賀旭輝，陳勐，彭晉修，李建新，張學強

(河北省邢臺市第二醫(yī)院 肝病三科，河北 邢臺 054001)

?

索拉非尼對肝癌晚期患者血清肝癌標志物的影響

賀旭輝，陳勐，彭晉修，李建新，張學強

(河北省邢臺市第二醫(yī)院 肝病三科，河北 邢臺 054001)

目的 探討索拉非尼對肝癌晚期患者血清肝癌標志物的影響及臨床意義。方法 選取2014年2月～2014年12月于河北省邢臺市第二醫(yī)院腫瘤科已確診為肝癌晚期的患者101例，根據(jù)隨機數(shù)字表法分為2組：對照組50例，臨床常規(guī)治療；實驗組51例，在對照組治療基礎上加用索拉非尼。比較2組患者的生存時間、不良反應、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)、缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α)和骨橋蛋白(osteopontin，OPN)水平的變化，對比分析2種治療方法的臨床療效。結(jié)果 經(jīng)隨訪，實驗組生存期高于對照組(P<0.05)；與對照組相比，實驗組血清VEGF、CTGF、HIF-1α、OPN、AFP、CEA及CA199水平均較低(P<0.05,P<0.01)。2組總不良反應發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論 索拉非尼能有效延長肝癌患者生存期，降低血清VEGF、CTGF、HIF-1α和OPN水平。

索拉非尼；晚期肝癌；血管內(nèi)皮生長因子；結(jié)締組織生長因子；缺氧誘導因子-1α；骨橋蛋白

據(jù)流行病學統(tǒng)計[1]，肝癌死亡率位居我國惡性腫瘤死亡率的第二位，嚴重危害人們的身心健康，其發(fā)病機制目前并不明確，根據(jù)現(xiàn)有文獻分析，乙肝病毒和丙肝病毒感染、黃曲霉素、飲水污染、大量飲酒、肝硬化、性激素、亞硝胺類物質(zhì)等都與肝癌的發(fā)病關(guān)系密切。大多數(shù)肝癌患者在發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，受肝癌轉(zhuǎn)移、腫瘤體積、數(shù)目等限制已經(jīng)不適合手術(shù)，臨床適合手術(shù)切除條件的肝癌患者不足25%[1]。索拉非尼[2-3](sorafenib)是一種新近研發(fā)的新型多靶向性治療腫瘤的口服藥物，能夠靶向性作用于某些蛋白的受體，在腫瘤生長過程中起著分子開關(guān)樣的作用，臨床已有將之應用于治療肝腫瘤、腎腫瘤的報道，取得了較為滿意的療效。研究發(fā)現(xiàn)，肝癌術(shù)后復發(fā)、轉(zhuǎn)移以及侵襲是導致患者死亡的主要原因，而血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)、缺氧誘導因子-l(hypoxia inducible factor-l，HIF-1α)和骨橋蛋白(osteopontin，OPN)等因子在肝癌轉(zhuǎn)移、侵襲中具有重要作用。本研究通過對肝癌患者血清VEGF、CTGF、HIF-1α和OPN水平進行分析研究，以探討經(jīng)索拉非尼的治療機制，為肝癌患者的診段和治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年2月～2014年12月于河北省邢臺市第二醫(yī)院腫瘤科診斷為晚期肝癌無法手術(shù)治療的患者101例，采用隨機數(shù)字表法分為實驗組和對照組。其中實驗組51例，男性32例，女性19例，年齡35～78歲，平均(63.2±8.3)歲；對照組50例，男性32例，女性18例，年齡39～79歲，平均(64.1±8.4)歲，本研究獲河北省邢臺市第二醫(yī)院倫理委員會批準，并長期跟蹤。

