董 朝， 劉春生， 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科，新疆 烏魯木齊 830011)

?

·臨床研究·

HER-2、BRCA1和BRCA2聯(lián)合檢測在新疆維、漢族婦女乳腺癌診斷中的應用

董 朝， 劉春生， 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科，新疆 烏魯木齊 830011)

目的 研究HER-2、BRCA1和BRCA2聯(lián)合檢測在新疆維吾爾族、漢族婦女乳腺癌早期診斷中的應用。方法 通過組織芯片技術及免疫組織化學方法檢測68例新疆維吾爾族散發(fā)性乳腺癌患者(觀察組)、68例漢族散發(fā)性乳腺癌患者(對照組)乳腺癌組織中HER-2、BRCA1及BRCA2的表達。比較分析兩者表達特點及與臨床病理參數(shù)間的關系。結果 觀察組中HER-2的表達陽性率為41.18%(28/68)，BRCA1表達陽性率為63.24%(43/68)，BRCA2的表達陽性率為57.35%(39/68)，均顯著高于對照組的22.06%(15/68)，23.53%(16/68)，26.50%(18/68)，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。觀察組中乳腺癌組織中HER-2、BRCA1及BRCA2的表達不具有相關性；對照組中，若HER-2陰性表達時，BRCA1與BRCA2的表達具有相關性(r=0.344，P=0.002)；若HER-2陽性表達時，BRCA1與BRCA2的表達不具有相關性(r=0.156,P=0.488)。新疆維吾爾族婦女BRCA1、HER-2表達與年齡、腋淋巴結轉移情況、臨床分期有相關性(P<0.05)，HER-2、BRCA2表達與腫瘤大小有相關性(P<0.05)。結論 新疆維吾爾族與漢族婦女散發(fā)性乳腺癌組織中HER-2、BRCA1及BRCA2的表達均存在差異。

新疆維吾爾族； 散發(fā)性乳腺腫瘤； HER-2； BRCA1； BRCA2

散發(fā)性乳腺癌，即是無法找到完整的癌變點的乳腺癌癥[1]。女性的乳腺結構，是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪構成，而乳腺癌則是發(fā)生在乳腺腺上皮組織中的惡性腫瘤。近年來，通過考察與研究發(fā)現(xiàn)，由于地域，飲食，以及氣候等多方面的原因，新疆維吾爾族地區(qū)女性患散發(fā)性乳腺癌的幾率要遠遠超出漢族婦女[2-3]。本研究分析新疆維吾爾族婦女與漢族婦女乳腺癌組織中HER-2、BRCA1及BRCA2的表達差異，探討新疆維吾爾族婦女與漢族婦女散發(fā)性乳腺癌患病情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年4月至2013年4月于新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院確診的68例新疆維吾爾族散發(fā)性乳腺癌女性患者為觀察組，年齡27～68歲，平均年齡(45.6±2.8)歲，腫瘤病灶平均直徑小于2.0cm。隨機選擇在我院進行治療的漢族散發(fā)性乳腺癌患者68例作為對照組。對照組年齡分布25～72歲，平均年齡(48.3±3.2)歲，腫瘤病灶平均直徑小于1.8cm。兩組在年齡及腫瘤病灶平均直徑等方面差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法[4]

所有標本均使用4%的甲醛固定，并用石蠟包埋，切片厚度3～5μm，之后采用免疫組織化學SP法進行檢測，在55～60℃溫箱中過夜，用PBS(pH=7.4)沖洗3次，每次5min，進行脫蠟。此后每張切片加50μl過氧化酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過氧化物的活性。再使用DAB顯色試劑盒(AR1022)進行DAB顯色，取1ml蒸餾水，加設計盒中A,B,C試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應時間，一般為5～30min。最后用蒸餾水進行洗滌，再用蘇木素輕度復染2min，脫水，透明，封片，之后即可進行顯微鏡觀察。并通過已知的切片作為對照，進行比對。并將結果進行記錄，便于下一步比較。

1.3 陽性判斷標準[5]

判斷標準為在每一個切片中隨機選取十個高倍鏡視野，進行細致觀察。視野內(nèi)BRCA1和BRCA2的檢測是以細胞核以及細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒而且細胞數(shù)均大于10%為陽性表達。HER-2的檢測是以其細胞膜或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒且細胞數(shù)大于25%為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學處理

以SPSS 13.0軟件分析，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組陽性表達率的比較分析

觀察組中HER-2的表達陽性率為41.18%(28/68)，BRCA1表達陽性率為63.24%(43/68)，BRCA2的表達陽性率為57.35%(39/68)，均顯著高于對照組的22.06%(15/68)，23.53%(16/68)，26.50%(18/68)，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組陽性表達率的比較

