錢 超 穆 琪 霍俊杰 余建華

4種方法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析

錢 超 穆 琪 霍俊杰 余建華

目的 評(píng)價(jià)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）和化學(xué)發(fā)光法（TP-CLIA）、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）和甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）在手術(shù)和輸血前梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，并分析不同年齡段患者梅毒螺旋體抗體陽性率。方法 用ELISA法檢測(cè)7656例手術(shù)和輸血前住院患者血清中的梅毒螺旋體抗體，篩查出的陽性樣本再采用CLIA法、TPPA法和TRUST法進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)ELISA法的檢測(cè)結(jié)果（S/CO值）和CLIA的法檢測(cè)結(jié)果（S/CO值）進(jìn)行相關(guān)性分析；對(duì)于TPPA確診試驗(yàn)陽性標(biāo)本按年齡段分組，分析不同年齡段梅毒螺旋體抗體陽性率有無差異。結(jié)果 ELISA法檢測(cè)出梅毒螺旋體抗體陽性標(biāo)本173例，總陽性率為2.26%（173/7656）；CLIA法、TPPA法和TRUST法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體陽性符合率分別為100%（173/173）、99.42%（172/173）和29.48%（51/173）。相關(guān)性分析顯示ELISA法和CLIA檢測(cè)結(jié)果（S/CO值）呈顯著正相關(guān)（r=0.711,P＜0.001）。梅毒螺旋體抗體陽性率隨年齡增長(zhǎng)而增高，60歲以上老年人陽性率顯著高于其他人群（P＜0.05）。結(jié)論 ELISA法和CLIA法是手術(shù)和輸血前梅毒螺旋體抗體篩查的可靠方法，但須行TPPA確診試驗(yàn)；TRUST法不適用于梅毒螺旋體抗體的篩查，適宜療效觀察；梅毒螺旋體抗體陽性率隨著年齡增長(zhǎng)而增高，要慎重對(duì)待老年人梅毒試驗(yàn)陽性結(jié)果。

梅毒螺旋體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；化學(xué)發(fā)光法；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的性傳播疾病，主要通過性接觸和血液傳播， 具有高度傳染性和很強(qiáng)致病性，可侵犯全身臟器，造成多種器官病變，功能失常。近年來，梅毒發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)，防治工作任重道遠(yuǎn)[1]。梅毒早期臨床表現(xiàn)復(fù)雜，易被漏診誤診。因此，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)于梅毒的診斷治療具有重要意義。目前，實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒螺旋體感染的血清學(xué)檢測(cè)方法主要有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光法（CLIA）、明膠顆粒凝集法（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）和快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）。梅毒螺旋體抗體測(cè)定CLIA法是國內(nèi)近年用于臨床的梅毒血清學(xué)特異性抗體檢測(cè)方法，敏感性和特異性都很高[2-3]。本文用ELISA法對(duì)7656例手術(shù)和輸血前住院患者血清標(biāo)本進(jìn)行梅毒螺旋體抗體檢測(cè)，陽性標(biāo)本再采用CLIA法、TPPA法、TRUST法檢測(cè)，對(duì)4種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較和分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取解放軍454醫(yī)院2013年7月～2014年2月手術(shù)和輸血前住院患者血清樣本共7656例（不含復(fù)查）。男5004例（65.36%），女2652例（34.64%）；59歲以下4676例（61.08%），60歲以上2980例（38.92%）；年齡14～98歲，中位年齡51.8歲。

1.2 儀器與試劑 ADALTIS全自動(dòng)酶免分析儀（意大利亞特斯公司，型號(hào)：NEXGEN Four）；科美全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（北京科美生物技術(shù)有限公司，型號(hào)：CHEMCLIN 600）；TPPA診斷試劑(日本富士瑞必歐株式會(huì)社，批號(hào)：VN30419)；ELISA診斷試劑(上?？迫A生物工程股份有限公司，批號(hào)：20130512)；CLIA診斷試劑(北京科美生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20130408)；TRUST診斷試劑(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號(hào)20130522)。

1.3 方法 臨床送檢的7656份標(biāo)本及時(shí)分離血清后，4℃保存，次日進(jìn)行ELISA法檢測(cè)。ELISA法檢測(cè)出的陽性標(biāo)本再用CLIA法、TPPA法和TRUST法進(jìn)行檢測(cè)。所有操作步驟都嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。ELISA法和CLIA法以S/CO值≥1判定為陽性。對(duì)陽性標(biāo)本的ELISA法檢測(cè)結(jié)果（S/CO值）與CLIA法檢測(cè)的（S/CO值）進(jìn)行相關(guān)性分析。7656例送檢標(biāo)本按年齡分為20歲以下、20～29歲、30～39歲、40～49歲、50～59歲、60～69歲、70～79歲、80歲以上共8組，分別統(tǒng)計(jì)TPPA確診試驗(yàn)陽性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)，ELISA法和CLIA法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性采用Pearson 直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 7656例手術(shù)和輸血前患者ELISA方法檢測(cè)出陽性標(biāo)本173例，總陽性率為2.26%（173/7656）。173例ELISA陽性標(biāo)本其他3種檢測(cè)方法結(jié)果見表1。

