張運峰

（唐山師范學院 生命科學系，河北 唐山 063000）

平菇（Pleurotus ostreatus）又名側(cè)耳，屬擔子菌綱，傘菌目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬。平菇風味濃郁，是一種低脂肪、高蛋白的食用菌，是食用菌五大品種之一，已被聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）列為解決世界營養(yǎng)源問題的最重要食用菌種[1]。其胞外酶及多糖具有很高藥用價值，且多糖具有顯著的抗氧化、抗疲勞和一定的抗腫瘤作用[2]。TP26是本試驗室前期利用原生質(zhì)體融合技術(shù)獲得的新型菌株。具有菌肉肥厚、粗多糖含量高，菇形美觀，口感嫩滑，出菇溫度范圍廣，抗病性強，耐運輸，適宜于多種原料栽培等優(yōu)良特征[3]。研究表明不同的碳源和氮源配制的培養(yǎng)基對食用菌生長具有較大的影響[4]。選擇材料來源廣泛，價格低廉的最佳培養(yǎng)基對于菌株的研究和栽培應(yīng)用均有很重要的意義。本試驗通過調(diào)整培養(yǎng)基的不同碳源和氮源配制對TP26菌株的最佳固體和液體培養(yǎng)基進行了篩選和優(yōu)化。試驗對以應(yīng)TP26為材料，對菌株的固體和液體培養(yǎng)基進行了篩選和改良，以期獲得來源廣泛、成本低廉、菌株生長優(yōu)良的培養(yǎng)基。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

唐平 26（TP26）由唐山師范學院植物遺傳轉(zhuǎn)化實驗室和唐山市農(nóng)科院共同培育，并保存。母種均在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

試驗選擇了對照培養(yǎng)基 PDA(CK)和 7種供試培養(yǎng)基進行比較研究（表1），篩選適合TP26生長的培養(yǎng)基。表1中，配方2和6中的麥粒前處理方式為：先將麥粒用冷水浸泡12 h后水煮，開鍋后小火再煮20 min左右，使麥粒充分煮透，脹而不破，切開后無白心，過濾取濾液。玉米粉在60 ℃水浴1 h，用40目紗布過濾，濾液待用。黃豆先采用60 ℃水浴浸泡半小時，高溫滅菌鍋121 ℃煮10 min后過濾取濾液配制培養(yǎng)基。

表1 供試培養(yǎng)基配方[6-12]

表2 黃豆渣梯度培養(yǎng)基配方組成

1.1.3 優(yōu)化的黃豆-葡萄糖培養(yǎng)基配制

5號培養(yǎng)基濾取黃豆濾液后，以黃豆濾渣替換黃豆培養(yǎng)基中黃豆，其它成分、含量不變（表2）。

1.2 方法

1.2.1 TP26固體培養(yǎng)基的篩選和優(yōu)化

將供試培養(yǎng)基配制成平板，每個配方重復(fù)5皿，用打孔器取長勢良好TP26菌盤一片（Ф=8 mm），無菌條件下接種于平板中央，然后置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。每天同一時間測量菌落直徑，并記錄菌絲生長情況，當有1皿的菌絲生長滿皿時，停止試驗。

1.2.2 TP26黃豆-葡萄糖固體培養(yǎng)基優(yōu)化

培養(yǎng)方法同 1.2.1，每天同一時間測量菌絲生長速度，并記錄菌絲生長情況，當有一皿的菌絲長滿皿時，停止試驗。

1.2.3 TP26液體發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化

將8種供試培養(yǎng)基裝于250 ml三角燒瓶中（150 mL/瓶），每種培養(yǎng)基3個重復(fù)，每瓶接種3片長勢良好TP26菌盤（Ф=8 mm），使其菌絲朝上懸浮于液面上，25 ℃靜止培養(yǎng)24 h后置于160 r/min旋轉(zhuǎn)式搖床25 ℃振蕩培養(yǎng)8 d，初始pH值為5.8。菌絲生物量測定方法：將當天取出的每瓶發(fā)酵液過濾，收集菌絲體用蒸餾水沖洗殘留培養(yǎng)液，置于60 ℃干燥箱內(nèi)干燥至恒重，分析天平稱重。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同固體培養(yǎng)基對TP26生長的影響