2.2 兩組蛋白表達相關分析

觀察組內(nèi)乳腺癌組織中HER-2、BRCA1、BRCA2表達無明顯差異。對照組乳腺癌組織中，若HER-2陰性表達時，BRCA1與BRCA2的表達具有相關性(r=0.344，P=0.002)；若HER-2陽性表達時，BRCA1與BRCA2的表達不具有相關性(r=0.156,P=0.488)，見表2。

表2 對照組中蛋白表達相關分析

2.3 新疆維吾爾族婦女HER-2、BRCA1、BRCA2的表達與臨床病理因素間的關系

觀察組中，BRCA1、HER-2表達與患者年齡、腋淋巴結轉移情況、臨床分期有相關性(P<0.05)。HER-2、BRCA2表達與腫瘤大小有相關性(P<0.05)，見表3。

表3 新疆維吾爾族婦女HER-2、BRCA1及BRCA2的表達與臨床病理各因素間的關系

3 討 論

乳腺疾病是困擾大多數(shù)女性的疾病之一。近年來，乳腺癌發(fā)病率逐步升高，而乳腺癌中有90%～95%的情況為散發(fā)性乳腺癌[6]。乳腺癌的發(fā)病機制尚未完全清楚，引起乳腺癌的主要原因有： (1) 月經(jīng)初潮早,絕經(jīng)遲；(2) 未婚，未育，晚育，未哺乳；(3) 患乳腺良性疾病未及時診治；(4) 經(jīng)醫(yī)院活檢證實患有乳腺非典型增生[7]；(5) 胸部接受過高劑量放射線的照射；(6) 長期服用外源性雌激素；(7) 絕經(jīng)后肥胖；長期過量飲酒；(8) 攜帶與乳腺癌相關的突變基因等原因有關[8]。對于散發(fā)性乳腺癌而言，地域、氣候等因素的影響要更加明顯，新疆維吾爾族婦女患散發(fā)性乳腺癌的幾率就要遠遠超過漢族婦女。研究[5，9]發(fā)現(xiàn)，HER-2、BRCA1及BRCA2的表達是新疆維吾爾族婦女患散發(fā)性乳腺癌高發(fā)的重要因素。

本研究通過對比新疆維吾爾族患散發(fā)性乳腺癌患者與漢族患者的乳腺癌組織，觀察HER-2、BRCA1及BRCA2的表達情況，發(fā)現(xiàn)新疆維吾爾族婦女乳腺癌組織中HER-2的表達陽性率為41.18%，BRCA1表達陽性率為63.24%，BRCA2的表達陽性率為57.35%，均顯著高于漢族婦女。這與黃崇植等[10]的研究結果一致，說明HER-2、BRCA1及BRCA2的表達的確存在地域性的差異。此外，通過顯微鏡觀察及對比蛋白質表達分析記錄，發(fā)現(xiàn)新疆維吾爾族婦女散發(fā)性乳腺癌組織中HER-2、BRCA1、BRCA2的表達不具有相關性，但是漢族婦女乳腺癌組織中HER-2、BRCA1、BRCA2的表達則有顯著的相關性，這與孟榮榮等[11]的研究結果一致,表明蛋白質的表達對于不同人群有著不同的效果。進一步分析顯示，新疆維吾爾族婦女乳腺癌組織中BRCA1、BRCA2及HER-2的表達與年齡、是否絕經(jīng)、腋淋巴結轉移等多項臨床病理因素都相關，這與王寧等[12]的研究結果一致，說明了年齡等也是觀測其表達的重要指標。研究[13]表明，新疆維吾爾族婦女與漢族婦女出現(xiàn)的表達差異可能是因為人種、遺傳背景以及文化風俗飲食習慣的不同所帶來的。研究[5，14]表明，BRCA1、BRCA2的缺失在新疆維吾爾族婦女散發(fā)性乳腺癌的診斷中起著決定性作用，這說明研究HER-2、BRCA1、BRCA1的必要性將進一步提高。

[1] 熊鳴.乳腺癌易感基因BRCA1的研究進展[J].生命科學,2012,24(10)： 1197-1201.

[2] 尹琳琳,陳耀平,楊寶珍，等.回族家族性乳腺癌患者BRCA1/BRCA2基因序列突變分析[J].現(xiàn)代免疫學,2012,32(2)： 115-119.

