劉洹兵，劉 毅

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙410128；2.湖南省衡陽市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，湖南衡陽421000）

近年來，隨著雞生產(chǎn)的規(guī)?；图s化，疾病的流行導(dǎo)致雞群免疫力下降，生產(chǎn)性能降低。在飼料中添加抗生素能控制動物腹瀉和促進生長，但抗生素的長期使用會使動物體內(nèi)逐漸積累，并產(chǎn)生耐藥性，給動物安全生產(chǎn)和人類健康都帶來了巨大的潛在危險[1-2]。

抗菌肽是具有抗菌活性肽類的總稱，具有廣譜抗菌活性和抗病毒、真菌、寄生蟲及腫瘤等生物活性[3]，不易產(chǎn)生耐藥性，穩(wěn)定性好?？咕淖鳛橐环N非特異性免疫成分，同時也是體液免疫防衛(wèi)體系的主要成份，在抵擋外來病原體中起著主要作用。本文在研究抗菌肽在肉雞日糧中添加效果，研討不同添加水平的抗菌肽對肉仔雞使用成效的影響，為抗菌肽作為抗生素替代品在肉雞飼料中的運用提供實驗數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

選用某雞場1日齡個體基本一致的健康A(chǔ)A肉雞仔1 000只；10%硫酸粘桿菌素作為抗生素；抗菌肽為粗提品，其活性成分為15%；參照蘭江景星養(yǎng)殖場肉用仔雞養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)和實驗場地具體情況，為本實驗的肉用仔雞提供基礎(chǔ)日糧。

1.2 試驗動物分組

采取完全隨機試驗設(shè)計，分為6個組處理。處理1為對照組（無抗生素和抗菌肽）；處理2為抗生素對照，處理1基礎(chǔ)上增加15mg/kg硫酸粘桿菌素；處理3～6為實驗處理組，在處理1基礎(chǔ)上分別增加 300、600、1 200、2 400 mg/kg抗菌肽。實驗組與對照組的飼養(yǎng)管理條件一致，每日飼喂3次，自由采食，全天供水，自然光照，飼養(yǎng)密度為10只/m2。

1.3 安全性及免疫效果評價

1.3.1 免疫指標(biāo)測定：于 7、21、35、42 日齡分別從各組每個隨機重復(fù)抽取20只體重接近平均體重的肉雞，稱重后宰殺，解剖剝離或摘取胸腺、脾臟和法氏囊，稱量記錄各免疫器官鮮重，分別計算各免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重（g）/宰前活重（g）×100%[4]。

1.3.2 免疫抗體：于14、21、28、35日齡分別從各處理組中隨機選擇20只體重接近平均體重的肉雞，進行翅靜脈無菌采集抗凝血5mL（肝素鋰無菌真空采血管），3 000 r/min離心10min，分離得到血清，采用血凝試驗測定H5N1禽流感、新城疫免疫抗體水平。

1.4 不同抗菌肽添加量對肉雞血液生化指標(biāo)的影響

1.4.1 血清IgG、IgM水平及補體C3、C4含量

于21日齡、35日齡、42日齡分別從各處理組中隨機選擇20只體重接近平均體重的肉雞，進行翅靜脈無菌采集抗凝血5mL（肝素鋰無菌真空采血管），3 000 r/min離心10min后分離得到血清。選用免疫透射比濁法試劑盒，應(yīng)用半自動生化分析儀測定血清中IgG、IgM以及補體C3、C4含量。

測定原理：血清中的抗原免疫球蛋白（IgG、IgM）和血清中補體和特異性抗體相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生混濁，其濁度高低反應(yīng)血清樣品中免疫球蛋白和補體的含量[5]。

1.4.2 血清白蛋白含量測定

于14日齡、21日齡、28日齡、35日齡，稱重后分別從各組隨機選擇20只體重接近品均體重的肉雞，進行翅靜脈無菌采集抗凝血2～3mL（肝素鋰無菌真空采血管），3 000 r/min離心10min后分離得到血清。采用生化試劑盒溴甲酚綠比色法測定血清白蛋白水平。

測定原理：白蛋白具有與陰離子染料結(jié)合的特性，在pH4.0左右，溴甲酚綠與白蛋白結(jié)合后，由黃色變成綠色，綠色的深淺與白蛋白的深度成正比。

1.4.3 血清溶菌酶含量測定

于7日齡、14日齡、21日齡、28齡、35日齡，分別從各處理組中隨機選擇20只體重接近平均體重的肉雞進行翅靜脈無菌采集抗凝血5mL（肝素鋰無菌真空采血管），3 000 r/min離心10min后分離得到血清，采用免疫比濁法測驗盒測定溶菌酶。

測定原理：在一定濃度的菌液中，由于溶菌酶水解細菌細胞壁粘多肽使細菌裂解濃度降低，透光度增強，故可以根據(jù)濁度變化來推測溶菌酶的含量。

1.5 不同抗菌肽添加量對肉雞生產(chǎn)性能的影響

試驗期間每天觀察各實驗組肉雞的精神狀況，記錄各實驗組肉雞的采食量，各實驗組死亡肉雞總數(shù)，并且于21、42日齡早晨飼喂前，分別從各處理組中隨機選取20只體重與平均體重接近的肉雞，空腹稱量各肉雞的體重，從而計算各實驗組的肉雞平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用 spss統(tǒng)計軟件 11.5版Compare Means進行方差分析，鄧肯氏多重比較。表中數(shù)據(jù)用“Mean（平均數(shù)）±SE（標(biāo)準(zhǔn)誤）”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽對不同日齡肉仔雞免疫器官影響

