劉波

摘要：以天女木蘭葉斑病病菌為試材，研究不同碳、氮源對天女木蘭葉斑病病菌生長的影響；試驗結(jié)果表明：適合菌絲生長碳源是乳糖與葡萄糖；適合菌絲生長的氮源是硝酸銨；最適合孢子萌發(fā)的碳源是葡萄糖；適合孢子萌發(fā)的氮源是硝酸銨；25℃適宜菌絲的生長，適宜孢子萌發(fā)的溫度是20～25℃；全光適宜菌絲的生長和孢子萌發(fā)。適合菌絲的生長和孢子萌發(fā)PH8與PH7。

關(guān)鍵詞：天女木蘭，天女木蘭葉斑病，生物學(xué)特性

天女木蘭（Magnolia sieboldii）自然分布于長江以南和長城以北，是中國東北地區(qū)惟一的野生木蘭屬植物，近幾年吉林省進(jìn)行了人工栽培研究，發(fā)現(xiàn)了天女木蘭葉斑病。天女木蘭葉斑病發(fā)病初期，葉面產(chǎn)生暗紅色點狀斑點，當(dāng)濕度適當(dāng)時迅速擴(kuò)展，病斑2～5厘米，可相連，葉片枯萎易脫落，經(jīng)查該病害由交鏈孢屬（Alternariasp.）引起，國內(nèi)尚未報道。

1 材料與方法

1.1 供試材料：天女木蘭葉斑病病菌由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院植物病理實驗室提供。

試驗儀器：恒溫培養(yǎng)箱、無菌操作臺、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)皿等。

供試碳源、氮源：葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖；硝酸鈣、硝酸銨、氯化銨、尿素、硝酸鉀以上均為化學(xué)分析純試劑，均由實驗室提供。

0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液、75%酒精等。

1.2 試驗方法：在無菌條件下將天女木蘭葉斑病病菌接種在經(jīng)高溫?zé)o菌操作的馬鈴薯半組合培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基（馬鈴薯200克、瓊脂20克、葡萄糖20克、蒸餾水1000毫升）培養(yǎng)皿中，恒溫25℃暗培養(yǎng)，取純化良好的菌絲及孢子待用。

不同碳源與氮源對菌絲生長的影響研究。

碳源：分別以含碳量相等的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、果糖和蔗糖做基礎(chǔ)成分取代培養(yǎng)基中的葡萄糖的成分來配制培養(yǎng)基并分別標(biāo)記好，每種處理4次重復(fù)。用無菌打孔器打取6毫米直徑的菌餅接種后置于25℃恒溫箱內(nèi)暗培養(yǎng)，每24小時觀察一次，利用“十”字交叉法定期測量菌落直徑并記錄。

氮源：分別以含氮量相等的硝酸銨、硝酸鈣、氯化銨、尿素、硝酸鉀添加到查氏培養(yǎng)基（磷酸氫二鉀1.00克、硫酸鎂0.50克、氯化鉀0.50克、硫酸亞鐵0.01克、蔗糖30.00克、瓊脂20.00克和蒸餾水1升）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的平板上培養(yǎng)基置換氮源并標(biāo)記好，測量方法同上。

不同碳源與氮源對孢子生長的影響研究。

當(dāng)菌種在培養(yǎng)基內(nèi)長到一定時間可用顯微鏡觀察，在產(chǎn)孢條件下對孢子萌發(fā)率的影響的試驗；在預(yù)試條件下進(jìn)行如下研究。碳源：用含碳量相同的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、果糖、蔗糖為溶液并調(diào)勻作為碳源的孢子懸浮液，將等量孢子懸浮液放入其中，25℃恒溫暗培養(yǎng)，按預(yù)試記錄的孢子萌發(fā)的時間開始觀察，并開始定時統(tǒng)計孢子萌發(fā)率，同時記錄當(dāng)有一處理接近或達(dá)到90%以上萌發(fā)時試驗結(jié)束，共5組處理4次重復(fù)。

氮源：以葡萄糖為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用含氮量相同的硝酸銨、硝酸鈣、氯化銨、尿素、硝酸鉀溶液并調(diào)勻作為氮源的孢子懸浮液，將等量孢子懸浮液放入其中，25℃恒溫暗培養(yǎng)，測量不同氮源條件下孢子萌發(fā)率，共5個處理，重復(fù)4次測量方法同上。