[3] 吳燕梅,施俊義,鄭唯強.基底細胞樣乳腺癌的分子病理學進展[J].臨床與實驗病理學雜志,2013,29(3)： 313-316.

[4] 李正東，蔣蓓琪，莊志剛.乳腺浸潤性導管癌ER、PR、CerbB-2、Ki-67表達與臨床病理及預后的關系[J].同濟大學學報： 醫(yī)學版，2009，30(5)： 70-74.

[5] 馬斌林,孫剛,董朝，等.新疆維漢婦女散發(fā)性乳腺癌組織中HER-2 BRCA1和BRGA2蛋白表達及其相關性研究[J].中國腫瘤臨床,2009,36(6)： 328-332.

[6] 解云濤.家族性乳腺癌BRCA1、2基因突變檢測及臨床應用[J].中國實用外科雜志,2013,33(3)： 233-235.

[7] 張銀華,趙峰,楊麗麗.BRCA1和BRCA2在基底細胞樣乳腺癌中的表達及意義[J].實用醫(yī)學雜志,2011,27(3)： 375-377.

[8] 康毓芝,楊寶珍,陳耀平，等.寧夏地區(qū)回族女性散發(fā)性乳腺癌易感基因BRCA1/BRCA2突變的研究[J].臨床檢驗雜志,2011,29(4)： 295-297.

[9] 南潤玲,尚培中,王鐵山.乳腺癌易感基因BRCA1的研究進展[J].實用醫(yī)學雜志,2011,27(12)： 2284-2286.

[10] 黃崇植,張國君.家族性乳腺癌研究現(xiàn)狀[J].中國實用外科雜志,2011,31(10)： 972-974.

[11] 孟榮榮,應明真,王雅杰.BRCA基因相關散發(fā)性乳腺癌研究進展[J].醫(yī)學研究雜志,2012,41(4)： 4-7.

[12] Schouten PC, Marme F, Aulmann S, et al. Breast cancer with BRCA1-like DNA copy number profile recur less often than expectec after high-dose alkylating chemotherapy[J]. Clin Cancer Res， 2014. [Epub ahead of print].

[13] 張海添,陸云飛,曾健，等.散發(fā)性乳腺癌中BRCA1和BRCA2基因突變的研究[J].中華外科雜志,2007,45(7)： 480-482.

[14] Levanat S, Musani V, Cvok ML, et al. Three novel BRCA1/BRCA2 mutations in breast/ovarian cancer families in Croatia[J]. Gene, 2012,498(2)： 169-176.

Expression of HER-2, BRCA1 and BRCA2 in Han and Uygur patients with sporadic breast cancer in Xinjiang

DONGChao,LIUChun-sheng,MABin-lin

(Dept. of Head and Neck Surgery, Cancer Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Urgur Autonomous Region, China)

Objective To investigate the expression of HER-2, BRCA1 and BRCA2 in Han and Uygur patients with breast cancer in Xinjiang. Methods Expression of HER-2, BRCA1 and BRCA2 was detected by tissue microarray technique and immunohistochemical method in 68 Uygur patients and 68 Han patients with sporadic breast cancer from April 2010 to April 2013. The correlation of HER-2, BRCA1 and BRCA2 expression with clinicopathological parameters of disease was analyzed. Results The positive expression rates of HER-2, BRCA1 and BRCA2 in Uygur group were 41.18%(28/68), 63.24%(43/68) and 57.35%(39/68), respectively, which were significantly higher than those in Han group(22.06%, 5/68; 23.53%, 6/68 and 26.50%,18/68, allP<0.05). The expression of HER-2, BRCA1 and BRCA2 was not correlated with each other in Uygur group. In Han group when HER-2 was positively expressed, the expression of BRCA1 was significantly correlated with BRCA2(r=0.344,P=0.002), but the correlation was not found when HER-2 was negative(r=0.156,P=0.488). In Uygur group the expression of HER-2 and BRCA1 was correlated with age, axillary lymph node metastasis and clinical stages(P<0.05), the expression of HER-2 and BRCA2 was correlated with tumor size(P<0.05). Conclusion The expressions of HER-2, BRCA1 and BRCA2 are different between Uygur and Han patients with breast cancer in Xinjiang.

Xinjiang Uygur; sporadic breast cancer; HER-2; BRCA1; BRCA2

10.16118/j.1008-0392.2015.01.019

2014-06-06

董 朝(1977—)，男，副主任醫(yī)師，碩士.E-mail： 626195834@qq.com

馬斌林.E-mail： doveydc@21cn.com

R 737.9

A

1008-0392(2015)01-0087-04