梁月英，林建華

(東莞市鳳崗醫(yī)院檢驗科，廣東 東莞523690)

目前在我國胃癌的發(fā)病率和病死率都是惡性腫瘤中最高的[1]，胃癌發(fā)病是由于胃黏膜上皮細胞首先出現(xiàn)癌細胞病變引起的，在以往的研究中已發(fā)現(xiàn)的癌組織中[2]，程序性細胞死亡因子4(PDCD4)的基因含量下調(diào)甚至缺失[3]。本文是對人胃癌組織中PDCD4與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)表達及臨床意義的初步研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年6月至2013年3月這9個月間在我院進行治療的胃癌患者，入選患者均經(jīng)病理組織學(xué)診斷確診為胃癌，其中患者男性42例，女性18例，患者年齡在42~77歲之間不等，平均年齡為(67.43±2.2)歲，所有患者自愿參與本實驗，入院前簽署同意書。

1.2 檢測方法 (1)主要試劑：PDCD4兔抗人多克隆抗體(1:100，武漢三鷹公司)；DNMT1兔抗人多克隆抗體(1:100，北京博奧森生物公司)；SP9001三步法免疫組化檢測試劑盒，DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋公司)。(2)檢測方法：采用免疫化SP三步法，石蠟切片長規(guī)脫蠟，梯度乙醇脫水，過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化酶，使用0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液，在微波條件下進行熱修復(fù)，使用12%的血清封閉，滴加特異性抗體孵育，DAB顯色，在光學(xué)顯微鏡下進行觀察，將PBS作為陰性對照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 11.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以頻數(shù)表示，比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化染色結(jié)果觀察 見圖1。

圖1 PDCD4和DNMT1在胃癌和癌旁組織中的表達

2.2 PDCD4和DNMI1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 PDCD4和DNMTI的表達都與病理分型存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分型無顯著聯(lián)系(P>0.05)。見表1。

表1 PDCD4和DNMI1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 RT-PCR檢查結(jié)果觀察 胃癌組織中PDCD4mRNA、DNMT1 mRNA 表 達 量 (0.27 ±0.03)、(0.77±0.08)， 癌旁組織中 PDCD4mRNA、DNMT1 mRNA 表達量(0.27±0.03)、(0.46±0.09)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=22.381,t=18.013,P＜0.05)。

2.4 三組間PDCD4和DNMI1蛋白表達的比較DNMTI和PDCD4在胃癌組織、癌旁組織、正常組織中陽性含量為表現(xiàn)出相反的趨勢，胃癌組織與癌旁組織比較數(shù)據(jù)差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而胃癌組織、癌旁組織與正常組織相比較，數(shù)據(jù)差異不明顯，不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.5 PDCD4和DNMI1在胃癌組織中表達的相關(guān)性 經(jīng)表達相關(guān)性分析成負相關(guān)關(guān)系。見表3。

表2 三組間PDCD4和DNMI1蛋白表達的比較

表3 PDCD4和DNMI1在胃癌組織中表達的相關(guān)性

3 討論

PDCD4不僅能夠調(diào)節(jié)細胞程序性死亡[4，5]，還可以通過抑制蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和翻譯過程對癌細胞的增長產(chǎn)生抑制作用，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在密切聯(lián)系[6-8]。而DNMT1是人體內(nèi)普遍存在的基因，在基因表達過程中起著重要作用。已有研究表明DNMT1在結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、肝癌等眾多惡性腫瘤中表達均異常增高[9-11]，并會對腫瘤的分化程度、臨床分期、預(yù)后等產(chǎn)生影響。研究表明PDCD4蛋白能夠通過上調(diào)P21來減少細胞增殖速度[12]，可以在蛋白翻譯水平抑制癌細胞生成，目前科學(xué)家在結(jié)腸癌、肝癌等多種惡性腫瘤中檢測到PDCD4蛋白或mRNA顯著缺失或異常[13]。胃癌屬于常見的惡性腫瘤，發(fā)病率和病死率在我國均居癌癥首位，癌癥的發(fā)生和發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，需要多種細胞因子和酶的參與，這些細胞因子和酶中既有抑制基因活動的[14]，又有促進基因活動的。DNMT1是一種較早發(fā)現(xiàn)和掌握的控制細胞程序性凋亡的細胞因子，而PDCD4是近幾年才發(fā)現(xiàn)的與癌細胞繁殖過程有關(guān)的細胞因子，還需要進一步的研究明確其具體的作用機理[15]。

此次的研究研究采取免疫組化與RT-PCR進行檢測分析，與癌組織比較，胃癌組織中PDCD4表達均出現(xiàn)不同程度的下降，進一步說明PDCD4表達活性可能與胃癌發(fā)生發(fā)展具有緊密的聯(lián)系。而DNMT1在胃癌組織中的表達增加，且陽性表達率明顯的高于癌旁組織組織。進一步說明，DNMT1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵性的作用。經(jīng)過PDCD4和DNMI1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系分析，PDCD4和DNMTI的表達都與病理分型存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分型無顯著聯(lián)系 (P>0.05)。說明，PDCD4和DNMTI在胃癌發(fā)病進展過程中具有一定的作用。本實驗中，由表2可知DNMTI在胃癌組織、癌旁組織、正常組織中陽性含量為71.67%、61.67%、36.67%，PDCD4在胃癌組織、癌旁組織、正常組織中陽性含量為30%、50%、70%，表現(xiàn)出相反的趨勢，胃癌組織與癌旁組織比較數(shù)據(jù)差異不明顯，不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而胃癌組織、癌旁組織與正常組織相比較，數(shù)據(jù)差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。表1中PDCD4和DNMTI的表達都與病理分型存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。表明患者不同的分化階段，受到DNMTI和PDCD4的調(diào)控效果不同，抑制或促進效果都有所不同。表3中經(jīng)表達相關(guān)性分析成負相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，PDCD4和DNMTI的表達出現(xiàn)異常與胃癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切聯(lián)系，兩者表達成負相關(guān)關(guān)系。

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