表1 173例ELISA陽性標(biāo)本其他3種檢測(cè)方法結(jié)果

2.2 ELISA法和CLIA法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析 檢測(cè)結(jié)果顯示173例樣本ELISA法測(cè)得的S/CO值=（13.02±7.14），CLIA法測(cè)得的S/CO值=（19.02±14.36），相關(guān)性分析顯示二者呈顯著正相關(guān)（r=0.711,P＜0.001）。

2.3 各年齡段梅毒螺旋體抗體陽性率 TPPA確診試驗(yàn)陽性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：60歲及以上老年人梅毒螺旋體抗體陽性率為3.76%（112/2980）,60歲以下人群的陽性率1.28%（60/4676），二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=50.777，P＜0.05）。隨著年齡的增長(zhǎng)，梅毒螺旋體抗體陽性率呈逐漸增高趨勢(shì)。見表2。

表2 各年齡段TPPA確診梅毒螺旋體抗體陽性率

3 討論

梅毒是人體感染蒼白密螺旋體后引起的全身性疾病，主要通過性傳播、母嬰垂直傳播和血液傳播。住院期間手術(shù)和輸血患者可通過手術(shù)器械和輸血傳播，為確保安全輸血，減少不必要的醫(yī)療糾紛，梅毒螺旋體抗體檢測(cè)已成為手術(shù)和輸血前的常規(guī)感染指標(biāo)檢測(cè)項(xiàng)目之一[4]。

梅毒螺旋體侵入機(jī)體后可產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體和抗類脂抗原的非特異性抗體。目前，國內(nèi)檢測(cè)梅毒螺旋體抗體主要方法有ELISA法、CLIA法和TPPA法，其中TPPA法主要用于篩檢陽性標(biāo)本的確診試驗(yàn)。EIISA法是利用基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP17和TP47包被微孔板，采用雙抗原夾心法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體。此方法可以用全自動(dòng)酶免儀進(jìn)行批量檢測(cè)，是篩查和檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的一種良好方法。CLIA法作為國內(nèi)新開發(fā)的梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)方法，使用多種梅毒螺旋體特異性抗原制備固相抗原，辣根過氧化物酶標(biāo)記的相同蛋白作為標(biāo)記抗原，與樣本中的梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心。經(jīng)洗滌后加入發(fā)光底物液，測(cè)定其發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)S/CO值判斷樣品中是否含有梅毒螺旋體特異性抗體[5]。該法靈敏度和特異性都很高，無攜帶污染現(xiàn)象，可在全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀上檢測(cè)，自動(dòng)化程度高，值得在臨床推廣。TPPA法是將梅毒Nichols株的精制菌體成分包被在人工載體明膠顆粒上，對(duì)梅毒特異性抗體檢測(cè)具有高度特異性和敏感性，是目前公認(rèn)的梅毒確診試驗(yàn)，但結(jié)果須人工判讀，不適宜進(jìn)行大樣本量檢測(cè)，限制了其在批量標(biāo)本篩查中的應(yīng)用。檢測(cè)非特異性類脂抗體的方法主要有TRUST法和RPR法。TRUST法用類脂質(zhì)抗原制成，所測(cè)為抗類脂抗體，操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉，肉眼判讀。因TRUST法為非特異性梅毒螺旋體抗原抗體反應(yīng)，存在一定假陽性和假陰性，許多學(xué)者認(rèn)為TRUST已不再適合梅毒篩查試驗(yàn)。但TRUST試驗(yàn)滴度與病程有關(guān)，當(dāng)感染者在接受治療后或疾病處于非活動(dòng)期期間是，TRUST滴度下降，而梅毒復(fù)發(fā)時(shí)則會(huì)轉(zhuǎn)陽，滴度升高。因此TRUST試驗(yàn)在觀察病程和療效方面有重要價(jià)值[6-7]。

本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)出的梅毒螺旋體抗體總陽性率為2.26%，CLIA法和ELISA法的陽性符合率達(dá)100%。TPPA確診試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1例為假陽性，假陽性率0.58%。相關(guān)性分析顯示CLIA法和ELISA法的檢測(cè)結(jié)果呈高度正相關(guān)。值得注意的是TRUST試驗(yàn)符合率僅為29.5%，和CLIA法和ELISA法檢出的陽性率存在明顯差異，這和文獻(xiàn)報(bào)道較為一致[8]。分析原因，TRUST法為非特異血清學(xué)試驗(yàn)，在早期和晚期梅毒及梅毒治療后患者可呈陰性反應(yīng)。而ELISA法和CLIA法對(duì)各期梅毒均有較高的敏感性和特異性。且梅毒螺旋體抗體即使經(jīng)過抗梅毒治療后，仍可呈持續(xù)陽性，甚至終身存在。

