梁景巖，王英歌

（揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225001）

普伐他汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和Lp-PLA2表達(dá)的影響

梁景巖，王英歌

（揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225001）

目的探討普伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化（AS）斑塊穩(wěn)定性及血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）表達(dá)的影響。方法取大白兔24只，隨機(jī)分為甲、乙、丙三組，每組8只。甲組不造模，乙、丙組采用球囊拉傷法制造AS模型，丙組給予普伐他汀干預(yù)，然后觀察其病理改變及血清Lp-PLA2表達(dá)情況。結(jié)果與甲組比較，第5、10周乙、丙組大白兔血清Lp-PLA2水平顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且第10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平增高更為明顯。與乙組比較，第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。第5、10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平均顯著高于實(shí)驗(yàn)前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平略高于實(shí)驗(yàn)前。普伐他汀干預(yù)后AS斑塊的病理學(xué)形態(tài)、結(jié)構(gòu)均發(fā)生改變，斑塊結(jié)構(gòu)更加趨于穩(wěn)定。結(jié)論普伐他汀能降低AS動(dòng)物的Lp-PLA2水平，促進(jìn)斑塊穩(wěn)定。

普伐他丁；動(dòng)脈粥樣硬化；磷脂酶A2；脂蛋白類

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）為臨床常見疾病，是導(dǎo)致臨床缺血性心、腦血管事件發(fā)生的主要原因[1]。大量研究表明，在AS斑塊形成過程中血管新生現(xiàn)象是其重要的病理學(xué)特征，這種現(xiàn)象進(jìn)一步可導(dǎo)致AS斑塊的不穩(wěn)定性，繼而引發(fā)斑塊破裂、出血，最終出現(xiàn)嚴(yán)重臨床癥狀。有研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，發(fā)生缺血性血管事件患者血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（lipoproteinassociatedphospholipase A2，Lp-PLA2）水平顯著升高，Lp-PLA2是心血管疾病新的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，與AS斑塊的形成及穩(wěn)定性關(guān)系密切[2]。本研究采用普伐他汀對(duì)AS動(dòng)物模型進(jìn)行早期干預(yù)，通過檢測(cè)動(dòng)物血清Lp-PLA2水平變化，旨在探討普伐他汀對(duì)AS及粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 取雄性新西蘭大白兔24只，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（魯）20130001]。采用隨機(jī)數(shù)字分組法分為甲、乙、丙三組，每組8只，其中甲組為正常對(duì)照組，體質(zhì)量2.4～3.7 kg；乙組為模型組，體質(zhì)量2.6～3.8 kg；丙組為普伐他汀給藥組，體質(zhì)量2.5～3.8 kg。三組大白兔體質(zhì)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。甲組給予正常飼料，乙、丙組均給予高脂飼料（內(nèi)含1%膽固醇）。飼養(yǎng)14d后對(duì)乙、丙組進(jìn)行球囊拉傷造模。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)審查通過。

1.2 方法

1.2.1 造模 采用球囊拉傷法制備AS動(dòng)物模型[3]。采用10%水合氯醛麻醉，在腹股溝區(qū)確認(rèn)股動(dòng)脈搏動(dòng)后縱向切開大白兔皮膚，分離皮下組織，鈍性分離動(dòng)、靜脈及股神經(jīng)，用橈動(dòng)脈穿刺針成功穿刺股動(dòng)脈后在血管造影儀透視下送入導(dǎo)管，沿導(dǎo)管將4 F球囊插入家兔股動(dòng)脈后上行插入30 cm左右，再向球囊內(nèi)注入0.2 mL生理鹽水，使球囊直徑膨脹約0.5 cm，向下拖拉球囊至骼總動(dòng)脈分叉處，反復(fù)牽拉損傷內(nèi)皮，共進(jìn)行3次。最后撤出球囊導(dǎo)管，結(jié)扎股動(dòng)脈，依次對(duì)大白兔組織及皮膚創(chuàng)口進(jìn)行縫合。術(shù)后每天肌內(nèi)注射青霉素80 U，并連續(xù)抗感染治療3 d。

