何海紅 何雅娟 王衛(wèi)華

(中國計量科學(xué)研究院，北京 100029)

?

液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器的檢定*

何海紅 何雅娟 王衛(wèi)華

(中國計量科學(xué)研究院，北京 100029)

本文詳細描述了按照新版JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程的要求，對液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器進行檢定的過程，并總結(jié)了檢定過程中的經(jīng)驗和注意事項，以供廣大檢定員參考。

液相色譜儀；檢定規(guī)程；蒸發(fā)光散射檢測器

0 引言

蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)，是通過將洗脫液霧化蒸發(fā)，使剩下高沸點組分的小液滴進入到光散射池被光電管接收形成電信號，再傳輸?shù)接嬎銠C形成色譜圖，理論上可以檢測到揮發(fā)性低于流動相的任何物質(zhì)，因此為通用型檢測器。與示差折光率檢測器相比，ELSD可以進行梯度洗脫，而且基線在進行梯度洗脫時也不會有太大的變化，這就使得很多在示差折光率檢測器上分離不好的混合物在ELSD上可以進行很好的分離，大大提高了分離度。ELSD作為紫外檢測器的補充，現(xiàn)常用于檢測沒有紫外吸收或無發(fā)色基團的物質(zhì)，在藥物分析、保健品分析、組合化學(xué)、脂類分析、氨基酸分析、聚合物分析和表面活性劑分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。

為滿足社會上對ELSD檢定校準(zhǔn)的需求，JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程(于2014年8月14日實施)中增加了ELSD檢定內(nèi)容和指標(biāo)要求，筆者以ELSD-LT II型號(日本島津制作所)的檢定為實例，詳細介紹了其檢定過程，并總結(jié)了檢定過程中的經(jīng)驗和注意事項，供廣大檢定員參考，方便大家的日常檢定、校準(zhǔn)工作。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜系統(tǒng)：島津LC-20AT，配置ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器；

甲醇：色譜純，merk公司；

甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：標(biāo)物編號GBW(E)130405，200μg/mL，U=2.0%，k=2；標(biāo)物編號GBW(E)130406，5.0μg/mL，U=5.0%，k=2。

1.2 色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(50mm×4.6mm，3.5μm)；流動相：甲醇；流速：1.0mL/min；漂移管溫度35℃；增益(Gain)為7；載氣壓力350kPa(霧化氣流速大概在2.7L/min左右)；進樣量：定性定量重復(fù)性為10μL，最小檢測濃度為20μL。

2 ELSD的檢定

2.1 檢定方法

1)首先以1.1中的甲醇為流動相，將1.2中的色譜柱安裝到柱溫箱中；然后，打開儀器電源并連接工作站，設(shè)定1.2中檢測器中漂移管的溫度和霧化氣壓力；待檢測器溫度與霧化氣壓力達到設(shè)定值并穩(wěn)定后，將泵流速設(shè)定為1.0mL/min并運行，待儀器達到穩(wěn)定狀態(tài)準(zhǔn)備進樣，該穩(wěn)定時間約15min；

2)用標(biāo)物編號GBW(E)130405，200μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行定性定量重復(fù)性檢定，連續(xù)進樣7次，每次進樣10μL，取連續(xù)6次數(shù)據(jù)作為定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)，記錄每次進樣中膽固醇峰的保留時間和峰面積，分別計算保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差;

3)用標(biāo)物編號GBW(E)130406，5.0μg/mL甲醇中膽固醇溶液進行最小檢測濃度檢定，連續(xù)進樣3次，每次進樣20μL，記錄每次進樣中膽固醇的峰高，取3個峰高值的平均值作為最終峰高值。

4)按照1.2色譜條件，不進樣，采集30min空白基線，記錄色譜圖。

2.2 檢定數(shù)據(jù)

2.2.1 定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

利用200μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器上進行定性定量重復(fù)性檢定，數(shù)據(jù)見表1，色譜圖見圖1。

圖1 定性定量重復(fù)性色譜圖

表1 定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

2.2.2 最小檢測濃度數(shù)據(jù)

利用5.0μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器上進行最小檢測濃度檢定，數(shù)據(jù)見表2，色譜圖見圖2。