圖1 唐平26在不同培養(yǎng)基上菌絲生長情況（7 d）

表3 供試培養(yǎng)基對TP26菌絲生長影響

TP26菌絲在 7種培養(yǎng)基上均能生長，但是生長速度及菌絲長勢明顯不同。其中菌絲生長最快的是配方4、5和6，菌絲的生長速度達到5.0 mm/d-5.2 mm/d，但4和6培養(yǎng)基上的菌落菌絲纖細，氣生菌絲稀疏，而菌生長落速度和氣生菌絲適中；1和2號培養(yǎng)基上菌絲潔白濃密并扭結(jié)成菌絲團，菌絲粗壯，但是菌落生長速度僅為3.6 mm/d和3.7 mm/d，菌絲生長量較差（圖1和表3）。因此，5號培養(yǎng)基（黃豆-葡萄糖培養(yǎng)基）可作為TP26的優(yōu)化培養(yǎng)基。表明黃豆成分有利于增強食用菌的生長勢。

2.2 不同液體培養(yǎng)基對TP26菌絲的影響

圖2 TP26在不同供試液體培養(yǎng)基中的菌絲體生物量

含葡萄糖的培養(yǎng)基普遍長勢良好，獲得菌絲生物量高，容易被TP26吸收利用。TP26菌絲體在5號培養(yǎng)基（黃豆-葡萄糖培養(yǎng)基）生物量遠高于其他培養(yǎng)基，菌絲生物量可達到0.82 g/100 ml，每100 ml培養(yǎng)基的菌絲生物量比其它供試培養(yǎng)提高0.37 g-0.79 g（干重）。改良土豆培養(yǎng)基的菌絲生物量也較高，菌絲生物量可達到0.45 g/100 ml，與平板培養(yǎng)實驗中菌絲長勢結(jié)果吻合；最后選定黃豆-葡萄糖（5號）為TP26最適的液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

2.3 TP26固體培養(yǎng)基的改良

由于黃豆所含成分能夠增強TP26的生長勢，試驗以黃豆渣為材料制備TP26的固體培養(yǎng)基（表4）。試驗發(fā)現(xiàn)隨著黃豆渣濃度的增加而增加，菌絲逐漸濃厚、粗壯；當豆渣濃度增大到14%時，菌落的生長速度和菌落狀態(tài)達到最優(yōu)（圖1 G3），當豆渣濃度超過14%時，食用菌菌落形態(tài)沒有明顯增強，反而生長速率略有下降（表4），因此，G3培養(yǎng)基為TP26最適固體培養(yǎng)基。

表4 黃豆濾渣培養(yǎng)基對唐平26菌絲生長影響

3 討論和結(jié)論

由于黃豆渣在液體培養(yǎng)基制作過程中容易產(chǎn)生大量沉淀，因此，黃豆濾液-葡萄糖培養(yǎng)基可以作為最優(yōu)的液體培養(yǎng)基。TP26對黃豆浸提液的利用較好，菌絲生長快，菌絲生物量最高，這和孟艷瓊[12]等的研究一致。在以黃豆渣配制的固體培養(yǎng)基中，TP26菌落周圍出現(xiàn)了透明圈，以及黃豆-葡萄糖液體培養(yǎng)基在發(fā)酵后期發(fā)酵液越來越澄清，推測可能是菌絲體在生長過程中不斷分泌胞外酶分解基質(zhì)的原因[9]。由于黃豆成分復(fù)雜，除了含有豐富的蛋白質(zhì)外，還含大量的脂肪、碳水化合物及無機鹽類、維生素類和氨基酸類[13]，這些成分是否對菌體生長有促進作用，還有待進一步研究。但以黃豆渣為培養(yǎng)基成分顯著增強了TP26的生長勢。以TP26菌株為供試菌株進行平菇培養(yǎng)基篩選的試驗表明：黃豆濾液-葡萄糖培養(yǎng)基（5號）和黃豆渣-葡萄糖培養(yǎng)基（G3）中的平菇生長狀態(tài)優(yōu)于其它的培養(yǎng)基，可作為TP26的最優(yōu)固體培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基的開發(fā)實現(xiàn)了黃豆成分的全利用，降低了生產(chǎn)過程中的成本消耗。

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