楊蓉，蔡狀

1哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司；2北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司

奧硝唑氯化鈉注射液的含量測(cè)定方法研究

楊蓉1，蔡狀2

1哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司；2北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司

目的：建立奧硝唑氯化鈉注射液中奧硝唑的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，以318 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，以甲醇-水（20：80）為流動(dòng)相，柱溫為30℃，流速為1ml/min。結(jié)果：奧硝唑在20～280μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.97%，樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，且空白輔料不干擾本品的含量測(cè)定。結(jié)論：本法操作快速、準(zhǔn)確，可作為該制劑的含量測(cè)定方法。

奧硝唑；HPLC；含量測(cè)定

1 儀器與試藥

Agilent 1200；AB135-S梅特勒-托利多電子天平。奧硝唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)食品藥品檢定研究院）；奧硝唑氯化鈉注射液（自制，批號(hào)：141201、141202、141203）；甲醇（色譜純）；超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：艾杰爾Venusil MP C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相甲醇-水（20：80）；檢測(cè)波長(zhǎng)為318 nm；流速1 ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備取奧硝唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加流動(dòng)性溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備精密量取本品1ml（約相當(dāng)于奧硝唑5mg），置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液的制備按處方比例取不含奧硝唑的其他成分，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成空白溶液。

2.3 含量測(cè)定波長(zhǎng)選擇試驗(yàn)精密稱取奧硝唑?qū)φ掌愤m量，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成約20μg/ml的溶液。取20μL注入液相色譜儀，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果奧硝唑在318nm處有最大吸收，確定測(cè)定波長(zhǎng)為318nm。

2.4 專屬性試驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液各20μL注入液相色譜儀，照含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果表明空白輔料中在與奧硝唑?qū)φ掌繁Ａ魰r(shí)間相應(yīng)的位置無色譜峰，不干擾主峰的測(cè)定，方法專屬性良好。

2.5 耐用性試驗(yàn)在“2.1”項(xiàng)下的色譜條件基礎(chǔ)上，柱溫改變（± 5℃）、流速相對(duì)值變化±20%、流動(dòng)性pH變化±0.2、檢測(cè)波長(zhǎng)改變± 2nm、改變不同批號(hào)的艾杰爾Venusil MP C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱。結(jié)果表明，測(cè)量條件微小變動(dòng)時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果符合要求，各條件下的含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98%，不大于2.0%。

2.6 方法精密度試驗(yàn)取樣品按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，照含量測(cè)定方法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明平均含量為100.27%，RSD%為0.71%，方法精密度良好。

2.7 系統(tǒng)適用性重復(fù)性精密量取對(duì)照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積平均值為223096，RSD%為0.59%，儀器重復(fù)性良好。

2.8 定量限取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，逐步稀釋至信噪比約為10：1，取稀釋的溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，通過游標(biāo)卡尺測(cè)量可知此時(shí)峰高為5.36nm，基線噪音為0.46nm，經(jīng)計(jì)算信噪比為11.66，定量限為0.0426mg/ml。

2.9 線性試驗(yàn)精密稱取奧硝唑?qū)φ掌?00mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)性溶解，稀釋至刻度，得1mg/ml溶液，分別量取上述溶液適量，得每ml含奧硝唑20、60、100、160、240、280μg的流動(dòng)相溶液。取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果線性方程為A= 548617C-1077.3，γ=0.9999，其響應(yīng)因子的RSD為0.54%，符合線性要求。Y軸截距為1077.3遠(yuǎn)小于100%響應(yīng)值的2%（4367.39）。

2.10 準(zhǔn)確度試驗(yàn)設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度（即80%、100%、120%），每個(gè)濃度制備3份供試品溶液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)照品溶液配制：精密稱取奧硝唑?qū)φ掌?00mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)性溶解，稀釋至刻度，得1mg/ml溶液。供試品溶液配制：取50ml量瓶9個(gè)，分別加入約相當(dāng)于奧硝唑5mg時(shí)的空白輔料量，分別標(biāo)號(hào)1,2,3,4,5,6,7,8,9。其中1,2,3號(hào)量瓶加入奧硝唑?qū)φ掌芳s4mg，4,5,6號(hào)量瓶加入奧硝唑?qū)φ掌芳s5mg，7,8,9號(hào)量瓶加入奧硝唑?qū)φ掌芳s6mg。精密量取上述各供試品20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算奧硝唑的回收率、平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度回收率為99.97%，RSD為0.71%。方法準(zhǔn)確可行。

2.11 樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算奧硝唑含量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果供試品在24h放置過程中，奧硝唑平均含量為99.15%，含量的RSD為1.02%，因此供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.12 三批樣品含量測(cè)定三批樣品含量結(jié)果分別為99.98%、100.02%和100.24%，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定要求。

3 討論

奧硝唑氯化鈉注射液含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用HPLC法測(cè)定奧硝唑氯化鈉注射液中奧硝唑的含量具有專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，較紫外分光光度法更加先進(jìn)，結(jié)果更準(zhǔn)確，因此本法可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]李全斌，喬明艷.國(guó)內(nèi)奧硝唑醫(yī)院制劑的開發(fā)及臨床應(yīng)用[J].海峽藥學(xué)，2005，18（5）：135-137.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[Z].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社2010.附錄194-195.

楊蓉（1988-），女，哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)股份有限公司，黑龍江省哈爾濱市，本科，藥師，研究方向：藥物分析。

蔡狀（1988-），男，北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司，黑龍江省哈爾濱市，本科，藥師，研究方向：藥物制劑。