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        東莞地區(qū)2 9 6 0例女性宮頸脫落細(xì)胞H P V基因分型結(jié)果分析

        2015-06-05 08:39:54張七二鐘錦開(kāi)蒲榮鄺樹(shù)華王占科
        關(guān)鍵詞:內(nèi)瘤危型年齡段

        張七二,鐘錦開(kāi) ,蒲榮 ,鄺樹(shù)華 ,王占科

        (1、東莞市寮步醫(yī)院,廣東 東莞523400;2、南昌市解放軍第九四醫(yī)院,江西 南昌330002)

        流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究已證實(shí)人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的主要病因,特別是持續(xù)的高危型HPV感染[1]。目前已發(fā)現(xiàn)的HPV亞型有100多種,其中40余種與生殖道疾病相關(guān)[2],不同HPV亞型其致病性不同,且不同地區(qū)及不同年齡段女性,HPV分布及感染率亦存在差異,因而非常有必要對(duì)不同地區(qū)女性HPV感染狀況進(jìn)行流行病學(xué)檢查,為制訂適合本地區(qū)HPV感染防治工作提供理論依據(jù)。HPVDNA檢測(cè)是從病因?qū)W角度進(jìn)行宮頸病變的篩查,診斷方面具有檢查快速、特異性高等特點(diǎn)[3]。本研究采用基因擴(kuò)增及導(dǎo)流雜交技術(shù)對(duì)我院2960例女性患者宮頸脫落細(xì)胞中HPV21種亞型進(jìn)行檢測(cè),現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1 病例來(lái)源 2014年1月至2014年8月來(lái)我院就診女性患者2960例,年齡為16~81歲。

        1.2 標(biāo)本采集 由臨床醫(yī)師以窺陰器暴露宮頸,將宮頸刷置于宮頸口輕輕搓動(dòng)宮頸刷,順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈后慢慢取出,置于裝有細(xì)胞保存液的取樣管中,擰緊瓶蓋及時(shí)送檢,若不能馬上檢測(cè)者則應(yīng)保存于4℃冰箱,長(zhǎng)期保存者應(yīng)置于-20℃低溫冰箱中。

        1.3 主要試劑與儀器 HPV-DNA檢測(cè)試劑盒 (潮州凱普生物化學(xué)有限公司),ABI-7500熒光定量PCR儀,HHM-2型凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀。

        1.4 檢測(cè)步驟

        1.4.1 DNA提取 取含有宮頸脫落細(xì)胞的細(xì)胞混懸液0.5ml,14000r/min離心去上清液后,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)提取DNA。

        1.4.2 PCR擴(kuò)增 將1μlDNA模板加至0.75μlDNA Tag酶及23.25μlPCR Mix反應(yīng)體系中,瞬間離心并上機(jī)擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增條件為,95℃變性9min;95℃、20s,55℃、30s,72℃、30s循環(huán) 40 次;72℃延伸5min。

        1.4.3 雜交及結(jié)果判讀 嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作,膜上出現(xiàn)清晰可見(jiàn)的藍(lán)紫色圓點(diǎn)者為陽(yáng)性,不同位點(diǎn)代表不同亞型,其中低危型有6、11、42、43、44,高危型有 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、Cp8304,另設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

        2 結(jié)果

        2.1 HPV檢測(cè)情況 2960例標(biāo)本中共檢測(cè)出20種HPV亞型,未檢測(cè)到43亞型,830例標(biāo)本陽(yáng)性,陽(yáng)性率為28.04%。

        2.2 HPV多重感染情況 830份陽(yáng)性標(biāo)本中共檢出1090株HPV病毒,單一HPV亞型感染654例,占78.80%,多重亞型感染176例,占21.20%(以二重、三重感染為主),另見(jiàn)一例七重亞型感染者。感染前五位亞型分別為 16(17.16%)、52(15.23%)、58(12.30%)、Cp8304(7.16%)、11(6.15%);其中低危型 129 例,占 14.54%,以11、6 亞型為主;高危型 701 例,占 84.46%,以 16、52、58亞型為主,具體結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

        表1 830份HPV陽(yáng)性標(biāo)本中HPV亞型分布情況(%)

        表2 HPV亞型多重感染情況

        2.3 不同年齡段HPV感染情況 不同年齡段HPV檢出率存在差異性,其中21~30歲、>50歲陽(yáng)性檢出率分別為38%、33%,明顯高于28.04%平均水平(χ2=6.02 和 χ2=5.43,P<0.01),具體結(jié)果見(jiàn)表 3。

        表3 不同年齡段HPV感染情況

        3 討論

        宮頸癌在全球婦女惡性腫瘤中居第2位,僅次于乳腺癌,是威脅婦女健康的重要疾病。且其發(fā)病有年輕化趨勢(shì)。早期診斷和治療宮頸上皮內(nèi)瘤變是降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。人們正在努力尋找與腫瘤生物學(xué)行為關(guān)系更密切、更客觀、可重復(fù)性好的指標(biāo)[4]。

