戴英增 白曉雪 劉 晗 李 丹 華樹成 宋 磊

(淄博市第一醫(yī)院分院結(jié)核科，山東 淄博 255000)

sCD163在結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液和外周血中的表達及臨床意義

戴英增 白曉雪1劉 晗2李 丹2華樹成2宋 磊2

(淄博市第一醫(yī)院分院結(jié)核科，山東 淄博 255000)

目的 探討sCD163在結(jié)核性腦膜炎患者外周血漿及腦脊液中的表達水平及其對臨床診斷與預后判斷的指導意義。方法 收集23例結(jié)核性腦膜炎患者，8例病毒性腦膜炎和6例正常人的外周血及腦脊液，ELISA法檢測血漿和腦脊液中sCD163的表達，并對腦脊液進行常規(guī)生化檢查。結(jié)果 與病毒性腦膜炎和正常人相比，結(jié)核性腦膜炎患者外周血及腦脊液中sCD163表達水平明顯升高(P<0.01)，而病毒性腦膜炎患者與頭痛患者sCD163水平無明顯差異(P>0.05)。腦脊液sCD163濃度為89.1 ng/L可作為診斷結(jié)核性腦膜炎的切點(cut-off)值，其敏感性和特異性分別為82.6%和93.9%。結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中sCD163表達與腦脊液壓力和蛋白質(zhì)含量呈正相關，與腦脊液細胞數(shù)無相關性。結(jié)論 sCD163在結(jié)核性腦膜炎患者外周血和腦脊液中表達上調(diào)，并且腦脊液sCD163可作為結(jié)核性腦膜炎診斷和預后判斷的生物學標志物。

結(jié)核性腦膜炎；病毒性腦膜炎；SCD163

由于人口大量流動、人類免疫缺陷病毒(HIV)流行以及結(jié)核分枝桿菌耐藥性的增加，結(jié)核病(TB)重新成為世界范圍內(nèi)最危險的傳染病之一〔1〕。結(jié)核性腦膜炎(TBM) 是由結(jié)核分枝桿菌引起的腦膜和脊髓膜的非化膿性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，是TB中最嚴重的一種，病死率、致殘率極高〔2〕，并且TBM患者的臨床表現(xiàn)和客觀影像學檢查結(jié)果往往不典型，故誤診率較高，嚴重影響治療及預后。本文擬通過檢測TBM患者血漿及腦脊液中可溶性CD163(sCD163)蛋白的表達，探索其對臨床診斷與治療的指導意義。

1 資料與方法

1.1 對象 收集2011年3月至2013年3月淄博市第一人民醫(yī)院結(jié)核科和吉林省傳染病醫(yī)院結(jié)核科住院和門診患者。TBM診斷符合Thwaites診斷標準〔3〕，共23例，均為首次發(fā)病，診斷前未經(jīng)任何抗結(jié)核治療。同時收集病毒性腦膜炎患者8例及有頭痛癥狀但神經(jīng)系統(tǒng)無陽性體征、腦脊液無感染者(6例)作為對照(HC)。3組一般資料無顯著差異(P>0.05)。所有患者排除合并其他傳染性疾病如HIV、麻疹和傷寒等，并排除顱內(nèi)其他疾病，除外近1 w出現(xiàn)有心力衰竭、燒傷、外傷和手術等應激情況者?；颊咭话阗Y料見表1。

1.2 主要試劑和儀器 sCD163 ELISA試劑盒(Abcam，美國)，酶標儀(Bio-Tek，美國)。

1.3 檢測方法 采集靜脈血5 ml，不抗凝，800 r/min離心10 min后取血漿。留取患者腦脊液3 ml用于常規(guī)生化檢測，1 ml離心后取上清液分裝儲存于-80℃冰箱中保存。測定時將樣品放于冰上解凍，嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行操作。在450 nm處測各樣品的OD值，根據(jù)標準品繪制標準曲線，計算各樣品的濃度。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS15.0軟件進行，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。腦脊液中sCD163對TBM診斷價值的評定采用受試者工作特征曲線(ROC)分析，與腦脊液壓力和蛋白含量的相關性分析采用Spearman線性相關法。

表1 入組患者的一般資料

2 結(jié) 果

2.1 血漿和腦脊液中sCD163的表達 TBM組患者血漿中sCD163的含量為(2.66 ± 0.17)g/L，顯著高于VM組和HC組〔(1.78 ± 0.29)、(1.93 ± 0.29)g/L〕(P<0.05)。TBM患者腦脊液中的sCD163含量為(107.8 ± 4.94)ng/L，也較VM組〔(73.58 ± 3.76)ng/L〕和HC組〔(76.25 ± 5.09)ng/L〕明顯升高(P<0.01)。

2.2 sCD163對TBM的診斷價值 腦脊液sCD163作為診斷TBM的生物學標志物，其最佳診斷切點值(cut off)為89.1 ng/L(AUC=0.755，P<0.01)，診斷TBM時的敏感度為82.6%，特異度為93.9%，見圖1。

圖1 腦脊液sCD163診斷價值的ROC

2.3 sCD163與TBM病情的相關性 Spearman線性相關法結(jié)果顯示，TBM患者腦脊液中的sCD163水平與腦脊液壓力及腦脊液蛋白含量呈正相關，相關性分別為0.443(P<0.05)和0.796(P<0.05)。

