張玲昂，王俊杰，張松亮，劉 弘

痛寧膠囊由延胡索、徐長卿、白芷、川芎、葛根、防風、郁金、香附八味中藥組成［批準文號：濟制字（2011）B11007］，具有理氣活血，祛風止痛之功效。臨床用于氣滯血瘀所致的頭痛、腰痛、胃痛、風濕性關節(jié)炎等，療效確切。痛寧膠囊提取工藝設計了兩個步驟，延胡索醇提，其余七味藥材水提。其中醇提部分四氫帕馬丁含量已做研究，而水提部分未做研究，為了更好地反映制劑的整體質(zhì)量，采用RP－HPLC法對葛根中葛根素含量進行測定?，F(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20AT高效液相色譜儀；SPD－M20A二極管陣列檢測器；島津LC－色譜工作站。葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號110752－200804）；痛寧膠囊批號為131127、131204、131210；甲醇為色譜醇；水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為 Agilent TC－C18柱（250mm×4.6mm，5 μm），流動相為甲醇－水（24∶76），檢測波長為 250 nm；流速為 1.0 ml／min，柱溫為 30 ℃，進樣量 10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品11.82 mg至100 ml容量瓶中，加甲醇適量溶解，定容，搖勻，作為對照品儲備液，精密量取5 ml至10 ml容量瓶中，用甲醇溶液定容，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品適量，研細，精密稱取0.8 g，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇溶液 50 ml，稱重，超聲提取 0.5 h（功率為 200 W、頻率為 40 kHz），取出放冷，稱重，補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液4 ml至20 ml容量瓶中，定容，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按痛寧膠囊的處方及制備工藝制備不含葛根的樣品，按上述方法制成陰性對照溶液。

2.3 方法學考查

2.3.1 專屬性試驗 取上述制備的對照品，供試品，陰性對照溶液各10 μl，按色譜條件測定，葛根素峰和其他組分峰達到良好分離，陰性無干擾，出峰時間較快，見圖1。

圖1 葛根素的高效液相色譜圖

2.3.2 線性關系考察 精密吸取葛根素儲備液 1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 ml至 20 ml容量瓶中， 加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。分別吸取10 μl進行HPLC分析，測定葛根素的峰面積。并以峰面積（A）對進樣量（m）進行線性回歸?；貧w方程A＝3781445m＋12038，r＝0.9998； 結(jié) 果 表 明 葛 根 素 進 樣 量 在0.0591～0.9456 μg 范圍內(nèi)線性良好。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取葛根素對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，重復進樣5次，測定峰面積積分值的RSD為0.89%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取室溫放置的供試品溶液，分別于0、3、6、12、24 h 注入色譜儀，測定葛根素峰面積，RSD 為0.83%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復性試驗 精密量取同一批號的痛寧膠囊6份，制備成供試品溶液，進樣，測得葛根素含量，RSD為0.83%，表明本方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收試驗 精密稱取葛根素對照品 19.02 mg至25 ml容量瓶中，加30%的乙醇溶液適量溶解，定容，搖勻，作為對照品儲備液。精密稱取已知含量的樣品9份（14.72 mg／g），0.1 g／份，置具塞錐形瓶中，分別精密量取上述對照品儲備液 1.6、2.0、2.4 ml，加入錐形瓶中，照供試品溶液的制備方法制備溶液，測定葛根素含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定 分別精密稱取3個批次樣品，依次為131127、131204、131210，制備成供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μl注入液相色譜儀中，測定峰面積，按外標法計算含量，葛根素含量依次為 14.72、14.40、14.86 mg／g，表明制劑含量穩(wěn)定。

3 討 論

3.1 目標成分選擇 結(jié)合藥物提取工藝，延胡索醇提，其余藥材水提，最初的研究為選擇延胡索中四氫帕馬丁作為單指標成分來定含量，但從提取過程看，其不能很好地反映制劑的水提工藝質(zhì)量，葛根具有痛經(jīng)活絡功效，用于項背強痛、眩暈頭痛、胸痹心痛等［1］，所以選擇其指標成分做進一步的研究。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）

3.2 檢測波長考察 經(jīng)過紫外掃描，葛根素在250 nm處有峰值，和多處參考資料相符，因此選擇此波長段為檢測波長［2－7］。

3.3 提取方法考察 依據(jù)葛根素理化性質(zhì)及所選提取溶劑為水并參考其他資料［2，3］，采用超聲提取，選擇甲醇在 20、30、40、50 min時取樣考察，發(fā)現(xiàn)在30 min后，提取量已無變化，且色譜圖雜峰較少，背景干凈，故選擇了甲醇超聲0.5 h。

3.4 流動相考察 參照葛根素的常用流動相檢測系統(tǒng)，對乙腈－水－磷酸［2］、甲醇－乙腈－水［3］、乙腈－水［4］、甲醇－水［5－7］系統(tǒng)進行考察，通過對保留時間，分離度，拖尾因子等綜合分析，并結(jié)合實驗操作的簡繁，最終選擇甲醇－水（24∶76）為流動相。

本試驗方法準確率高，重復性好，可作為痛寧膠囊中葛根素的含量測定方法；同時筆者也是想表述一個觀點，即對同一制劑，應該在每一步工藝過程中確立一種指標成分為這步含量測定的基準，以此制定質(zhì)量標準。這樣可以使產(chǎn)品整體質(zhì)量更加清晰，便于產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控和市場監(jiān)督，其可行性需更多的研究、論證和認可。

［1］中華人民共和國藥典編委會.中國藥典［S］.2010年版.第一部，312－313.

［2］張元元，李 進，陳 濤，等.暑熱寧合劑提取工藝優(yōu)化［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（24）：49－51.

［3］中華人民共和國藥典編委會.中國藥典［S］.2010年版.第一部，1147.

［4］李延雪，王云龍，姜雪敏.HPLC法測定小兒熱速清糖漿中葛根素的含量［J］.中國藥師，2012，15（8）：830－832.

［5］胡 倩，李建華，閆國立.正交試驗優(yōu)選升麻葛根顆粒提取工藝［J］.中國藥房，2012，23（23）：2139－2140.

［6］任曉明，趙 輝，夏洪穎.HPLC法測定降壓平片中葛根素的含量［J］.中國藥師，2012，15（10）：1510－1511.

［7］袁強華，宋 英，朱璐璐，等.感甦合劑的質(zhì)量控制［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2013，33（2）：111－115.