本文研究發(fā)現(xiàn)60歲及以上老年人梅毒螺旋體抗體陽性率3.76%,遠(yuǎn)高于60歲以下人群的1.28%，且年齡越大，陽性率越高。無疑，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)陽性的老年人中，有一些人確實(shí)曾經(jīng)或正患梅毒，但相當(dāng)一部分陽性者則沒有梅毒診斷的任何依據(jù)。文獻(xiàn)報(bào)道，與人類共生的螺旋體有很多，包括口腔螺旋體、皮膚相關(guān)的螺旋體、腸道螺旋體等，這些螺旋體可能不治病，也可能參與齒齦類、牙周病、腹瀉等的發(fā)病。它們?cè)谌梭w中可誘導(dǎo)產(chǎn)生抗屬、群或科特異性抗原交叉反應(yīng)抗體，可與試劑盒中的梅毒螺旋體特異性抗原反應(yīng)，從而造成假陽性[9]。因此，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)不能作為感染梅毒螺旋體的絕對(duì)依據(jù)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床綜合判斷分析[10]。

綜上所述，ELISA法合CLIA法都可成為梅毒抗體篩查的可靠方法，但須行TPPA確診試驗(yàn)。而TRUST是非特異性試驗(yàn)，適宜用于療效觀察。老年人的梅毒螺旋體抗體陽性率增高，由于方法學(xué)的局限，可能存在一定的假陽性，應(yīng)結(jié)合臨床綜合判斷分析。

參考文獻(xiàn)

[1] Tucker JD,Cohen MS.China’s syphilis epidemic∶epidemiology,proximate determinants of spread,and control response[J].Curr Opin Infect Dis,2011,24(1)∶50-55.

[2] 房華,吳燕芬,汪瑞忠，等.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在梅毒螺旋體抗體檢測(cè)中的臨床應(yīng)用[J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2010，24(7)：671-672.

[3] 楊永泉，石玉玲，徐少珊，等.化學(xué)發(fā)光法在梅毒實(shí)驗(yàn)診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].生物技術(shù)通訊，2012,23（2）∶258-259.

[4] 張德藝.患者輸血前感染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果及意義[J].河北醫(yī)藥，2014,36（9）∶1387-1388.

[5] 蔣郁青，謝志賢，方雯丹，等.國產(chǎn)試劑化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的臨床評(píng)價(jià)[J].中華試驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2013，27(4)：307-309.

[6] 徐龍珍，畢永春.不同梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的聯(lián)合應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，24(3)∶111-112.

[7] 李楚潮.ELISA，RPR、Trust、TPPA四種方法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16(20)∶9-10.

[8] 羊建，唐明霞.不同梅毒螺旋體抗體檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011,32（14）：1579-1580.

[9] 徐傳和，李琳，鄭連榮，等.老年人梅毒抗體檢測(cè)假陽性率偏高的臨床分析[J].中國老年學(xué)雜志，2012,32（7）∶1495-1497.

[10] 朱守蘭，邢麗華，杜華杰，等.老年患者梅毒螺旋體抗體陽性臨床分析[J].武警醫(yī)學(xué)，2011,22（9）：786-787.

Objective To analyze the clinical performance of sysphilis antibody detection by the enzyme-linked immunosorbent assay (TPELISA),chemiluminescent assay（CLIA）, Treponema pallidum gelatin particle agglutination test (TPPA) and toluidine red unheated serum test（TRUST） in the patient before blood transfusion and operation in hospital, and further to analyze the difference of sysphilis antibody positive rates in different age groups. Methods TP-ELISA were applied to detect TP antibody in 7656 patients before blood transfusion and operation in hospital, the positive samples were further detected by CLIA, TPPA and TRUST. And correlation analysis was performed between the results(S/CO) detected by ELISA and the results(S/CO) detected by TP-CLIA. The positive sample confirmed by TPPA were divided in different age groups, and the positive rates of different age groups were analyzed. Results 173 positive samples were screened out by TP-ELISA, the total positive rates was 2.26%（173/7656）.With the methods of CLIA, TPPA and TRUST, The positive coincidence rates were 100%（173/173）, 99.42%（172/173）and 29.48%（51/173）,respectively. There was a significant correlation between the S/CO value of TP-ELISA and that of TP-CLIA（r=0.711,P＜0.01）.The positive rate of sysphilis antibody increased with the growth of age, and the positive rate of elder people over 60 years was significantly higher than that of the other people（P＜0.05）. Conclusion TP-ELISA and TP-CLIA could be a good screening test for TP antibody detection, but TPPA confirmation test must be performed. TRUST might be not suitable for screening sysphilis antibody, but it could be beneficial for judging therapeutic effect. The positive rates of sysphilis antibody increased with the growth of age, and it is important to handle the positive results of sysphilis antibody in elder patients carefully.

Treponema pallidum; Enzyme-linked immunosorbent assay; Chemiluminescence; Treponema pallidum gelatin particle agglutination test; Toluidine red unheated serum test

doi∶10.3969/j.issn.1009-4393.2015.13.002

江蘇 210002 解放軍454醫(yī)院檢驗(yàn)科 （錢超 穆琪 霍俊杰余建華）