3 討 論

CD163是一種分子量為130 kD的膜蛋白，屬于清道夫受體(SR)超家族中的一種分子，僅在單核細胞-巨噬細胞系細胞膜上表達，如肝臟kuffer細胞，腹膜巨噬細胞，肺泡巨噬細胞，脾內(nèi)紅髓巨噬細胞等〔4〕。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，CD163表達于激活的小膠質(zhì)細胞、血管周圍細胞和腦膜巨噬細胞〔5〕。以往認為CD163最主要的功能是作為結(jié)合血紅蛋白-珠蛋白(Hb-Hp)復合物的受體，介導復合物內(nèi)吞從而參與血紅蛋白的代謝〔4〕。而最新研究發(fā)現(xiàn)，CD163在M2型巨噬細胞表達較強，主要出現(xiàn)于急性以及慢性炎癥愈合期和傷口愈合組織。并且CD163與抗炎因子的分泌、凋亡以及細菌的感染有關，因此被認為在炎癥反應、腫瘤和微生物感染等發(fā)面也同樣起到了重要的作用〔6〕。

在基質(zhì)金屬蛋白酶的作用下，單核-巨噬細胞表面的CD163分子可以從表面脫落，形成sCD163蛋白分子〔7〕。在健康成人血清中，sCD163的濃度約為0.73～4.69 mg/L。在感染、炎癥和自身免疫反應過程中，由于激活的巨噬細胞合成釋放更多的蛋白酶，導致血清中sCD163明顯升高〔7〕。研究表明，sCD163可通過抑制T淋巴細胞增殖和活化從而起到抗炎以及調(diào)節(jié)免疫的作用〔6〕。因此，sCD163表達升高在某些疾病中具有特定的病理生理學意義。本研究發(fā)現(xiàn)，sCD163在TBM患者外周血中的表達同樣高于健康人和VM患者；并且與健康人和VM患者比較，TBM患者的腦脊液中sCD163水平也發(fā)生上調(diào)?？紤]上述現(xiàn)象出現(xiàn)的原因可能是由于結(jié)核桿菌感染后，外周血中單核細胞以及腦膜中與結(jié)核菌直接接觸的巨噬細胞活化所致。

目前TBM的診斷仍依靠臨床癥狀、腦脊液檢查和特殊染色尋找結(jié)核桿菌，但由于TBM臨床癥狀和腦脊液常規(guī)檢查不典型，而腦脊液中結(jié)核菌檢出率又非常低，因此TBM的診斷特別是早期診斷仍是一個巨大挑戰(zhàn)。在本研究中發(fā)現(xiàn)腦脊液sCD163水平還可作為區(qū)別TBM與正常人或其他腦膜炎如VM的生物學標志物。當腦脊液sCD163水平高于89.1 ng/L時提示TBM發(fā)生的可能。

sCD163高表達往往是炎癥或感染程度與巨噬細胞免疫功能相互作用的結(jié)果，并且sCD163水平高低與患者預后密切相關。腦脊液壓力和腦脊液中蛋白含量反映TBM病情的嚴重程度，常被應用于判斷TBM預后。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TBM患者腦脊液中sCD163水平與腦脊液壓力以及蛋白含量呈正相關，表明除了作為診斷依據(jù)外，腦脊液sCD163水平還可作為評估TBM疾病嚴重程度的重要指標。

1 Zumla AI,Gillespie SH,Hoelscher M,etal.New antituberculosis drugs,regimens,and adjunct therapies: needs,advances,and future prospects〔J〕.Lancet Infect Dis,2014;14(4): 327-40.

2 Thwaites GE,van Toorn R,Schoeman J.Tuberculous meningitis: more questions,still too few answers〔J〕.Lancet Neurol,2013；12(10): 999-1010.

3 Thwaites GE,Chau TT,Stepniewska K,etal.Diagnosis of adult tuberculous meningitis by use of clinical and laboratory features〔J〕.Lancet,2002；360(9342): 1287-92.

4 Etzerodt A，Moestrup SK.CD163 and inflammation: biological,diagnostic,and therapeutic aspects〔J〕.Antioxid Redox Signal,2013；18(17): 2352-63.

5 Zhang Z,Zhang ZY,Wu Y,etal.Lesional accumulation of CD163+ macrophages/microglia in rat traumatic brain injury〔J〕.Brain Res,2012；1461(1): 102-10.

6 Akila P,Prashant V,Suma MN,etal.CD163 and its expanding functional repertoire〔J〕.Clin Chim Acta,2012；413(7-8): 669-74.

7 Moller HJ.Soluble CD163〔J〕.Scand J Clin Lab Invest,2012;72(1): 1-13.

〔2014-09-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

吉林省科技廳資助(No.20130413030GH)

宋 磊(1984-)，男，主治醫(yī)師，主要從事呼吸疾病研究。

戴英增(1963-)，女，主治醫(yī)師，主要從事結(jié)核病免疫機制研究。

R529.3

A

1005-9202(2015)12-3382-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.092

1 吉林大學白求恩第一醫(yī)院干部病房 2 吉林大學白求恩第一醫(yī)院呼吸科