劉子明（吉林工程職業(yè)學院，吉林四平136001）

HPLC法測黃瓜籽中蕓香苷、異槲皮苷含量

劉子明
（吉林工程職業(yè)學院，吉林四平136001）

摘要：建立HPLC雙波長法同時測定黃瓜籽中蕓香苷、異槲皮苷含量的方法。以shim-pack VP-ODS C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）為固定相，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為254、273 nm，柱溫30℃。蕓香苷、異槲皮苷分別在0.001 59 mg/mL～0.159 mg/mL（r=0.999 8）和0.001 06 mg/mL～0.106 mg/mL（r=0.999 5）線性范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為99.24%（RSD=0.4%，n=6）和98.56%（RSD=0.5%，n=6）。該方法快速、簡便、準確、可靠。

關(guān)鍵詞：蕓香苷；異槲皮苷；黃瓜籽；HPLC；雙波長；含量測定

黃瓜，又名青瓜，刺瓜，胡瓜和吊瓜等，為葫蘆科一年生草本植物。黃瓜籽是葫蘆科植物黃瓜的種子。黃瓜籽的主要成分為多種游離氨基酸（其中丙醇二酸在人體有減肥和預(yù)防冠心病的功效）和維生素、木糖、果糖以及蕓香苷、異槲皮苷、精氨酸的葡萄糖苷等苷類、胡蘿卜素及其它對人體有益的礦物質(zhì)、硫胺素、核黃素?！栋倏迫珪泛汀吨袊t(yī)藥寶典》記載：“黃瓜籽具有補鈣，接骨，壯骨的功能，對風濕，關(guān)節(jié)炎，肩周炎，頸椎病，腰椎病，股骨頭壞死等疾病有很好的食療效果?！?/p>

近幾年，對黃瓜籽化學成分的研究有一些文獻報道[1]，但對其含量測定方面的研究報道尚少。本文主要是以其成分蕓香苷、異槲皮苷為研究對象，采用HPLC雙波長法對其進行含量測定，并對其進行方法學驗證。結(jié)果表明，該方法快速、簡便、準確、可靠。

1　儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀（SHIMADZU 2010AHT）；Class-Vp色譜軟件系統(tǒng)；FA2004電子天平：上海精密科學儀器廠；QW3200V型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司。

1.2試藥

蕓香苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707）；異槲皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111809-201102）；黃瓜籽（市場購買）；乙腈（色譜純）：天津市科德科技有限公司；磷酸（分析純）：天津市福晨化學試劑廠；二次蒸餾水：食品藥品分析與檢驗實驗室自制。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備

分別精密稱取干燥至恒重的蕓香苷、異槲皮苷對照品適量，甲醇溶解并定容，分別配成各含0.5 g/L的對照品儲備液。再分別精密量取適量各對照品儲備液，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混合均勻，即得混合對照品溶液，備用。

2.1.2供試品溶液的制備

稱取黃瓜籽適量，粉碎，稱取黃瓜籽粉（過3號篩）10 g，精密稱定，置250 mL三角瓶中，精密加入甲醇100 mL，超聲處理50 min，放冷[2-3]，用甲醇補足損失的重量，搖勻，過濾，收集濾液，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗

色譜柱：shim-pack VP-ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）[4]；進樣量：10 μL；流速1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測器：二極管陣列檢測器；檢測波長254、273 nm[5]。各主成分與相鄰峰之間的分離度大于1.5，分離度良好。色譜條件見表1。

表1　色譜條件Table 1　Chromatographic condition

分別取對照品和供試品溶液注入高效液相色譜儀中進行測定，結(jié)果見圖1。

圖1　高效液相色譜圖Fig.1　The figure of High performance liquid chromatography

2.3線性關(guān)系考察

分別精密稱取干燥至恒重的蕓香苷、異槲皮苷對照品15.9、10.6 mg，分別置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取蕓香苷、異槲皮苷對照品溶液0.1、0.5、1、2、5、10 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，注入液相色譜儀分析。以峰面積積分值對濃度做線性回歸方程，得各成分回歸方程，結(jié)果見表2。

表2　回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍表（n=6）Table 2　The table of regression equation、related coefficient andlinearity range（n=6）

2.4精密度試驗

分別精密吸取上述對照品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復進樣6次，計算得蕓香苷、異槲皮苷峰面積積分值的RSD分別為1.31%、0.91%，表明儀器精密度良好。

