羅 皓，楊溪霖

（1.四川省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，成都610041；2.成都市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 610041）

腫瘤患者HBV-DNA載量與乙型肝炎血清標(biāo)志物實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果分析

羅 皓1，楊溪霖2

（1.四川省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，成都610041；2.成都市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 610041）

目的探討腫瘤患者實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA載量與乙型肝炎（乙肝）血清標(biāo)志物常見(jiàn)模式的關(guān)系。方法采集2014年5～12月四川省腫瘤醫(yī)院收治的313例腫瘤患者血液標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA載量，時(shí)間分辨熒光免疫法檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）。結(jié)果HBsAg（陽(yáng)性）標(biāo)本共227例，HBV-DNA陽(yáng)性率為67.40%（153/227），HBeAg（陽(yáng)性）標(biāo)本共22例，HBV-DNA陽(yáng)性率為90.91%（20/ 22）。小三陽(yáng)組陽(yáng)性率64.62%（126/195），20%的患者HBV-DNA載量大于105U/mL，具有較強(qiáng)的傳染性。結(jié)論在檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物的同時(shí)進(jìn)行HBV-DNA載量檢測(cè)對(duì)慢性乙肝腫瘤患者和隱性感染的腫瘤患者在化療過(guò)程中是否存在乙肝復(fù)燃具有重要的監(jiān)測(cè)意義。

腫瘤；DNA，病毒/血液；肝炎病毒，乙型；肝炎抗體，乙型；肝炎抗原，乙型

目前，判斷乙型肝炎（乙肝）感染情況大多仍采用檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物（即乙肝兩對(duì)半），由于其組合模式多種多樣，導(dǎo)致臨床醫(yī)生對(duì)部分發(fā)病患者的病毒感染復(fù)制狀況難以判斷，甚至?xí)霈F(xiàn)漏診的情況[1]。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR法直接檢測(cè)HBV-DNA本身，反映了病毒當(dāng)前的復(fù)制狀態(tài)并對(duì)其進(jìn)行相對(duì)的量化，對(duì)其傳染性有更直接的了解，同時(shí)也更有利于臨床醫(yī)生對(duì)HBV感染的診斷、治療方案的選擇及療效的判斷。為進(jìn)一步了解HBV-DNA定量檢測(cè)與乙肝血清標(biāo)志物結(jié)果之間的關(guān)系，本研究對(duì)2種檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采集2014年5～12月在四川省腫瘤醫(yī)院需進(jìn)行乙肝血清標(biāo)志物和HBV-DNA載量檢測(cè)的313例腫瘤患者血液標(biāo)本。其中男176例，女137例；年齡12～76歲，中位年齡51.4歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)試劑由蘇州新波生物技術(shù)有限公司提供，HBV-DNA載量檢測(cè)試劑由廈門安普利生物工程有限公司提供。檢測(cè)儀器為蘇州新波生物技術(shù)有限公司Efficuta全自動(dòng)樣本前處理系統(tǒng)和Anytest時(shí)間分辨熒光免疫分析儀，美國(guó)ABI公司7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.2.2 檢測(cè)方法 采用時(shí)間分辨熒光免疫法測(cè)定乙肝血清標(biāo)志物血清濃度，大于試劑盒設(shè)定的參考范圍判斷為陽(yáng)性；HBV-DNA載量大于500 U/mL判斷為陽(yáng)性。乙肝血清標(biāo)志物模式中HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+）為大三陽(yáng)，HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）為小三陽(yáng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用 Χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 313例血液標(biāo)本中乙肝血清標(biāo)志物不同模式與HBV-DNA載量比較 標(biāo)本按乙肝血清標(biāo)志物模式分為8個(gè)類型，分別統(tǒng)計(jì)HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率。HBsAg（+）標(biāo)本（模式1～3）共227例，HBV-DNA陽(yáng)性率為67.40%（153/227），HBsAg（-）標(biāo)本（模式4～8）共86例，HBVDNA陽(yáng)性率為2.33%（2/86），二者陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。小三陽(yáng)組陽(yáng)性率64.62%（126/195）。HBeAg（+）標(biāo)本（模式1）共22例，HBV-DNA陽(yáng)性率為90.91%（20/22），HBeAg（-）標(biāo)本（模式2～8）共291例，HBV-DNA陽(yáng)性率為46.39%（135/291），二者陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HBsAg和HBeAg轉(zhuǎn)陰前后，陽(yáng)性率有顯著下降，但HBeAg轉(zhuǎn)陰后陽(yáng)性率仍高達(dá)46.39%（135/291）。見(jiàn)表1。

表1 313例血液標(biāo)本中乙肝血清標(biāo)志物不同模式與HBV-DNA載量比較

2.2 小三陽(yáng)組（模式2）HBV-DNA載量陽(yáng)性情況 將195例小三陽(yáng)組標(biāo)本按照病毒復(fù)制程度分為大于107U/mL、105～107U/mL、500～＜105U/mL、陰性四組，分別統(tǒng)計(jì)標(biāo)本例數(shù)。4.10%的患者HBV-DNA載量大于107U/ mL；15.90%的患者HBV-DNA載量105～107U/mL，病毒復(fù)制程度較高；44.62%的患者HBV-DNA載量為500～＜105U/mL，傳染性較弱。見(jiàn)表2。