不同溫度對菌絲和孢子的影響研究。

以PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ)材料，在無菌條件下，用已滅菌的直徑為7毫米的打孔器打入先前培養(yǎng)好的病菌菌種，并將直徑7毫米的菌絲片移入PDA培養(yǎng)基平板上中央處。然后分別培養(yǎng)于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃的不同溫度梯度里，培養(yǎng)3天后測量菌落形成的直徑大小，共7個處理，每處理重復(fù)4次。配制以葡萄糖為溶液的孢子懸浮液，然后將適量的孢子懸浮液分裝在滅完菌的培養(yǎng)皿中并蓋上蓋，分別放置在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃不同溫箱里，并在7種溫度下進(jìn)行孢子萌發(fā)試驗。經(jīng)12、24小時后，在顯微鏡下觀察其孢子萌發(fā)率（每次觀察時用膠頭滴管將孢子懸浮液滴在載玻片上進(jìn)行觀察）。觀察不同溫度對孢子萌發(fā)的影響，共7個處理，3次重復(fù)。

不同光照對菌絲和孢子生長的影響。

在PDA培養(yǎng)基上接菌后分別置于3種不同光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)：①完全黑暗；②連續(xù)日光燈照射；③光暗交替：12小時光照：12小時暗處理，溫度是25℃恒溫，經(jīng)4天后取出測量菌落直徑，共3個處理，4次重復(fù)。

不同酸堿度對菌絲和孢子的影響。

經(jīng)高壓滅菌后的PDA培養(yǎng)基，用0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液，在無菌條件下進(jìn)行不同pH值調(diào)節(jié)，配制PH值分別為4、5、6、7、8、9、10培養(yǎng)基。用上述的方法接菌后，置于25℃溫箱中培養(yǎng)，經(jīng)4d后測量菌落直徑，共7個處理，4次重復(fù)。

用0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液、葡萄糖溶液調(diào)節(jié)PH值，配制PH值分別為4、5、6、7、8、9、10的孢子懸浮液，觀察記錄方法同上。

2 結(jié)果與分析

由表1可見，不同碳源處理分析乳糖與葡萄糖之間無顯著差異，但乳糖與葡萄糖處理與果糖、蔗糖、麥芽糖之間差異極顯著，乳糖與葡萄糖適合菌落生長；不同氮源處理分析硝酸銨與其他處理之間差異極顯著，所以最適合菌落生長的氮源是硝酸銨。

由表2可見，不同碳源處理分析葡萄糖與其它處理間達(dá)到極顯著水平，所以最適合孢子萌發(fā)的碳源是葡萄糖；不同氮源處理分析硝酸銨與差異極顯著，所以最適合孢子萌發(fā)的氮源是硝酸銨。

由表3可見，不同溫度對菌絲生長的影響分析25。c處理與其他處理之間差異顯著，可見25℃適宜菌絲的生長；不同溫度對孢子萌發(fā)的影響分析，20%與25℃處理間差異不顯著，20℃、25℃與其他處理間差異極顯著，所以適宜孢子萌發(fā)的溫度是20～25℃。

由表4可見，不同光照對菌絲生長的影響，全光與全暗、光暗交替處理間極顯著，所以全光適宜菌絲的生長；不同光照對孢子萌發(fā)的影響，全光與全暗、光暗交替差異極顯著，說明全光更適合孢子萌發(fā)。

由表5可見，PH8與PH7處理間無差異，所以偏堿更適合菌絲的生長和孢子萌發(fā)。

3 小結(jié)與討論

以天女木蘭葉斑病病菌為試材，研究不同碳、氮源對天女木蘭葉斑病病菌生長的影響；試驗結(jié)果表明：適合菌絲生長碳源是乳糖與葡萄糖；適合菌絲生長的氮源是硝酸銨；最適合孢子萌發(fā)的碳源是葡萄糖；適合孢子萌發(fā)的氮源是硝酸銨；25℃適宜菌絲的生長，適宜孢子萌發(fā)的溫度是20～25℃；全光適宜菌絲的生長和孢子萌發(fā)。適合菌絲的生長和孢子萌發(fā)PH8與PH7。