1.2 診斷及排除標準

1.2.1 參照2013年第8版《外科學》[4]教材中關(guān)于原發(fā)性肝癌的病理學診斷標準以及臨床診斷標準：①肝區(qū)疼痛，多為持續(xù)性鈍痛、脹痛或刺痛；②全身乏力、消瘦、食欲減退、腹脹、惡心、嘔吐、腹瀉等消化系統(tǒng)癥狀；③肝腫大呈進行性進展，質(zhì)地堅硬，邊緣不規(guī)則，表面有大小不等的結(jié)節(jié)或包塊；④血清甲胎蛋白(AFP)≥400 μg/L，并能排除妊娠、活動性肝病、生殖腺胚胎源性腫瘤等；⑤B超或CT檢查可示腫瘤的大小、形態(tài)、部位；⑥肝臟病理檢查結(jié)果為原發(fā)性肝癌。

1.2.2 排除標準：①不愿參與本研究或不符合診斷標準者；②患有艾滋病等具有較重傳染性疾病患者；③其他腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟者；④2周內(nèi)使用其他藥物藥物者；⑤妊娠或哺乳期婦女；⑥合并有嚴重心、腎功能不全疾病患者；⑦對索拉非尼過敏者；⑧患有精神類疾病不能配合研究者。

1.3 治療方法 嚴格按照2011年《中國肝癌共識》[5]中關(guān)于原發(fā)性肝癌的治療標準予以護肝，鎮(zhèn)痛等常規(guī)治療：對照組給予復方苦參注射液(山西振東制藥股份有限公司，批準文號：國藥準字Z14021231)0.6 g，以5%葡萄糖注射液250 mL稀釋，每天1次靜脈滴注；胸腺肽α注射液(云南南詔藥業(yè)有限公司，批準文號：國藥準字H53021765)1.6 mg，每周2次皮下注射。實驗組在與對照組相同的臨床常規(guī)對癥治療基礎上加用索拉非尼(拜耳先靈醫(yī)藥，批準文號：H20060296)，400 mg/次，每天2次口服。4周為1個療程，治療1個療程。在治療過程中，如并發(fā)其他的臨床癥狀，均予相應的對癥處理。

1.4 觀察指標及檢測方法 所有研究對象均于治療前、治療4周后，空腹8 h從肘靜脈抽取靜脈血15 mL，置于真空采血管中，于室溫下用水平離心機以3000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min，分離血清。

1.4.1 血清VEGF、CTGF、HIF-1α和OPN檢測：采用放射免疫法檢測水平變化，試劑盒(sigma公司，美國)，嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.4.2 血清腫瘤標記物檢測：本研究采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法[全自動酶標儀(高質(zhì)量318C，中國上海)]檢測所有研究對象血清中甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)、癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，CEA)、糖抗原199(carbohydrate antigen 19-9，CA199)的濃度水平。試劑盒由鄭州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴格操作。

1.4.3 不良反應：觀察2組患者治療過程中的不良反應。

1.4.4 隨訪：隨訪2組患者生存時間。生存時間計算方法：起點(確診日期)～止點(死亡日期)，隨訪頻率：每2周進行1次電話隨訪。

2 結(jié)果

2.1 2組患者一般資料比較 2組患者的性別、年齡、平均年齡、病理分期及轉(zhuǎn)移情況等比較差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 2組患者一般資料比較Tab.1 Comparison of the baseline between two groups

2.2 2組患者生存時間比較 實驗組患者生存時間長于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 2組患者生存時間比較 ±s，月)Tab.2 Comparison of survival ±s，month)

#P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.3 2組患者治療期間不良反應情況 本研究中，實驗組患者發(fā)生血壓升高1例，皮疹、手足皮膚反應各5例，腹瀉、局部刺激各2例，肝功損害1例；對照組患者發(fā)生血壓上升1例，皮疹、手足皮膚反應0例，腹瀉4例，肝功損害、局部刺激各3例。2組不良反應比較差異無統(tǒng)計學意義。

2.4 2組患者血清VEGF、CTGF、HIF-1α、OPN水平變化 治療4周后，實驗組患者血清VEGF、CTGF水平較對照組降低(P<0.05)；實驗組患者血清HIF-1α、OPN水平較對照組降低(P<0.01)，見表3。