        HPV是一類具有嚴(yán)格宿主范圍和組織特點(diǎn)特異性病毒,主要通過(guò)性傳播,低危型主要引起尖銳濕疣等癥狀,而高危型則與宮頸癌密切相關(guān)。大量研究證明持續(xù)HPV感染是引起宮頸癌的主要病因,且HPV載量與宮頸癌轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。HPV與CIN和宮頸癌有密切關(guān)系,HPV感染應(yīng)視為與CIN相關(guān)的早期病變[5]從CIN到浸潤(rùn)性宮頸癌的演變過(guò)程中,高危HPV感染是宮頸癌的主要致癌因子之一。當(dāng)宮頸上皮感染HPV后細(xì)胞增殖活性升高,抑制及破壞人體局部的免疫功能,從而促進(jìn)細(xì)胞過(guò)度增殖最終癌變[6]。吳兵[7]等報(bào)道HPV基因亞型分布與地區(qū)分布有關(guān),存在一定的地區(qū)差異;Munoz[2]等示不同地區(qū)引起宮頸癌的HPV病毒亞型也不盡相同。本研究對(duì)本地區(qū)2960例婦女HPV感染情況及21種基因亞型分布情況進(jìn)行流行病學(xué)回顧性分析,結(jié)果顯示,共檢測(cè)到20種亞型,未發(fā)現(xiàn)43亞型,與王長(zhǎng)奇等報(bào)道基本一致[8],符合亞洲高危HPV的流行現(xiàn)狀[9]。28.04%的感染率低于浙江地區(qū)的33.08%[9]及北京地區(qū)的57.10%[10],高于呼和浩特地區(qū)13.04%[11]及深圳地區(qū)的17.50%[12],高危型HPV感染 (23.68%)明顯高于低危型HPV感染(4.36%),高危型以 16、52、58 亞型為主,而低危型以11、6亞型為主,與國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)(IARC)最新調(diào)查結(jié)果基本一致[13];在HPV感染患者中,單一亞型感染654例,占78.80%,明顯高于多重亞型感染,說(shuō)明該地區(qū)主要以單一亞型感染為主;多重感染者中以二重感染為主(占60.00%),另見(jiàn)一例七重感染者。據(jù)報(bào)道單一亞型感染可使宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加19.9倍,而多重HPV亞型感染可使宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加31.8倍[14],表明HPV多重感染增加了宮頸癌患病率。年齡是HPV及宮頸癌發(fā)病的另一相關(guān)因素,在所分析各年齡段中,以20~30歲、>50歲年齡段陽(yáng)性率較高,呈現(xiàn)“雙峰”狀,與Giulianu[15]報(bào)道基本一致,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為呈現(xiàn)此現(xiàn)象原因可能與性行為、性伴侶、激素及抵抗力等因素有關(guān)。

        綜上所述,HPV感染及HPV亞型分布存在地區(qū)差異,且與女性年齡相關(guān),因此非常有必要對(duì)不同地區(qū)的HPV感染特點(diǎn)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,為當(dāng)?shù)匦l(wèi)計(jì)委因地制宜地制訂最佳宮頸癌方案提供理論依據(jù)。

        [1]王敏,丁悅,溫展,等.宮頸上皮內(nèi)瘤變臨床特點(diǎn)及危險(xiǎn)因素分析[J].現(xiàn)代診斷與治療,2013 24(16):3754-3755.

        [2]Munoz N,Bosch FX,Castellsagué X,et al.Against which human papillomavirus types shall we vaccinate and screen?The international perspective[J].Int J Cancer,2004,111(2):278-285.

        [3]董玉蘭,徐冉,陳龍山,等.3394例女性患者宮頸人乳頭瘤病毒基因分型及臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(4):440-442.

        [4]孫曉燕.高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變的臨床診斷治療分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2014,9(11):35-36.

        [5]王敏,丁悅,溫展,等.宮頸上皮內(nèi)瘤變臨床特點(diǎn)及危險(xiǎn)因素分析[J].現(xiàn)代診斷與治療,2013,24(16):3754-3755.

        [6]趙連爽,陳靜靜,云科,等.沈陽(yáng)地區(qū)人乳頭瘤病毒感染分布及宮頸病變的相關(guān)分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,35(17):2280-2284.

        [7]吳兵,張崇移,李銘芬,等.人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸病變的相關(guān)性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué),2013,23(10):2377-2379.

        [8]王長(zhǎng)奇,王康,陳燕萍,等.HPV多重感染與宮頸病變關(guān)系的分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,2(30):166-168.

        [9]王樂(lè)見(jiàn),李招云,史春娟,等.2913例婦女生殖道人乳頭瘤病毒感染篩查分析[J].疾病監(jiān)測(cè),2009,24(11):849-851.

        [10]楊英捷,趙健,李雪倩,等.2285例女性下生殖道人乳頭狀瘤病毒感染篩查結(jié)果分析[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科,2006,22(6):444-445.

        [11]張健,孟和寶,力高,等.呼和浩特地區(qū)宮頸疾病患者人乳頭瘤病毒DNA分型檢測(cè)分析[J].華北國(guó)防醫(yī)藥,2010,22(2):124-125.

        [12]何桂蓉,武學(xué)成.深圳地區(qū)女性人乳頭瘤病毒基因類型分析[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2007,22(2):19-21.

        [13]陶萍萍,卞美璐,歐華,等.導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)在人乳頭狀瘤病毒檢測(cè)中應(yīng)用的研究[J].中華婦產(chǎn)科,2006,41(1):43-47.

        [14]Lee SA,Kang D,Seo SS,et al.Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPVDNA Chip[J].Cancer Lett,2003,198(2):187-92.

        [15]Giulianu AR,Lazcano-Ponce E,Villa LL,et al.The human papilloma virus infection in men study:human papillomavirus prevalence and type distribution among men residing in Brazil,Mexico and the United States[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2008,17(3):2036-2043.

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