何海紅 何雅娟 王衛(wèi)華

(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，北京 100029)

?

液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的檢定*

何海紅 何雅娟 王衛(wèi)華

(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，北京 100029)

本文詳細(xì)描述了按照新版JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程的要求，對(duì)液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢定的過(guò)程，并總結(jié)了檢定過(guò)程中的經(jīng)驗(yàn)和注意事項(xiàng)，以供廣大檢定員參考。

液相色譜儀；檢定規(guī)程；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

0 引言

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)，是通過(guò)將洗脫液霧化蒸發(fā)，使剩下高沸點(diǎn)組分的小液滴進(jìn)入到光散射池被光電管接收形成電信號(hào)，再傳輸?shù)接?jì)算機(jī)形成色譜圖，理論上可以檢測(cè)到揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何物質(zhì)，因此為通用型檢測(cè)器。與示差折光率檢測(cè)器相比，ELSD可以進(jìn)行梯度洗脫，而且基線在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)也不會(huì)有太大的變化，這就使得很多在示差折光率檢測(cè)器上分離不好的混合物在ELSD上可以進(jìn)行很好的分離，大大提高了分離度。ELSD作為紫外檢測(cè)器的補(bǔ)充，現(xiàn)常用于檢測(cè)沒(méi)有紫外吸收或無(wú)發(fā)色基團(tuán)的物質(zhì)，在藥物分析、保健品分析、組合化學(xué)、脂類分析、氨基酸分析、聚合物分析和表面活性劑分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。

為滿足社會(huì)上對(duì)ELSD檢定校準(zhǔn)的需求，JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程(于2014年8月14日實(shí)施)中增加了ELSD檢定內(nèi)容和指標(biāo)要求，筆者以ELSD-LT II型號(hào)(日本島津制作所)的檢定為實(shí)例，詳細(xì)介紹了其檢定過(guò)程，并總結(jié)了檢定過(guò)程中的經(jīng)驗(yàn)和注意事項(xiàng)，供廣大檢定員參考，方便大家的日常檢定、校準(zhǔn)工作。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜系統(tǒng)：島津LC-20AT，配置ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；

甲醇：色譜純，merk公司；

甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130405，200μg/mL，U=2.0%，k=2；標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130406，5.0μg/mL，U=5.0%，k=2。

1.2 色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(50mm×4.6mm，3.5μm)；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.0mL/min；漂移管溫度35℃；增益(Gain)為7；載氣壓力350kPa(霧化氣流速大概在2.7L/min左右)；進(jìn)樣量：定性定量重復(fù)性為10μL，最小檢測(cè)濃度為20μL。

2 ELSD的檢定

2.1 檢定方法

1)首先以1.1中的甲醇為流動(dòng)相，將1.2中的色譜柱安裝到柱溫箱中；然后，打開儀器電源并連接工作站，設(shè)定1.2中檢測(cè)器中漂移管的溫度和霧化氣壓力；待檢測(cè)器溫度與霧化氣壓力達(dá)到設(shè)定值并穩(wěn)定后，將泵流速設(shè)定為1.0mL/min并運(yùn)行，待儀器達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)準(zhǔn)備進(jìn)樣，該穩(wěn)定時(shí)間約15min；

2)用標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130405，200μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定性定量重復(fù)性檢定，連續(xù)進(jìn)樣7次，每次進(jìn)樣10μL，取連續(xù)6次數(shù)據(jù)作為定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)，記錄每次進(jìn)樣中膽固醇峰的保留時(shí)間和峰面積，分別計(jì)算保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差;

3)用標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130406，5.0μg/mL甲醇中膽固醇溶液進(jìn)行最小檢測(cè)濃度檢定，連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣20μL，記錄每次進(jìn)樣中膽固醇的峰高，取3個(gè)峰高值的平均值作為最終峰高值。

4)按照1.2色譜條件，不進(jìn)樣，采集30min空白基線，記錄色譜圖。

2.2 檢定數(shù)據(jù)

2.2.1 定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

利用200μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器上進(jìn)行定性定量重復(fù)性檢定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 定性定量重復(fù)性色譜圖

表1 定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

2.2.2 最小檢測(cè)濃度數(shù)據(jù)

利用5.0μg/mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器上進(jìn)行最小檢測(cè)濃度檢定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 最小檢測(cè)濃度色譜圖

表2 最小檢測(cè)濃度峰高數(shù)據(jù)

根據(jù)檢定規(guī)程中最小檢測(cè)濃度計(jì)算公式(1)，計(jì)算最小檢測(cè)濃度，結(jié)果見(jiàn)表3。

(1)

