[4]。miR-128在多種腫瘤中表達下降，具有抑制腫瘤的作用。

本研究擬通過免疫組化法檢測miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達情況，統(tǒng)計分析miR-128在胃癌組織中表達與臨床參數(shù)的關(guān)系，從而確定miR-128在胃癌中的表達及與臨床參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年1月～2013年12月在南華大學附屬永州市中心醫(yī)院就診的112例原發(fā)性胃癌患者的腫瘤組織及癌旁正常組織。男72例，女50例；年齡31～73歲，其中年齡≥54歲的患者69例，＜54歲的患者43例；高分化患者39例，中分化患者50例，低分化患者23例；腫塊大小≥3 cm的患者65例，＜3 cm的患者57例；TNM分期I～Ⅱ期患者70例，Ⅲ～Ⅳ期患者42例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者79例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者33例。上述組織標本的使用已由永州市中心醫(yī)院倫理委員會同意。

1.2 主要試劑 原位雜交試劑盒購自武漢博士德公司。

1.3 原位雜交法 根據(jù)試劑盒說明書進行操作。

1.4 原位雜交檢測法結(jié)果分析 根據(jù)組織陽性染色程度計分：陰性，1分；++，2分；++，3分；+++，4分；根據(jù)組織中的染色陽性細胞數(shù)進行計分：1分，0%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。根據(jù)以上兩種方法得到的分數(shù)相乘多得的數(shù)值判定表達情況，＜8為低表達，≥8為高表達。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料2組或2組以上采用student t-test或One-way ANOVA分析；率的比較用χ2檢驗和Fisher’s exact test分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達情況原位雜交檢測法結(jié)果顯示，miR-128在胃癌組織中的表達陽性率明顯低于同一患者對應癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見表1。

表1 miR-128在胃癌及癌旁正常胃黏膜組織中的表達（n）

2.2 miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果顯示，miR-128的表達與患者的性別、年齡、組織學分級、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義。miR-128的表達與胃癌患者TNM分期相關(guān)，TNM I～Ⅱ期患者中miR-128高表達比例高于TNM Ⅲ～Ⅳ分期患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

研究表明，多個miRNA參與了胃癌耐藥機制的調(diào)控。miR-103/107在胃癌細胞中表達降低，當增加miR-103/107的表達可促進SGC 7901/ADR細胞對多柔比星的敏感性，并且可抑制耐藥蛋白P-gp的表達[5]。miR-503通過靶向IGF 1R和BCL-2，抑制胃癌SGC 7901/DDP增殖，增加SGC 7901/DDP對順鉑的敏感性[6]。miR-106 a通過促進ADR外流，抑制化療藥物誘導的細胞凋亡，靶向抑制RUNX 3誘導胃癌細胞耐藥[7]。

miR-128在多種腫瘤中表達失調(diào)，并且miR-128在不同腫瘤中的表達差異非常大。miR-128可抑制腫瘤的生長。miR-128通過抑制其靶基因BMI-1、BAG-2、 BAX、H 3f 3b及Paip 2的表達抑制頭頸部鱗癌細胞JHU-13和JHU-22的體外生長及體內(nèi)成瘤[8]。miR-128可增加化療敏感性。高表達膠質(zhì)母細胞瘤細胞中miR-128，可靶向抑制RapB介導的細胞骨架形成，并增加膠質(zhì)瘤細胞對他莫昔芬的敏感性[9]。miR-128具有抑制腫瘤血管生成的功能。研究表明，miR-128通過抑制其靶基因血管內(nèi)皮生長因子C（vascular endothelial growth factor-C，VEGFC）的表達，抑制人非小細胞肺癌的腫瘤形成、血管生成及淋巴管生成[10]。miR-128與預后相關(guān)。在結(jié)直腸癌患者組織中，miR-128表達降低，而miR-128低表達的患者復發(fā)率低于miR-128高表達的患者[11]。過表達急性粒細胞性白血病細胞中的miR-128可促進細胞程序性死亡及DNA損傷，但是不能引起細胞周期阻滯和自噬[12]。研究顯示，miR-128在肝細胞癌中表達下降，其在血清中的表達可作為肝細胞癌預后預測的標記物[13]。有研究者利用miRNA芯片、norther blot及qRT-PCR的方法檢測了miR-128在多形性膠質(zhì)瘤和成神經(jīng)管細胞瘤中表達降低[14-15]。而另一項研究表明miR-128在膠質(zhì)瘤患者血清中升高[16]。有人檢測了57例乳腺癌患者腫瘤組織中miR-128的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-128在化療耐藥的組織中表達下降，而在化療敏感的組織中表達升高[17]。本研究首先檢測了miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-128在胃癌組織中的表達顯著降低，陽性率僅為31.3%，而miR-128在癌旁正常組織中的陽性率為79.5%。說明miR-128在胃癌組織中的表達是降低的。隨后，本研究統(tǒng)計分析了miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-128與胃癌患者的TNM分期密切相關(guān)，而與患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)。說明，miR-128可作為胃癌患者TNM分期的潛在判定指標。

表2 miR-128表達與胃腺癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系(n)

過表達miR-128可增加卵巢癌細胞SKOV 3/CP對順鉑的敏感性[18]?？梢?，miR-128具有增加腫瘤化療敏感性的功能，參與了腫瘤耐藥機制的調(diào)控。盡管已經(jīng)有許多關(guān)于miR-128在腫瘤中表達及作用機制的研究報道，但是miR-128在胃癌中的表達及作用尚不清楚。這將是本文作者的研究方向。

通過本研究可以確定miR-128在胃癌組織中表達降低，并且與TNM分期負相關(guān)，miR-128胃癌中可作為TNM分期預測的潛在分子生物學靶點。

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Objective To identify the expression and clinical signif i cance of miR-128 in gastric cancer. Methods The expression of miR-128 in 112 gastric cancer samples was detected by ISH. The correlation between the expression of miR-128 and clinical parameters was analyzed. Results miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues. It negatively correlated to the TNM stage. Conclusion The expression of miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues, correlated to TNM stage. miR-128 could be a potential biomarker in evaluating TNM stage, sensitivity to target therapy.

Gastric cancer; miR-128; TNM stage

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.14.001

湖南 425006湖南省永州市中心醫(yī)院 （夏靜 周淑平 陳富明謝清云） 永州市職業(yè)技術(shù)學院（柏艷萍 楊銘）

楊銘 E-mail：ym 74621123@sina.com