1.2.2 AS斑塊穩(wěn)定性觀察 將上述各組動(dòng)物處死，選擇腹主動(dòng)脈AS斑塊進(jìn)行肉眼觀察，并取材制作病理切片，光鏡下觀察斑塊的基本構(gòu)成，以判斷其穩(wěn)定性。

1.2.3 血清Lp-PLA2水平檢測(cè) 分別于實(shí)驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)第5、10周采集大白兔靜脈血，檢測(cè)各組大白兔血清Lp-PLA2水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組大白兔不同時(shí)間點(diǎn)Lp-PLA2水平比較 與甲組比較，第5、10周乙、丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平增高更為明顯。與乙組比較，第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平均明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。第5、10周乙組大白兔血清Lp-PLA2水平顯著高于實(shí)驗(yàn)前，第10周血清Lp-PLA2水平較第5周明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。第5、10周丙組大白兔血清Lp-PLA2水平略高于實(shí)驗(yàn)前，見表1。

表1 三組大白兔不同時(shí)間點(diǎn)Lp-PLA2水平比較（±s，μg/L）

表1 三組大白兔不同時(shí)間點(diǎn)Lp-PLA2水平比較（±s，μg/L）

注：與甲組同時(shí)間點(diǎn)比較，aP＜0.05；與乙組同時(shí)間點(diǎn)比較，bP＜0.05；與同組實(shí)驗(yàn)前比較，cP＜0.01；與同組第5周比較，dP＜0.05。

組別甲組乙組丙組n 實(shí)驗(yàn)前 第5周 第10周8 8 8 28.78±8.34 26.46±7.73 29.75±3.76 26.65±7.13 48.43±4.58ac38.69±8.42ab25.69±5.37 68.35±9.58acd35.76±8.79ab

2.2 三組大白兔AS斑塊穩(wěn)定性觀察 甲組大白兔腹主動(dòng)脈管壁厚薄均勻，內(nèi)膜較光滑，未見到泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)沉積。乙組大白兔腹主動(dòng)脈壁增厚，且薄厚不均勻，已出現(xiàn)明顯AS斑塊，斑塊深層可見泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)沉積及膽固醇結(jié)晶，斑塊突入血管腔致管腔狹窄。丙組大白兔斑塊較小、膠原成分較多，泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)沉積較乙組減少，見圖1。

圖1 三組大白兔AS斑塊穩(wěn)定性觀察（蘇木精-伊紅染色，20×）

3 討 論

21世紀(jì)以來，AS已成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病[4]，AS是一種慢性、增殖性、退行性、進(jìn)展性的全程性炎癥過程，是導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┑刃?、腦血管疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn)[5]，AS斑塊內(nèi)的炎性反應(yīng)，由Lp-PLA2水解的促炎癥介質(zhì)介導(dǎo)，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，出現(xiàn)單核細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致泡沫細(xì)胞沉積，最終促進(jìn)粥樣斑塊形成及使粥樣斑塊不穩(wěn)定。因此，抑制斑塊內(nèi)炎癥介質(zhì)的連鎖反應(yīng)對(duì)穩(wěn)定斑塊、防止急性血管事件的發(fā)生意義重大。Lp-PLA2是目前較新發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)動(dòng)脈硬化斑塊炎性反應(yīng)的獨(dú)立因子[6]，是磷脂酶A2家族成員，主要由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞分泌產(chǎn)生，能特異性促進(jìn)血管內(nèi)相關(guān)炎癥細(xì)胞增殖分裂、促進(jìn)斑塊纖維分解，機(jī)體中的Lp-PLA2主要與脂蛋白顆粒結(jié)合，其中2/3與低密度脂蛋白結(jié)合，其余1/3與極低密度脂蛋白和高密度脂蛋白結(jié)合。Lp-PLA2能水解氧化低密度脂蛋白，將其水解生成卵磷脂及氧化游離脂肪酸等促炎癥介質(zhì)，后二者可促進(jìn)細(xì)胞黏附因子、表皮生長(zhǎng)因子和血小板源性生長(zhǎng)因子的表達(dá)，引起內(nèi)皮功能障礙，促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)膜聚集衍生成巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。大量研究表明，Lp-PLA2為血管炎性反應(yīng)特異性標(biāo)志物，可反映AS斑塊的嚴(yán)重程度，而且在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者中Lp-PLA2水平也顯著升高。最新研究表明，血清Lp-PLA2水平也與支架植入后再狹窄呈正相關(guān)。大量實(shí)驗(yàn)證明，在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者中降低循環(huán)中Lp-PLA2水平有利于冠狀動(dòng)脈斑塊的消退。有研究證實(shí)，其在AS斑塊中的表達(dá)明顯增加，并對(duì)斑塊的發(fā)生、發(fā)展具有促進(jìn)作用[7]。大量研究表明，普伐他汀能有效降低冠心病發(fā)病率及病死率，降低低密度脂蛋白膽固醇，抑制斑塊進(jìn)展[8]。另外普伐他汀還能改善內(nèi)皮功能、穩(wěn)定斑塊、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抑制血栓形成等[9]。有研究證實(shí)，普伐他汀可減少Lp-PLA2表達(dá)，減少泡沫細(xì)胞的沉積，從而使斑塊更趨于穩(wěn)定，并且這些作用均與其降脂作用無關(guān)[10]。本研究結(jié)果表明，普伐他汀可在一定程度抑制Lp-PLA2的表達(dá)。病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，普伐他汀干預(yù)后動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病理學(xué)形態(tài)、結(jié)構(gòu)均發(fā)生改變，斑塊結(jié)構(gòu)更趨于穩(wěn)定，表明普伐他汀對(duì)穩(wěn)定AS斑塊具有一定作用。