式中，cL為最小檢測(cè)濃度，g/mL；Nd為基線噪聲峰高，mV；c為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/mL；V為進(jìn)樣體積，μL；H為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰高，mV；20為系數(shù)，μL。

表3 最小檢測(cè)濃度檢定結(jié)果

2.2.3 檢測(cè)器的噪音、漂移數(shù)據(jù)

在島津公司的ELSD-LTII蒸發(fā)光散射檢測(cè)器上進(jìn)行檢測(cè)器噪音與漂移檢定，色譜圖分別見(jiàn)色譜圖3、圖4。檢測(cè)數(shù)據(jù)：噪音為0.3mV，漂移為1.1mV/30min。

圖3 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器噪音色譜圖

圖4 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移色譜圖

2.2.4 檢定結(jié)果匯總

島津公司的ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢定結(jié)果匯總，見(jiàn)表4。

表4 ELSD-LT II蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢定結(jié)果

3 經(jīng)驗(yàn)介紹與注意事項(xiàng)

根據(jù)筆者的經(jīng)驗(yàn)ELSD走基線大概15min左右就穩(wěn)定了，只要流動(dòng)相與氣源質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題檢定過(guò)程一般都很順利。筆者在ELSD的檢定過(guò)程中總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)以供廣大檢定員參考：

1)檢測(cè)器需要把流動(dòng)相全部蒸發(fā)掉，所以要求流動(dòng)相與樣品里面都不能有不揮發(fā)的物質(zhì)；

2)如果長(zhǎng)時(shí)間不用要提前用純水沖洗系統(tǒng)，保證檢測(cè)器部分沒(méi)有灰塵污染；

3)氣源最好由高純氮?dú)怃撈刻峁?，這種氣源比氮?dú)獍l(fā)生器提供的氣源要干凈一些，如果用氮?dú)獍l(fā)生器會(huì)有干擾信號(hào)產(chǎn)生；

4)由于膽固醇樣品出峰時(shí)間較長(zhǎng)，所以用的色譜柱不要超過(guò)150mm，這樣可以保證出峰時(shí)間在10min以內(nèi)，還可以適當(dāng)提高泵流速來(lái)加快膽固醇樣品出峰，當(dāng)提高流速后要適當(dāng)提高一點(diǎn)霧化氣流速來(lái)保證流動(dòng)相揮發(fā)完全；

5)當(dāng)遇到高溫型ELSD時(shí)，漂移管設(shè)定的溫度一定要高于流動(dòng)相的沸點(diǎn)，保險(xiǎn)起見(jiàn)建議高10℃左右，比如在Alltech公司生產(chǎn)的2000ES型號(hào)ELSD上面，漂移管溫度要設(shè)定在70℃左右。

[1] JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國(guó)質(zhì)檢出版社，2014

[2] JJG 705—2002液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002

[3] 汪正范.色譜定性與定量.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

[4] 張慶和.高效液相色譜實(shí)用手冊(cè).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008

[5] 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

[6] 何海紅，何雅娟.采用新液相色譜儀檢定規(guī)程檢定熒光檢測(cè)器.計(jì)量技術(shù)，2014(10)

《計(jì)量技術(shù)》雜志歡迎大家踴躍投稿《計(jì)量技術(shù)》雜志以實(shí)用性、權(quán)威性、及時(shí)性為主要特色;堅(jiān)持面向生產(chǎn),面向基層,理論與實(shí)踐相結(jié)合的編輯方針;著重報(bào)道計(jì)量、測(cè)試、檢驗(yàn)、質(zhì)量保障等方面的新技術(shù)、新產(chǎn)品、新動(dòng)態(tài)、綜合評(píng)述、經(jīng)驗(yàn)介紹等內(nèi)容。歡迎大家投稿,投稿要求如下:1.來(lái)稿以說(shuō)明問(wèn)題為主要目的,語(yǔ)句要精練、簡(jiǎn)潔,全文盡量不超過(guò)4000字。2000字以上請(qǐng)附摘要和關(guān)鍵詞。2.來(lái)稿涉及計(jì)量單位時(shí),請(qǐng)一律使用法定計(jì)量單位的名稱和符號(hào)。3.來(lái)稿時(shí)應(yīng)寫清作者姓名、單位、郵編、通訊地址及聯(lián)系電話?？赏ㄟ^(guò)我刊電子信箱投稿。4.編輯部收到來(lái)稿后,立即給作者“稿件回執(zhí)”,在不遲于四個(gè)月內(nèi)通知作者是否刊用。由于本刊人力有限,不刊用稿均不寄還,請(qǐng)作者自留底稿。

國(guó)家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(xiàng)(2013YQ510391)

10.3969/j.issn.1000-0771.2015.1.15