表3 2組患者血清VEGF、CTGF、HIF-1α、OPN水平變化比較Tab.3 Comparison of serum VEGF，CTGF，HIF-1α and OPN levels between two ±s)

*P<0.05，**P<0.01，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，##P<0.01，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.5 2組患者血清腫瘤標志物比較 本研究中，治療4周后，實驗組患者血清AFP、CEA、CA199水平均較對照組顯著降低(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者血清腫瘤標志物比較±s)Tab.4 Comparison of serum tumor markers between two ±s)

**P<0.01與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；##P<0.01，與治療后對照組比較，compared with control group post-treatment

3 討論

肝癌是全世界第五位常見的惡性腫瘤，也是我國好發(fā)的惡性腫瘤之一，占全世界肝癌患者的55%以上，其發(fā)病率、死亡率之高已嚴重危害我國人民的健康[6]。目前對于原發(fā)性肝癌的治療主要以外科手術(shù)、肝移植、射頻消融術(shù)、肝動脈化療栓塞術(shù)及多靶向治療等方法為主，但晚期不能切除的肝癌預后較差，其生存期僅在7個月左右[7]。多靶向治療是近幾年來發(fā)展的應用于治療肝癌的新療法，并受到廣泛關(guān)注。索拉非尼是經(jīng)過美國FDA認定的首個用于系統(tǒng)性治療肝癌的一線藥物，是一種口服的靶向治療藥物。研究發(fā)現(xiàn)[8]索拉非尼能夠通過作用于VEGF受體通路，達到抑制血管形成，從而抑制腫瘤細胞增生。

本研究發(fā)現(xiàn)，索拉非尼能有效延長原發(fā)性肝癌的生存期。實驗組患者經(jīng)4周治療后，其生存期明顯長于對照組(P<0.05)。有研究發(fā)現(xiàn)[9]，索拉非尼可以通過抑制肝癌細胞基因的表達，從而達到抑制肝癌細胞增殖的作用，亦有研究提出[10]索拉非尼能加速肝癌細胞死亡，這可能是本研究中實驗組患者生存期長于對照組的原因。但是，對于索拉非尼抑制肝癌細胞增殖以及加速肝癌細胞死亡的具體機制，臨床研究并不明確，尚需進一步研究。

