馮鎖民，翟西峰，陳 程，景亞莉，李惠民，周范莉，王 帥

(1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安 710021；2.商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 商州 726000)

阿托伐他汀鈣是他汀類藥物中最常用的降低膽固醇藥物。除降脂外，還能改善內(nèi)皮細(xì)胞功能、穩(wěn)定斑塊、抗凝、改善微循環(huán)，廣泛用于心腦血管疾病的預(yù)防和治療[1]。但由于阿托伐他汀鈣難溶于水，限制了其口服制劑生物利用度的發(fā)揮[2]。作者通過(guò)加入不同種類的表面活性劑——十二烷基硫酸鈉、泊洛沙姆188、吐溫-80，采用粉末直接壓片的方法，使用高效液相色譜法測(cè)定不同時(shí)間片劑中阿托伐他汀鈣的溶出度并進(jìn)行比較，篩選出增溶效果最好的表面活性劑。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

阿托伐他汀鈣原料藥：批號(hào)130801,質(zhì)量分?jǐn)?shù)101%，湖南迪諾制藥有限公司；阿托伐他汀鈣對(duì)照品：批號(hào)100808-201203，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.3%，中國(guó)食品藥品鑒定研究院；微晶纖維素(MCC)、CMS-Na、硬脂酸鎂:上海山浦化工有限公司；乳糖、泊洛沙姆188(F68)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)制藥廠；吐溫-80:東光縣光大油脂有限公司；十二烷基硫酸鈉:天津市天力化學(xué)試劑有限公司,以上均為藥用級(jí)。甲醇、乙腈：色譜純，磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、醋酸銨：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

高效液相色譜系統(tǒng)1260型、Agilent HC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)：美國(guó)安捷倫Agilent科技有限公司；單沖壓片機(jī)：上海天凡藥機(jī)制造廠；FA1004B型電子天平：上海越平科學(xué)儀器有限公司；賽多利斯酸度計(jì)PB-10：上海皖寧精密科學(xué)儀器有限公司；D-800LS智能藥物溶出儀：天津市天大天發(fā)科技有限公司。

1.2 HPLC測(cè)定阿托伐他汀鈣含量方法的建立

1.2.1 色譜條件

Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：醋酸銨緩沖溶液(稱取醋酸銨0.77 g，置500 mL水中，超聲使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.5±0.05)-乙腈(體積比55∶45)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)244 nm，進(jìn)樣量20 μL，柱溫35 ℃。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿托伐他汀鈣對(duì)照品10.01 mg，置于5 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，配制成1.908 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.2.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取阿托伐他汀鈣原料藥0.100 3 g，用甲醇溶解配成0.040 12 mg/mL的供試品溶液。

1.2.3 方法學(xué)考察

1.2.3.1 線性關(guān)系

精密量取“1.2.2.1”項(xiàng)下阿托伐他汀鈣對(duì)照品儲(chǔ)備液，依次用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液系列。分別吸取上述各溶液20 μL，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定。

1.2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn)

取濃度為0.04 mg/mL的對(duì)照品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次。

1.2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取濃度為0.040 12 mg/mL的供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。

1.2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取濃度為0.04 mg/mL的對(duì)照品溶液一份，室溫下放置，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，在0、2、4、6、8、10 h各個(gè)時(shí)刻段分別進(jìn)樣。

1.2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取濃度為0.04 mg/mL的阿托伐他汀鈣原料藥3份，每份120 μL，分別加入濃度為0.04 mg/mL的阿托伐他汀鈣對(duì)照品溶液80、100、120 μL，搖勻，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，各樣品重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算含量。

1.2.4 阿托伐他汀鈣原料藥含量測(cè)定

精密稱取阿托伐他汀鈣原料藥，配成濃度為0.04 mg/mL，連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,計(jì)算樣品平均含量100.8%，與湖南迪諾制藥的藥檢報(bào)告101%接近。

1.2.5 阿托伐他汀鈣片劑的制備

設(shè)計(jì)的阿托伐他汀鈣片處方組成見(jiàn)表1。將主藥與輔料按等量遞加法混合均勻，選直徑7 mm的模具，用單沖壓片機(jī)，采用粉末直接壓片的方法，每個(gè)處方壓制100片。