綜上所述，在實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過程中Lp-PLA2水平升高，提示Lp-PLA2有促進(jìn)AS斑塊形成的作用。丙組大白兔血清Lp-PLA2水平明顯下降，斑塊較為穩(wěn)定，提示普伐他汀具有穩(wěn)定斑塊、抑制Lp-PLA2表達(dá)的作用。然而由于本研究樣本量有限，尚有待于后期進(jìn)一步深入研究。

[1]潘晨亮，彭瑜，胡雪婷，等.脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2與急性冠狀動(dòng)脈綜合征的相關(guān)研究[J].臨床心血管病雜志，2014，30（11）：962-965.

[2]羅美蓉，王正偉，安志星.人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子研究進(jìn)展[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32（17）：3835-3837.

[3]呂云波，鐘金鵬.兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性與趨化因子的相關(guān)性研究[J].臨床心血管病雜志，2012，28（9）：663-667.

[4]陳莉，劉玲.米諾環(huán)素對(duì)5-LOX通路及動(dòng)脈粥樣硬化中炎癥反應(yīng)的抑制作用[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2015，32（4）：415-419.

[5]李建軍.炎癥與動(dòng)脈粥樣硬化[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志，2011，3（5）：4-6.

[6]趙振強(qiáng)，胡蘭，蔡美華，等.脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2和C反應(yīng)蛋白與短暫性腦缺血發(fā)作患者風(fēng)險(xiǎn)分層的研究[J].中華老年心腦血管病雜志，2015，17（4）：365-368.

[7]郭敏，閆蕊，史宏濤，等.阿托伐他汀對(duì)急性冠脈綜合征患者外周血單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2015，13（5）：578-579.

[8]程純，吳士堯.普伐他汀對(duì)冠心病患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊的影響[J].中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2001，10（3）：140-143.

[9]楊曉龍，程佳，黃金娜.普伐他汀聯(lián)合尼可地爾對(duì)冠心病伴高脂血癥患者的療效觀察[J].河北醫(yī)藥，2014，36（3）：349-350.

[10]郭水連，卓曉青，劉建立，等.普伐他汀對(duì)鼠動(dòng)脈粥樣硬化及炎癥因子的影響[J].臨床合理用藥雜志，2014，7（11）：11-12.

Influence of pravastatin on atherosclerotic plaque stability and Lp-PLA2 expression

Liang Jingyan，Wang Yingge
（Medical College of Yangzhou University，Yangzhou，Jiangsu 225001，China）

ObjectiveTo investigate the influence of pravastatin on the atherosclerotic plaque（AS）stability and serum Lp-PLA2 expression in rabbit．Methods24 rabbits were randomly divided into the group A，B and C，8 cases in each group.The group A was non-model.The group B and C adopted the balloon pulling injury method for establishing the AS model.Then the pathological changes and serum Lp-PLA2 expression were observed.ResultsCompared with the group A，serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group B and C were increased significantly，the differences were statistically significant（P＜0.05），moreover the increase of serum Lp-PLA2 level at 10 weeks in the group B was more obvious.Compared with the group B，the serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group C was significantly decreased，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group B were significantly higher than those before experiment，the difference was statistically significant（P＜0.01）.The serum Lp-PLA2 levels at 5，10 weeks in the group C were slightly higher than those before experiment.The pathological morphology and structure of AS plaque after pravastatin intervention were changed and the plaque structure trended to be more stable.ResultsPravastatin can reduce Lp-PLA2 level in the AS animal and promotes the AS plaque stability.

Pravastatin；Atherosclerosis；Phospholipases A2；Apolipoproteins

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.17.005

A

1009-5519（2015）17-2583-02

2015-06-01）

梁景巖（1977-），男，黑龍江黑河人，博士研究生，講師，主要從事動(dòng)脈粥樣硬化方向的研究；E-mail：342459198@qq.com。