應用索拉非尼治療肝癌具有一定的不良反應。據(jù)文獻統(tǒng)計[11]，索拉非尼所致的不良發(fā)應主要集中在以下方面：皮疹，嘔吐、腹瀉等消化道癥狀，血壓上升、手足皮膚反應、局部刺激以及肝功損害等。在本研究中，對于2組藥物的不良反應亦進行了統(tǒng)計，對照組患者發(fā)生皮疹和手足皮膚反應的患者為0，而實驗組在應用索拉非尼后各有5例發(fā)生。但2組患者的不良反應總數(shù)差異比較卻無統(tǒng)計學意義，可能與本實驗樣本量較小有關(guān)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，索拉非尼能有效降低原發(fā)性肝癌患者血清VEGF、CTGF、HIF-1α、OPN等指標水平。VEGF是一種能夠特異性作用于血管內(nèi)皮細胞并加速其分裂的多功能二聚體糖蛋白，在正常人體組織中表達水平并不高，僅在某些供血豐富的組織中其水平略高。但是研究證明[12]，在腫瘤患者體內(nèi)VEGF則會高水平表達，其原因可能是與腫瘤細胞豐富的供血以及旺盛的新陳代謝有關(guān)。在本研究中，2組患者在治療前血清VEGF高水平表達，但在治療結(jié)束后，2組患者血清VEGF均有所降低，且實驗組VEGF水平低于對照組(均P<0.05)。研究證明[13]VEGF在肝癌患者體內(nèi)高水平表達的主要原因與腫瘤缺氧有關(guān)，在腫瘤快速生長時，腫瘤細胞相對供氧不足而促使VEGF生成增多以改善其供氧。由此可見，本實驗中實驗組VEGF水平大幅度降低，其原因可能與索拉非尼能抑制肝癌細胞增殖、加速肝癌細胞死亡的作用有關(guān)，實驗組患者應用索拉非尼后，腫瘤生長得到抑制其供血不足得到相對緩解，因此VEGF水平隨之下降。研究表明[14]CTGF的高水平表達與肝癌、乳腺癌等腫瘤的預后不良有密切關(guān)系。在本研究結(jié)果中，實驗組應用索拉非尼后其血清CTGF水平明顯降低，這一結(jié)果可能是實驗組患者生存期長于對照組的原因之一。有研究證明[15]CTGF濃度與肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，可見控制CTGF的水平是控制肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移的重要手段。HIF-1α已被證實與腫瘤細胞代謝、新生血管形成以及腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移具有重要關(guān)系，且在缺氧的環(huán)境下HIF-1α能夠誘導VEGF的高度表達而刺激新生血管形成，導致腫瘤生長[16]。有研究指出[17]，VEGF與HIF-1 α的水平呈正相關(guān)，這一結(jié)論可能是本研究中實驗組患者血清HIF-1α、VEGF水平均降低的原因。OPN是細胞基質(zhì)中的一種分泌型糖蛋白，主要參與骨代謝、新生血管生成、動脈硬化等病理反應，本研究認為在腫瘤組織中OPN能夠高度表達，且已證實OPN在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中有重要的作用[18]。在本研究中實驗組患者OPN水平明顯降低，其原因可能是索拉非尼抑制肝癌細胞增殖、加速肝癌細胞死亡。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，索拉非尼能有效降低原發(fā)性肝癌患者血清腫瘤標志物水平。腫瘤標志物是在腫瘤發(fā)展過程中由腫瘤細胞合成、釋放或者是機體對腫瘤細胞反應而產(chǎn)生的一類物質(zhì)。甲胎蛋白是用作診斷原發(fā)性肝癌的首要指標，在肝癌的早期診斷和鑒別診斷中具有重要意義，但其敏感性并不高；癌胚抗原是一種在消化系統(tǒng)腫瘤患者血清高度表達的糖蛋白；糖抗原199(CA199)是近年發(fā)現(xiàn)并用于診斷原發(fā)性肝癌的腫瘤標志物，具有較高的敏感性。在本研究中，表5顯示實驗組患者血清AFP、CEA、CA199水平較對照組顯著降低，其原因可能與實驗組患者在應用索拉非尼后VEGF水平降低有關(guān)，說明其腫瘤細胞的增殖得到相對控制，因此腫瘤標記物水平也隨之降低[19]。

本研究通過索拉非尼對101例原發(fā)性肝癌患者的治療療效、安全性、腫瘤標志物、血清VEGF、CTGF、HIF-1α、OPN等指標水平動態(tài)變化進行分析，證實了索拉非尼對原發(fā)性肝癌患者具有更好的療效，索拉非尼對肝癌標志物的干預作用可能是其治療機制之一。

[1] 陳建國，陳萬青，張思維.中國2003-2007年肝癌發(fā)病率與死亡率分析[J].中華流行病學雜志，2012，33(6)：547-553.

[2] Llovet JM,Ricci S,Mazzaferro V,et al.Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma[J].N Engl J Med,2008,359(4):378-390.

[3] 陳世晞，陳駿，席瑋，等.TACE聯(lián)合分子靶向藥索拉非尼治療晚期肝癌遠期療效觀察[J].介入放射學雜志，2012，20(12)：958-960.

[4] 陳孝平，汪建平.外科學[M]人民衛(wèi)生出版社.2013：197.

[5] 樊嘉，潘奇，史穎弘.美國，亞太和中國肝癌共識比較[J].臨床肝膽病雜志，2011，27(4)：346-347.

[6] 郭永章.原發(fā)性肝癌的診斷與治療研究進展[J].昆明醫(yī)學院學報，2011，32(7)：1-5.

[7] 楊小兵，龍順欽，吳萬垠，等.原發(fā)性肝癌中醫(yī)證型分布及生存期差異研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33(7)：911-914.

