賴日明

廣東省增城市中醫(yī)院，廣東 廣州 511300

藥物研究

不同炮制方法對(duì)決明子中蒽醌類成分含量的影響

賴日明

廣東省增城市中醫(yī)院，廣東 廣州 511300

目的：分析不同炮制方法對(duì)決明子中蒽醌類成分含量的影響。方法：采用分光光度法對(duì)決明子生品、清炒炮制品、微波炮制品中蒽醌類含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：微波炮制法浸出物得率和游離蒽醌含量最高，該方法比傳統(tǒng)炒制法效果更佳，在微波爐中以中火加熱6min、鋪設(shè)厚度0.5cm能取得最好效果；決明子生品結(jié)合蒽醌含量最高；傳統(tǒng)炒制法在180℃下炒制6min，可取得最佳效果。結(jié)論：決明子有多種炮制方法，對(duì)其中蒽醌類成分含量有不同的影響。

炮制；決明子；微波法；清炒法；蒽醌類含量

決明子又叫草決明、馬蹄決明，其性微寒，味苦、甘、咸，具有清肝明目、利水通便的功效［1］。研究發(fā)現(xiàn)，決明子中含有大黃素、大黃酚等蒽醌類衍生物，具有降脂降壓、保肝、調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用［2］。蒽醌類在止血、瀉下、抗菌、利尿等方面頗具優(yōu)勢(shì)，而決明子炮制法方法較多，如炒制、醋制、酒制、微波制等，每種炮制方法都會(huì)對(duì)決明子中蒽醌類成分產(chǎn)生不同影響［3］。為進(jìn)一步提高決明子炮制工藝，為其飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)，研究采用分光光度法對(duì)幾種不同炮制品中蒽醌類成分的含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 BSA623S－CW準(zhǔn)微量天平（蘇州金鉆電子衡器有限公司）；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （上海奧析科學(xué)儀器有限公司）；微波爐 （廣東美的微波爐制造有限公司）；烘箱（江蘇高皓工業(yè)爐有限公司）；SDHS21－210電磁爐（浙江蘇泊爾股份有限公司）。

1.2 材料 1，8－二羥基蒽醌對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所）；決明子藥材采自浙江寧波，經(jīng)鑒定為豆科植物決明的干燥成熟種子。所用試劑均為分析純。

2 方法

2.1 清炒炮制 分別稱取A、B、C 3份決明子，每份300g。A份在150℃下加熱清炒12min，B份在180℃下加熱清炒6min，C份在200℃下加熱清炒3min。炒后粉碎，過(guò)60目篩，備用。

2.2 微波爐炮制 選取加熱程度Ⅰ、加熱時(shí)間Ⅱ、決明子在微波爐內(nèi)鋪設(shè)厚度Ⅲ為因素 （見(jiàn)表1），進(jìn)行L9（34）正交實(shí)驗(yàn)。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

2.3 總蒽醌的制備 取3g篩過(guò)后的粉末和3g決明子生品放于索氏提取器，加100ml80%乙醇進(jìn)行回流，直至提取到無(wú)色將提取液合并，定容100ml；然后從中吸取1ml滴入燒瓶，并添加20ml 1mol／L鹽酸溶液進(jìn)行回流水解3h；以氯仿分為20、20、10、10ml依次進(jìn)行回流萃取，合并氯仿萃取液，再用混合堿溶液萃取，直至蒽醌反應(yīng)結(jié)束，合并堿液定容至100ml，以混合堿液為空白，測(cè)定樣品中蒽醌的含量。

2.4 游離蒽醌的制備 從樣品溶液制備項(xiàng)下提取液中取1ml，并將之置于蒸餾水20 ml中，從“氯仿回流萃取”起即采用 “2.3”中相同的方法，對(duì)各樣品中游離蒽醌的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)合蒽醌含量＝總蒽醌含量－游離蒽醌含量。

2.5 測(cè)定波長(zhǎng) 取適量的樣品溶液和對(duì)照品溶液，蒸干后加0.5%醋酸鎂－甲醇溶液溶解并定容至10m l量瓶中，以相應(yīng)試劑作空白，在400nm－800nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果最大吸收波長(zhǎng)為493.5nm。

3 結(jié)果

3.1 清炒決明子對(duì)蒽醌含量的影響 由表2可知，清炒品浸出物得率高于生品；清炒后總蒽醌含量無(wú)較大差異，游離蒽醌呈上升趨勢(shì)，結(jié)合蒽醌下降。綜合考慮下，清炒最佳方案為溫度180℃，時(shí)間為6min。