表1 阿托伐他汀鈣片處方組成 m/mg

1.2.6 片劑含量測(cè)定

取各處方藥品10片，精密稱重，研細(xì)混勻，分別稱取相當(dāng)于阿托伐他汀鈣25 mg的粉末，于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液1 mL，置于10 mL容量瓶中用甲醇稀釋。各取20 μL，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。

1.2.7 阿托伐他汀鈣片的溶出度測(cè)定

分別取處方A、B、C的阿托伐他汀鈣5片，照中國(guó)藥典溶出度測(cè)定方法中的槳法[3]，以磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)數(shù)100 r/mim，每5、10、15、30、45、60 min時(shí)取樣5 mL(同時(shí)補(bǔ)充空白介質(zhì)5 mL)，用微孔濾膜過(guò)濾，取濾液20 μL，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄阿托伐他汀鈣峰面積，計(jì)算累積溶出度。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 方法學(xué)考察結(jié)果

線性關(guān)系中測(cè)定的峰面積分別為107、350、725、1 132、2 347、4 691，回歸方程為：A=30 698c-4.987 9，r=0.999 7，表明阿托伐他汀鈣在0.005～0.16 mg/mL線性良好。對(duì)照品的HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

精密度中測(cè)得的峰面積分別為1 291、1 299、1 287、1 280、1 297、1 289，RSD為0.53%，表明精密度良好。

t/min圖1 阿托伐他汀鈣對(duì)照品的HPLC圖

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)得阿托伐他汀鈣峰面積分別為1 387、1 381、1 390、1 376、1 383、1 372，計(jì)算含量的RSD=0.49%，表明重復(fù)性良好。樣品的HPLC色譜圖見(jiàn)圖2。

t/min圖2 阿托伐他汀鈣原料的HPLC圖

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的峰面積分別為2 231、2 226、2 221、2 217、2 212、2 208，RSD=0.39%，表明溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

回收率實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的結(jié)果見(jiàn)表2。平均回收率100.06%，RSD為0.87%。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)(n=9)

2.1.2 片劑含量測(cè)定結(jié)果

3個(gè)處方中阿托伐他汀鈣的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。片劑A的樣品色譜圖見(jiàn)圖3，片劑陰性對(duì)照色譜圖見(jiàn)圖4。

表3 片劑中w(阿托伐他汀鈣)測(cè)定結(jié)果

t/min圖3 阿托伐他汀鈣A處方的HPLC圖

t/min圖4 阿托伐他汀鈣片空白輔料的HPLC色譜圖

2.1.3 溶出度測(cè)定結(jié)果

A、B、C 3個(gè)處方溶出度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 阿托伐他汀鈣片的溶出度測(cè)定結(jié)果(x±SD,n=5) 溶出度/%

2.2 討論

2.2.1 流動(dòng)相篩選

實(shí)驗(yàn)參照阿托伐他汀鈣國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[4]和相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]，經(jīng)摸索流動(dòng)相采用V(醋酸銨緩沖液)∶V(乙腈)=55∶45比較合適。該比例不僅能實(shí)現(xiàn)主成分峰及各雜質(zhì)峰之間較好分離，而且組成簡(jiǎn)單。

2.2.2 溶出度測(cè)定方法的選擇

參照文獻(xiàn)[7-8]方法，結(jié)合實(shí)際，溶出度測(cè)定方法采用漿法，以pH=6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)數(shù)100 r/min。該方法能較好的反映阿托伐他汀鈣片的溶出行為。

3 結(jié) 論

在主藥和其它輔料相同的情況下，分別用3種不同的表面活性劑(泊洛沙姆188、吐溫-80、十二烷基硫酸鈉)作為單因素，設(shè)計(jì)3個(gè)處方進(jìn)行片劑制備，通過(guò)測(cè)定溶出度進(jìn)行比較，從表4可以看出，加有表面活性劑十二烷基硫酸鈉的處方C在各個(gè)時(shí)刻段的溶出度明顯高于處方A和B，因此3種表面活性劑中十二烷基硫酸鈉對(duì)阿托伐他汀鈣的增溶效果最好。

[ 參 考 文 獻(xiàn) ]

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[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典二部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：85-86.

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