布仁圖亞 斯欽圖

(1.赤峰市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物：110 只純種4 月齡SD 大鼠，體重為雄性304 ±30g、雄性376 ±40 g、雌雄各半。

1.2 器材：755B 紫外-可見(jiàn)分光光度機(jī)、固定熱水盒、電子分析天平、高速冷凍離心機(jī)、4-20 0C 和-80 0C 冰箱、水迷宮、游泳盒。

1.3 試劑及施灸器：AUY120 型電子天平、MORRIS 水迷宮視屏跟蹤分析機(jī)、D-半乳糖(上?？笊锛夹g(shù)有限公司，編號(hào)：T0047)、艾灸由北京中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)提供。

2 方法

2.1 分組：將110 只SD 大鼠按體重隨機(jī)分成11 組。分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、治療組(用正交試驗(yàn)L9(34)設(shè)計(jì)組為：第1、2、3、4、5、6、7、8、9 組)。造模前將大鼠雌雄分開(kāi)、在干凈舒適環(huán)境中飼養(yǎng)。每天將更換顆粒資料飲水和窩墊。試驗(yàn)第六wk 開(kāi)始分別對(duì)所進(jìn)資料和飲水量進(jìn)行記錄。

2.2 造模：成正常對(duì)照組外均用D-半乳糖按每wk 體重每日150mg/kg 的比例頸皮下注射，正常對(duì)照組注射同等劑量生理鹽水。在造模期間每wk 稱一次大鼠體重，并觀察大鼠運(yùn)動(dòng)舉止和皮毛的顏側(cè)色等外部特征。造模時(shí)間為6wk。出現(xiàn)大鼠皮毛顏色變黃脫落，眼光變呆，動(dòng)作緩慢，出現(xiàn)無(wú)精打采、駝背、怕冷，體重增加不明顯等外部特征，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［2-5］，即造模成功。

3 標(biāo)本收集及檢測(cè)方法

采用斷頭取血方法，將新取處的血放入低速離心機(jī)，按3500rpm 的速度離心15min 后提取血清。超氧化歧酶(SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定，過(guò)氧化氫酶(CAT)含量采用比色法測(cè)定。

4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用正交設(shè)計(jì)助手v3.1 軟件處理。

5 結(jié) 果

5.1 造模狀況：正常對(duì)照組與模型對(duì)照組比較，體重有明顯的差異(P＜0.01)，表明造模后模型對(duì)照組體重增長(zhǎng)變化緩慢，見(jiàn)表1。

造模后各灸療組與模型組大鼠體重比較，各灸療組大鼠體重增加比模型組快(P＜0.05)，說(shuō)明造模成功后模型組大鼠體重增長(zhǎng)受限，見(jiàn)表2。

除此之外，我們還觀察到，模型大鼠動(dòng)作比正常對(duì)照組拜年遲緩，毛色枯黃，精神萎靡不振等外部特征。

表1 造模3wk 后正常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠體重比較(±s，n=10)

表1 造模3wk 后正常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠體重比較(±s，n=10)

組別 體重(g)P 316.82 ±23.49 ＜0.05模型對(duì)照組正常對(duì)照組283.76 ±27.32 ＜0.05

表2 造模后各灸療組和模型對(duì)照組大鼠體重比較(±s，n=10)

表2 造模后各灸療組和模型對(duì)照組大鼠體重比較(±s，n=10)

注：各灸療組與模型對(duì)照組比較，☆P ＜0.05。

組別 體重模型對(duì)照組311.12 ±22.03治療1 組 340.64 ±45.98☆治療2 組 338.90 ±37.53☆治療3 組 340.87 ±41.09☆治療4 組 342.07 ±39.78☆治療5 組 354.98 ±35.56☆治療6 組 365.87 ±35.78☆治療7 組 342.09 ±35.98☆治療8 組 357.50 ±32.98☆治療9 組 337.25 ±38.36☆

5.2 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化SOD 的活性

5.2.1 SOD 的因素及水平：根據(jù)文獻(xiàn)參考資料確定時(shí)間、灸墊、直徑作為考查因素缺，以測(cè)定SOD 的活性為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。因素及水平見(jiàn)表3。

表3 因素水平設(shè)計(jì)表

5.2.2 試驗(yàn)方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果填于表4 中，見(jiàn)表3、表4。

表4 SOD 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.2.3 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：SOD 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無(wú)顯著性差異，最佳SOD 的活性條件為A2B2C1 即為：用10min 時(shí)間0.2cm 灸墊0.8的直徑。

表5 方差分析

5.2.4 試驗(yàn)方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果填于表6 中，見(jiàn)表3、表6。

表6 MDA 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表6 MDA 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.2.5 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：MDA 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無(wú)顯著性差異，最佳MDA的活性條件為A2B2C2 即為：用10min 時(shí)間、0.2cm 灸墊、1.0 的直徑。

表7 方差分析

5.2.6 試驗(yàn)方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果填于表8 中，見(jiàn)表3 表8。

表8 CAT 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.2.7 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：CAT 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無(wú)顯著性差異，最佳CAT 的活性條件為A2B2C2 即為：用10min 時(shí)間、0.2cm 灸墊、1.0的直徑。

表9 方差分析

6 結(jié)論與討論

根據(jù)上述試驗(yàn)，不同施救方法對(duì)SOD 的活性最佳時(shí)間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為0.8cm，MDA 的活性最佳時(shí)間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為1.0cm，CAT 最佳時(shí)間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為1.0cm。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)對(duì)SOD 活性、CAT 和MDA 的含量進(jìn)行了優(yōu)化，通過(guò)多個(gè)因素、多個(gè)水平研究表明，蒙醫(yī)不同的灸療法施灸后可提高免疫功能。

［1］斯欽圖，烏云格日樂(lè)，“胃穴”“火降穴”施灸對(duì)功能性消化不良大鼠的影響及其組穴原理［J］，針灸臨床雜志，2008，3，(24)：163-165.

［2］徐智，吳國(guó)明，錢(qián)桂生，大鼠衰老模型的初步建立［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，4(25)：9-11.

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［4］朱亞診，朱虹光，D-半乳糖致衰老動(dòng)物模型的建立及其檢測(cè)方法［J］. 針灸臨床雜志，2010，3，(14)：160-161.

［5］斯欽圖，博·阿古拉等，蒙醫(yī)灸療法抗衰老二三穴組穴配伍規(guī)律試驗(yàn)研究［J］.期刊，2010，12(6)：48-49.

［6］烏云格日樂(lè)，斯欽圖. 蒙醫(yī)灸療的保健作用及其機(jī)理［J］.中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2007，4(4)：122-124.