[8] 茅曉東，陳國芳，徐書杭，等.索拉非尼與二甲雙胍對甲狀腺未分化癌細胞株的生長抑制作用[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2013，29(7)：608-612.

[9] 陳東，趙鵬，殷曉煜，等.索拉非尼對敏感人肝癌細胞株MAPK信號通路基因表達的影響[J].中國病理生理雜志，2013，29(1)：159-164.

[10] 林萍萍，張利敏，張雪寧，等.索拉非尼對人肝癌HepG2細胞株生物學行為的影響及意義[J].河北醫(yī)藥，2012，8(4)：21.

[11] 苑珩珩，白玉賢，張婷婷，等.以索拉非尼為基礎治療晚期肝細胞癌的療效和不良反應臨床觀察[J].中國癌癥雜志，2012，22(1)：52-55.

[12] 周曉琳.肝癌組織中VEGF-C及其受體Fit-4的表達及意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2013，29(3)：340-342.

[13] 倪嘉延，吳裕丹，黃康華，等.HIF-1α基因干擾對大鼠CBRH-7919肝癌細胞HIF-1α與VEGF表達影響的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2012，18(22)：1704-1708.

[14] 徐安濤.TACE對肝癌患者血清VEGF和CTGF水平的影響及意義[D].山東大學，2012.

[15] 滕凱.恩度聯(lián)合肝動脈化療栓塞后肝癌患者血清VEGF，HIF-1A，OPN，CTGF的動態(tài)變化[D].山東大學，2013.

[16] 張秀琴，呂喜英，陳偉紅.HIF-1α與惡性腫瘤關(guān)系研究進展[J].臨床肺科雜志，2010，15(2)：219-220.

[17] 陳俊偉，胡曉俊，林曲，等.氯化鈷作用下大鼠肝癌細胞株RH35的HIF-1與VEGF表達及侵襲性影響的研究[J].新醫(yī)學，2014，45(12)：790.

[18] 馬桂芳，蔡紅星，丁鳳云，等.胃癌組織中OPN，c-Met蛋白的異常表達及其意義[J].重慶醫(yī)學，2012，41(36)：3823-3824.

[19] 李柳生，黃拼搏，何傳超，等.甲胎蛋白應答在索拉非尼治療進展期肝癌中的作用[J].嶺南現(xiàn)代臨床外科，2014，14(2)：150-152，156.

(編校：王儼儼)

Effect of sorafenib on serum hepatoma marker in patients with advanced hepatocellular carcinoma

HE Xu-hui, CHEN Meng, PENG Jin-xiu, LI Jian-xin, ZHANG Xue-qiang

(Department of Liver Disease, The Second Hospital of Xingtai City, Xingtai 054001, China)

ObjectiveTo investigate effect of sorafenib on serum hepatoma marker in patients with advanced hepatocellular carcinoma.Methods101 patients with advanced hepatocellular carcinoma were selected, and divided into two groups.50 cases in control group were treated with routine clinical treatment, and 51 cases in experimental group were treated with sorafenib on the basis of control group.The survival time, adverse reactions, VEGF, CTGF, HIF-1 and OPN levels were compared after the treatment.ResultsThe survival time of experimental group was higher than control group (P<0.05).Compared with control group, the serum levels of VEGF、CTGF，HIF-1, OPN，AFP, CEA, and CA199 in experiment group were lower (P<0.05,P<0.01).There were no significant differences of total adverse reactions between experimental group and control group.ConclusionSorafenib can effectively prolong survival time of patients with advanced hepatocellular carcinoma, reduce serum VEGF, CTGF, HIF-1 alpha and OPN levels.

sorafenib; advanced hepatocellular carcinoma; vascular endothelial growth factor; connective tissue growth factor; hypoxia inducible factor -1α; osteopontin

賀旭輝，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：肝細胞癌藥物治療與介入治療臨床觀察，E-mail：hxh15931968102@126.com。

R735.7

A

1005-1678(2015)05-0091-04