表2 小三陽(yáng)組（模式2）HBV-DNA載量陽(yáng)性情況

3 討 論

乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，其檢測(cè)的是人體感染HBV后的免疫反應(yīng)狀態(tài)，而由于抗原、抗體的變性、窗口期等因素，可能造成檢測(cè)出的乙肝血清標(biāo)志物模式不能真實(shí)反映當(dāng)前病毒的感染情況[2]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR則可以準(zhǔn)確地檢測(cè)出當(dāng)前HBV-DNA的復(fù)制水平，能夠幫助診斷隱匿性HBV感染和血清檢測(cè)非典型的慢性HBV感染[3]，并對(duì)其病程變化和治療效果進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)。尤其對(duì)于需要進(jìn)行化療的慢性乙肝患者，由于化療過(guò)程中，細(xì)胞毒藥物和生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑均有不同的免疫抑制功能，就為HBV在患者體內(nèi)的激活提供了條件，而化療結(jié)束后的免疫重建過(guò)程又容易造成肝細(xì)胞損傷[4]。因此，接受化療、皮質(zhì)激素等治療的慢性乙肝患者是發(fā)生HBV復(fù)燃的高危人群，需要定期監(jiān)測(cè)體內(nèi)HBV-DNA的載量，及時(shí)調(diào)整治療方案。

本研究中，22例大三陽(yáng)組（模式1）中，檢出HBVDNA陽(yáng)性20例，陽(yáng)性率為90.91%，且大部分患者病毒載量很高（＞107U/mL），表明HBeAg（+）患者病毒復(fù)制活躍、傳染性很高；同時(shí)大三陽(yáng)組檢測(cè)出2例陰性標(biāo)本，這可能與HBV基因S區(qū)發(fā)生點(diǎn)突變或插入、缺失突變有關(guān)[5]，應(yīng)密切隨訪監(jiān)測(cè)患者HBV-DNA水平。195例小三陽(yáng)組（模式2）檢出HBV-DNA陽(yáng)性126例，陽(yáng)性率為64.62%。雖然HBeAb的出現(xiàn)提示病毒復(fù)制減少，傳染性減弱，但從表2可以看出，4.10%的患者病毒復(fù)制仍處在很高水平（＞107U/mL），這與強(qiáng)傳染性的大三陽(yáng)患者HBV-DNA載量相當(dāng)；15.90%的患者病毒復(fù)制處在較高水平（105～107U/mL），說(shuō)明雖然HBeAg出現(xiàn)陰轉(zhuǎn)，但病毒并未停止復(fù)制，這可能與HBV前C區(qū)變異導(dǎo)致不能產(chǎn)生HBeAg有關(guān)[6-7]，而這樣的感染更容易對(duì)患者造成傷害，如未進(jìn)行積極治療，容易發(fā)展成為肝硬化和肝癌[8-10]；并且 44.62%的患者病毒還在持續(xù)表達(dá)（500～＜105U/mL），這部分患者雖然部分病毒載量不是很高，但也應(yīng)該積極繼續(xù)治療并定期隨訪HBV-DNA載量，以防病毒復(fù)燃造成病毒大量復(fù)制。10例HBsAg（+）HBcAb（+）患者血清中HBV-DNA陽(yáng)性檢出率為70.00%，提示該組患者仍具有較強(qiáng)的病毒復(fù)制，傳染性強(qiáng)，此情況可能為血清轉(zhuǎn)換期，HBeAg消失而HBeAb尚未出現(xiàn)，或HBV前C區(qū)突變而逃避了宿主免疫反應(yīng)[11]。在49例HBsAb（+）血清中，檢測(cè)出2例HBV-DNA陽(yáng)性，檢出率為4.08%，提示HBsAb產(chǎn)生并不絕對(duì)表示病毒的復(fù)制停止或減弱。此現(xiàn)象可能與HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換或HBV中S基因突變有關(guān)，出現(xiàn)隱匿性感染或不同亞型的HBV重疊感染[12]。

綜上所述，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法靈敏度高、特異性高、結(jié)果準(zhǔn)確，其結(jié)果是病毒復(fù)制最直接可信的指標(biāo)，而血清乙肝血清標(biāo)志物因?yàn)橛醒鍖W(xué)轉(zhuǎn)換、免疫逃避、隱匿性或不同亞型感染等原因?qū)е聶z測(cè)出的模式不能反映患者當(dāng)前真實(shí)的病毒復(fù)制水平，對(duì)于判斷HBV-DNA感染、傳染性及HBV載量有一定的局限性，因此，在檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物的同時(shí)進(jìn)行HBV-DNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，將為患者提供更好的治療指導(dǎo)和療效觀察，對(duì)進(jìn)行化療的腫瘤患者是否發(fā)生乙肝復(fù)燃提供有效的監(jiān)測(cè)。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.16.028

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1009-5519（2015）16-2483-02

2015-05-07）

羅皓（1987-），男，四川成都人，檢驗(yàn)技師，主要從事生物化學(xué)和分子生物學(xué)檢驗(yàn)工作；E-mail：781146221@qq.com。