圖2 最小檢測濃度色譜圖

表2 最小檢測濃度峰高數(shù)據(jù)

根據(jù)檢定規(guī)程中最小檢測濃度計算公式(1)，計算最小檢測濃度，結(jié)果見表3。

(1)

式中，cL為最小檢測濃度，g/mL；Nd為基線噪聲峰高，mV；c為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/mL；V為進樣體積，μL；H為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰高，mV；20為系數(shù)，μL。

表3 最小檢測濃度檢定結(jié)果

2.2.3 檢測器的噪音、漂移數(shù)據(jù)

在島津公司的ELSD-LTII蒸發(fā)光散射檢測器上進行檢測器噪音與漂移檢定，色譜圖分別見色譜圖3、圖4。檢測數(shù)據(jù)：噪音為0.3mV，漂移為1.1mV/30min。

圖3 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器噪音色譜圖

圖4 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器漂移色譜圖

2.2.4 檢定結(jié)果匯總

島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器檢定結(jié)果匯總，見表4。

表4 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測器檢定結(jié)果

3 經(jīng)驗介紹與注意事項

根據(jù)筆者的經(jīng)驗ELSD走基線大概15min左右就穩(wěn)定了，只要流動相與氣源質(zhì)量沒問題檢定過程一般都很順利。筆者在ELSD的檢定過程中總結(jié)了一些經(jīng)驗以供廣大檢定員參考：

1)檢測器需要把流動相全部蒸發(fā)掉，所以要求流動相與樣品里面都不能有不揮發(fā)的物質(zhì)；

2)如果長時間不用要提前用純水沖洗系統(tǒng)，保證檢測器部分沒有灰塵污染；

3)氣源最好由高純氮氣鋼瓶提供，這種氣源比氮氣發(fā)生器提供的氣源要干凈一些，如果用氮氣發(fā)生器會有干擾信號產(chǎn)生；

4)由于膽固醇樣品出峰時間較長，所以用的色譜柱不要超過150mm，這樣可以保證出峰時間在10min以內(nèi)，還可以適當(dāng)提高泵流速來加快膽固醇樣品出峰，當(dāng)提高流速后要適當(dāng)提高一點霧化氣流速來保證流動相揮發(fā)完全；

5)當(dāng)遇到高溫型ELSD時，漂移管設(shè)定的溫度一定要高于流動相的沸點，保險起見建議高10℃左右，比如在Alltech公司生產(chǎn)的2000ES型號ELSD上面，漂移管溫度要設(shè)定在70℃左右。

[1] JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國質(zhì)檢出版社，2014

[2] JJG 705—2002液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國計量出版社，2002

[3] 汪正范.色譜定性與定量.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

[4] 張慶和.高效液相色譜實用手冊.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008

[5] 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

[6] 何海紅，何雅娟.采用新液相色譜儀檢定規(guī)程檢定熒光檢測器.計量技術(shù)，2014(10)

《計量技術(shù)》雜志歡迎大家踴躍投稿《計量技術(shù)》雜志以實用性、權(quán)威性、及時性為主要特色;堅持面向生產(chǎn),面向基層,理論與實踐相結(jié)合的編輯方針;著重報道計量、測試、檢驗、質(zhì)量保障等方面的新技術(shù)、新產(chǎn)品、新動態(tài)、綜合評述、經(jīng)驗介紹等內(nèi)容。歡迎大家投稿,投稿要求如下:1.來稿以說明問題為主要目的,語句要精練、簡潔,全文盡量不超過4000字。2000字以上請附摘要和關(guān)鍵詞。2.來稿涉及計量單位時,請一律使用法定計量單位的名稱和符號。3.來稿時應(yīng)寫清作者姓名、單位、郵編、通訊地址及聯(lián)系電話。可通過我刊電子信箱投稿。4.編輯部收到來稿后,立即給作者“稿件回執(zhí)”,在不遲于四個月內(nèi)通知作者是否刊用。由于本刊人力有限,不刊用稿均不寄還,請作者自留底稿。

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(2013YQ510391)

10.3969/j.issn.1000-0771.2015.1.15