表2 決明子清炒后蒽醌類成分的含量 （%）

3.2 微波炮制法正交試驗(yàn)結(jié)果 分別稱取300g決明子放于微波爐中加熱，最終得到9個(gè)編號(hào)的樣品，粉碎后同樣過(guò)60目篩留以備用，經(jīng)對(duì)比，實(shí)驗(yàn)號(hào)6組浸出物、游離蒽醌測(cè)出量最高，結(jié)合蒽醌測(cè)出量最低，可見(jiàn)正交實(shí)驗(yàn)中，采用中火、加熱時(shí)間6min、決明子在微爐內(nèi)鋪設(shè)厚度Ⅲ為0.5cm測(cè)得的浸出物及游離蒽醌在微波炮制中檢出量最高。見(jiàn)表3。

表3 微波炮制后蒽醌類成分的含量 （%）

3.3 炒制法和微波法對(duì)比 清炒決明子最佳方案的浸出物得率為5.346%，低于最佳微波炮制品中最佳值5.580%；結(jié)合蒽醌含量為0.319%，高于最佳微波炮制品的0.192%；游離蒽醌含量為0.076%，低于微波炮制品的0.082%。浸出物及游離蒽醌增加意味著療效更佳，所以微波法整體效果要高于炒制法。結(jié)合3.2的結(jié)果可知，利用微波炮制法，并將其條件設(shè)定為：中火、加熱時(shí)間6min、決明子在微波爐內(nèi)鋪設(shè)厚度Ⅲ為0.5cm測(cè)得的浸出物及游離蒽醌檢出量最高。

3.4 方法學(xué)考察 ①線性關(guān)系考察：分別吸取2μl、4μl、6μl、8μl、10μl對(duì)照品溶液進(jìn)樣，對(duì)色譜圖加以記錄，縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為進(jìn)樣量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。②精密度試驗(yàn)：吸取對(duì)照品溶液10μl進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，對(duì)對(duì)照品峰面積進(jìn)行測(cè)定。③穩(wěn)定性試驗(yàn)：吸取對(duì)照品溶液在0h、4h、6h、8h及12h進(jìn)樣10μl，對(duì)對(duì)照品峰面積進(jìn)行測(cè)定。④重現(xiàn)性試驗(yàn)：取6份決明子樣品 （每份量為0. 5g）并精密成定，跟游離蒽醌供試品溶液制備方法進(jìn)行樣品制備，展開(kāi)測(cè)定。經(jīng)檢測(cè)，采用中火、加熱時(shí)間6min、決明子在微波爐內(nèi)鋪設(shè)厚度Ⅲ為0.5cm的工藝條件，方法學(xué)考察相關(guān)系數(shù)高于0.9998，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果均良好。

4 討論

決明子生品較硬難以粉碎，導(dǎo)致有效成分的溶出有限，直接影響到藥效。炒制后變得酥脆，粉碎后也增加有效成分的溶出，能夠緩和其寒瀉之性。研究［4］表明，不同炮制方法對(duì)其應(yīng)用效果有著不同影響。研究對(duì)決明子生品、傳統(tǒng)炒制品、微波爐炮制品三種樣品進(jìn)行比較，考察不同因素，如加熱時(shí)間、溫度等，對(duì)浸出物得率和蒽醌含量的影響［5］。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在浸出物得率方面，微波炮制品＞清炒品＞決明子生品；在結(jié)合蒽醌含量方面，決明子生品最高，其次是清炒品，微波炮制品最低；在游離蒽醌含量方面，微波炮制品最高，清炒品次之，決明子生品再次之。因決明子生品效果有限，炮制時(shí)可選擇清炒法或微波法，清炒最佳工藝是在180℃下炒制6min，微波炮制法最佳工藝則是在中火條件下微波爐張加熱6min，而且微波法效果要優(yōu)于炒制法。實(shí)際操作中微波炮制法雖然決明子鋪設(shè)厚度影響較小，但也要適中［6］，如果太厚或太薄都會(huì)影響到均勻性；而炒制過(guò)程中需勤加翻動(dòng)，以防局部過(guò)熱。

［1］曹群.炮制方法對(duì)決明子中蒽醌類成分含量的影響 ［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（6）：21－22.

［2］蔣亞莉，舒志明，王建.不同炮制方法對(duì)決明子中蒽醌含量的影響［J］.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2010，34（4）：389－391.

［3］方艷夕，毛斌斌，時(shí)維靜，等.炮制方法對(duì)決明子中蒽醌和多糖含量的影響［J］.宜春學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，34（4）：102－105.

［4］王瑩.決明子蒽醌類成分的含量測(cè)定方法研究及其在藥代動(dòng)力學(xué)中的應(yīng)用［D］.陜西中醫(yī)學(xué)院，2013.

［5］沈云士.中藥決明子蒽醌類成分含量測(cè)定的探析 ［J］.醫(yī)藥前沿，2014，2（5）：379－380.

［6］劉斌，鞏鴻霞，肖學(xué)鳳，等.決明子化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.藥物評(píng)價(jià)研究，2010，33（4）：312－315.

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1007－8517（2015）20－0005－02

2015.08.06）