結(jié)果見表1。由表1所示，35日齡時，添加1 200 mg/kg抗菌肽與對照組相比提高了肉仔雞胸腺指數(shù),42日齡時，雞免疫器官重量比值顯著降低。

表1 抗菌肽對不同日齡肉雞免疫器官影響

2.2 抗菌肽對不同日齡肉仔雞免疫抗體影響

結(jié)果見表2。由表中可以看出，添加1 200 mg/kg抗菌肽與對照組相比提高了肉仔雞免疫抗體水平，增加了抵抗疫病風(fēng)險能力。

表2 抗菌肽各處理組肉雞不同日齡疫苗抗體效價

2.3 不同抗菌肽添加量對肉雞血液生化指標(biāo)的影響

2.3.1 血清IgG、IgM水平

如表3所示，21日齡、35日齡、42日齡時，抗菌肽各添加組血清IgG水平顯著高于對照組，且21日齡高于35日齡、42日齡；抗菌肽各添加組血清IgM水平略高于對照組，但差異不顯著。

2.3.2 補體C3、C4含量

不同抗菌肽添加量對肉雞血清C3、C4水平如表3所示，結(jié)果表明，21日齡、35日齡、42日齡時，抗菌肽各添加組血清C3水平高于對照組，且添加1200 mg/kg抗菌肽時高于其他組合；抗菌肽各添加組血清C4水平略高于對照組，但差異不顯著。

表3 各處理對肉雞血清IgG、IgM與C3、C4水平的影響

2.3.3 血清白蛋白含量

如表4所示，14日齡、21日齡、35日齡、42日齡時，抗菌肽各添加組血清白蛋白含量水平高于對照組，且添加1 200 mg/kg抗菌肽時高于其他組合。

2.4 不同添加劑量對肉雞生產(chǎn)性能的影響

影響情況如表5所示，結(jié)果表明，日糧中添加抗菌肽能夠提高肉雞生產(chǎn)性能。14日齡試驗組肉雞活重、耗料量，料重比相差不明顯；21、42日齡試驗組肉雞活重明顯高于對照組，且好料量增加，料重比減少。研究結(jié)果顯示，抗菌肽能夠提高生長期肉雞活重及好料量，降低生長后期料重比。

表4 抗菌肽各處理組肉雞血清白蛋白和溶菌酶含量情況表

表5 抗菌肽對不同階段肉雞生產(chǎn)性能的影響

3 討論

3.1 安全性及免疫效果評價

免疫器官的發(fā)育影響機體免疫、反抗病原菌感染和侵略的功能。補體是動物機體抗感染的首要組分，參加機體防護反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)，是首要生物效應(yīng)體系和效應(yīng)擴大體系。補體C3是補體激活過程中起關(guān)鍵性效果的一種成分，不論是經(jīng)典激活路徑還是代替激活路徑，均需在C3被激活后，才能推動后續(xù)補體成分的連鎖反應(yīng)。C3的高低與總補體含量平行，所以可通過C3的測定反應(yīng)血清總補體水平，而其水平是衡量體液免疫的首要目標(biāo)。補體C4則在經(jīng)典路徑的活化期間起首要效果。免疫球蛋白（Ig）是指一類在抗原物質(zhì)刺激下機體所產(chǎn)生的具有抗體活性的球蛋白，它能與該抗原發(fā)作特異性聯(lián)系。IgG、IgM是介導(dǎo)體液免疫的首要效應(yīng)分子，在機體防護體系中發(fā)揮著首要的效果。它們的水平是反應(yīng)機體免疫情況的首要目標(biāo)。血清白蛋白與蛋白同化效果相關(guān)聯(lián)，白蛋白含量升高時，闡明動物消化吸收蛋白質(zhì)能力和免疫力提高。本試驗表明日糧中添加抗菌肽對肉雞可以促進免疫器官發(fā)育，提高免疫抗體水平，增強抵抗防御疾病風(fēng)險能力。

3.2 抗菌肽添加量對肉雞生產(chǎn)性能的影響

抗菌肽有殺菌作用和廣譜抗菌活性，能促進動物機體消化、增強機體免疫功能，作為飼料添加劑有著較好的使用前景。本試驗研究結(jié)果表明，日糧中添加抗菌肽在14日齡試驗組肉雞活重、耗料量，料重比相差不明顯；21、42日齡試驗組肉雞活重明顯高于對照組，且好料量增加，料重比減少。研究結(jié)果顯示，抗菌肽能夠提高生長期肉雞活重及好料量，下降成長后期料重比，整體來說，抗菌肽可以進步肉雞出產(chǎn)性能。

[1]祁光宇,黃銀軍,牟克斌,等.動物抗菌肽新型飼料添加劑的研究進展[J].中國飼料添加劑,2010,(3):6-9.

[2]邱富娜,劉金娥,馬俊,等.綠色飼料添加劑抗菌肽研究進展[J].畜牧與飼料科學(xué),2013,34(2):27-28.

[3]宋楠,張繼瑜,李純玲,等.抗菌肽的抑菌及免疫調(diào)控功能[J].畜牧與飼料科學(xué),2010,31(8):106-108.

[4]楊清旺.抗菌肽對肉仔雞促生長機理和應(yīng)用效果的研究[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文,2011.

[5]王靜.抗菌肽對肉雞生產(chǎn)性能和免疫功能的影響研究[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文,2007.