2.5重復性試驗

取同一批樣品按照2.1.2項下供試品溶液的制備方法制備6份，各取10 μL進樣測定，結(jié)果蕓香苷、異槲皮苷含量的RSD分別為1.42%、1.13%，表明重復性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

取按2.1.2項下供試品溶液制備方法制備的同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h進樣10 μL，測定蕓香苷、異槲皮苷峰面積積分值的RSD為2.03%、1.36%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗

精密取已知含量的同一批樣品適量，共6份，分別精密加入蕓香苷、異槲皮苷對照品適量，按照2.1.2項下制備，依法測定，計算回收率，結(jié)果表明，本法準確可靠，結(jié)果見表3。

表3　加樣回收率測定結(jié)果（n=6）Table 3　The result of recovery rate test（n=6）

2.8樣品測定

取黃瓜籽粉樣品3份，每份做3個平行，按2.1.2項下供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算含量，結(jié)果見表4。

表4　樣品測定結(jié)果（n=3）Table 4　The result of sample test（n=3）

3　討論

3.1流動相的選擇

本研究參考文獻考察了乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸兩種流動相，結(jié)果乙腈-0.2%磷酸（15∶85）系統(tǒng)能使蕓香苷、異槲皮苷完全分離且沒有拖尾現(xiàn)象。

3.2提取方法的選擇

樣品處理時，采用水和甲醇分別進行超聲處理和回流處理。結(jié)果顯示，甲醇的提取效率較高；采用超聲50 min和加熱回流2 h提取效率相當，考慮方便、節(jié)能，選擇了超聲處理樣品。

3.3檢測波長的選擇

本研究均選用兩種成分的最大吸收波長為設(shè)定波長，采用雙波長方法檢測分析，簡便、快捷。

4　結(jié)論

以黃瓜籽中蕓香苷、異槲皮苷為研究對象，采用HPLC雙波長法對其進行含量測定。結(jié)果表明，該方法快速、簡便、準確、可靠，可用于黃瓜籽中蕓香苷、異槲皮苷的含量測定。

參考文獻：

[1] 田桂麗,苗晗,張圣平,等.黃瓜籽化學成分及其功效[J].中國蔬菜, 2014(8):7-11

[2]黃興富,黎其萬,劉宏程,等.高效液相色譜法同時測定苦蕎中蘆丁、槲皮素和山柰酚的含量[J].中成藥,2011(2):345-347

[3]吳笛,王崢濤,張勉.高效液相色譜法同時測定款冬花中蘆丁、異槲皮苷、綠原酸的含量[J].中國中藥雜志,2010(20):2722-2725

[4]何洋,周洪波,劉建雄,等.HPLC法同時測定金鈕扣中蘆丁和異槲皮苷的含量[J].沈陽藥科大學學報,2013(4):268-271

[5]史新,王立升,龐賽,等.一點紅藥材中異槲皮苷的分離鑒定及指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志,2012(5):809-812

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.20.040

收稿日期：2015-02-03

作者簡介：劉子明（1979—），男（漢），講師，本科，學士，主要研究方向：食品藥品分析與質(zhì)量控制研究。

Determination of Isoquercitrin and Rutin in Cucumber Seeds by HPLC

LIU Zi-ming
（Jilin Engineering Vocational College，Siping 136001，Jilin，China）

Abstract：To set up an HPLC method of double-wavelength simultaneous determination of the content for rutin and isoquercitrin in Cucumber seeds.The solid phase was shim-pack VP-DOS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）. The mobile phase was composed of acetonitrile-0.2%Phosphoric acid（15∶85），the flow rate was 1.0 mL/min，the detection wavelength was set at 254 nm and 273 nm，the temperature of chromatographic column was 30℃. good linear relationships were found within the range of 0.001 59 mg/mL-0.159 mg/mL（r=0.999 8）of rutin and 0.001 06 mg/mL-0.106 mg/mL（r=0.999 5）of isoquercitrin the average of recovery rate was 99.24%（RSD= 0.4%，n=6）and 98.56%（RSD=0.5%，n=6）.The results of the study showed that this method was rapid，simple，accurate and reliable.

Key words：rutin；isoquercitrin；cucumber seeds；HPLC；double-wavelength；content determination